Pax3a基因Homeobox domain结构域敲除斑马鱼的跨代遗传观察

目的:检测Pax3a的Homeobox domain结构域敲除后斑马鱼基因型和表型的稳定性.方法:利用CRISPR/Cas9技术双靶点整体敲除斑马鱼中Pax3a的Homeobox domain结构域,并建立F0代和F1代敲除斑马鱼.同时比较靶基因敲除的基因型和表型跨代遗传的影响.结果:两年的跟踪观察显示F1代Homeo...     

斑马鱼Pax3a结构域过表达对瓦登伯革氏症候群疾病影响

目的:探究斑马鱼PAX3直系同源基因Pax3a的结构域在多种组织细胞中的复杂功能.进一步了解哺乳类肌肉间质先祖细胞标志基因PAX3在胚胎发育、组织再生和肿瘤发生过程中发挥的重要作用.方法:构建斑马鱼Pax3a 4个保守结构域编码的过表达质粒,包括p-Paired box domain 3(PD3)、p-Homeobox domain (HD)、p-G protein-pathway-suppressor domain (GPD)和p-Paired box domain 7 (PD7),使用蛋白免疫印迹,细胞免疫荧光和实时荧光定量PCR方法验证体内外mRNA和蛋白水平表达,并进行体内胚胎显微注射和体外转染细胞.结果:胚胎发育变异表型的统计分析结果显示:每个结构域会引起斑马鱼胚胎产生较高比例的特异瓦登伯革综合征表型,比如白斑症、内眦外移、瞳孔变大等症状.在细胞学水平显示,每个结构域过表达对细胞迁移有不同影响.结论:Pax3a每个结构域有各自的作用通路,其功能增溢与PAX3基因突变均可产生瓦登伯革氏症候群.     

人源Krt5促进斑马鱼成纤维细胞丝状伪足形成和伤口愈合

目的:探究斑马鱼角蛋白Krt5和M1/M2型巨噬细胞极化因子调节斑马鱼下颌和心脏芽基可塑性再生过程的机制。方法:在斑马鱼胚胎成纤维细胞PAC2中过表达人源Krt5,添加4个代表性的巨噬细胞极化因子蛋白。在检测蛋白表达情况后，免疫荧光法观察Krt5和F-actin在PAC2细胞的分布变化；细胞划痕实验检测PAC2细胞迁移能力；转录组测序和免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析Krt5调控网络。结果:Krt5围绕着细胞核，在胞浆成束成网分布并扩展到细胞质膜；过表达Krt5增加鬼笔环肽标记的F-actin代表的细胞丝状伪足形成，并加快细胞迁移愈合；转录组分析显示，Krt5明显增加Rac2/Rhov、NF-κB、Mylkb、Ifnphi1、IL-13和IL-11的转录，降低多个胶原蛋白、肌动蛋白和TGF-β家族基因转录，同时IL-1β、IL-4、IL-6和IL-10诱导处理总体上与Krt5作用一致；IP-MS证实Krt5与α-辅肌动蛋白(Actn1)和非肌肉肌球蛋白重链(Myh9b, Myh10)紧密结合。结论:Krt5可能通过与肌动蛋白相互作用激活Rac/Rho机制从而促进细胞生成丝状伪足，重塑细...