慢性乙型肝炎发生、发展的免疫学机制及治疗新策略研究

乙型肝炎病毒(HBV)所致的慢性乙型肝炎,在当前和今后相当长时期内仍是危害我国人民健康的主要传染病之一.尽管经过推广新生儿乙肝疫苗接种使我国人群中HBsAg携带率由9.8％下降至7.18％,但我国仍属乙肝病毒感染较高的地区,仅现症的慢性乙型肝炎患者约3000万人,每年因慢性乙型肝炎相关疾病造成约30万人死亡.机体感染乙肝病毒后其临床转归比较复杂,有的可长期呈病毒携带状态(免疫耐受),有的则可在10～20年内进展至肝硬化乃至原发性肝癌.据统计约有10％～25％的慢性乙型肝炎病毒感染患者最终发展成HCC.     

正常人和AITD患者对碘致甲状腺细胞凋亡的不同敏感性

目的:探讨碘对体外培养的Grave s病(GD)、桥本氏甲状腺炎(HT)、正常人甲状腺滤泡上皮细胞(TEC)凋亡及相关蛋白表达的影响并明确正常人和自身免疫性甲状腺疾病(AITD)患者甲状腺细胞对碘的敏感性.方法:分离培养正常、GD和HT甲状腺细胞,给予不同浓度碘化钠(NaI)干预,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化检测各组Fas/Fasl表达的水平;比较各组细胞对碘致凋亡和凋亡蛋白表达的敏感性.结果:NaI可以使正常、GD、HT患者甲状腺细胞凋亡率增加(P<0.05),并使相关的凋亡蛋白及基因Fas/Fasl表达增加,但HT和GD甲状腺细胞凋亡和Fas/Fasl表达率较正常甲状腺细胞增加更明显,以HT患者甲状腺细胞加高碘培养后凋亡更多(P<0.05).结论:与正常人相比,AITD患者对高碘导致的甲状腺细胞凋亡更敏感.     

猪IL27p28蛋白分子的三维结构模建的研究

利用生物信息学手段分析了猪白细胞介素IL27p28（IL27p28）蛋白的二级结构及特征，并运用线索化／折叠识别方法模建了猪IL27p28蛋白分子的三维空间结构，它是一种与4-螺旋细胞因子超家族中的牛粒细胞集落刺激因子（GCSF）类似，并且含有多个功能结构位点的全α型蛋白质．在此基础上，结合氨基酸特性，分析其可能的功能位点，发现其中5个功能结构位点分布在蛋白质纵轴的两端，包括1个蛋白激酶C磷酸化位点，3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和一个N-豆寇酰化位点，推测蛋白质纵轴的两端是其重要的功能结构区域．     

运用磁珠分选法建立免疫细胞共培养体系

目的以相互作用的几种免疫细胞上共同表达的抗原物质为标志,运用磁珠分选技术,从慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中同时获得并建立体外多细胞共培养体系,体外观察细胞之间的相互作用.方法采用梯度离心法分离30例慢性乙肝病毒感染者外周血单个核细胞(PBMC),采用免疫磁珠分选法分离获得 CXCR5+细胞,通过流式细胞仪检测 CXCR5+细胞纯度和组成,并将 CXCR5+细胞进行体外培养.在分离得到的 CXCR5+细胞的基础上,将 CXCR5+细胞分为3组,分别为对照组:不加任何刺激;实验组一:加入 IL 21刺激培养,实验组二:与人肝癌细胞系(HepG2)2215细胞混合培养.体外培养一周后,流式细胞仪检测实验组与对照组细胞 B细胞数量变化,ELISA测定培养体系中上清液 HBe抗体的含量.结果1)用流式细胞仪鉴定 CXCR5+细胞的纯度和构成:CXCR5+细胞纯度为85.5±5.8%,其中 Tfh细胞占23.8±7.4%,B细胞占35.6±7.6%;2)培养7天后,IL 21刺激组 B细胞百分率为47.2±1.8%,与(HepG2)2215混合培养组 B细胞百分率为40.2±3.5%,空白对照组 B细胞百分率为36.6±7.5%,IL 21刺激组与对照组,(HepG2)2215混合培养组与对照组 B细胞百分率均有显著差异(p<0.05);3)ELISA检测培养液上清 HBeAb定量,IL 21刺激组为0.668±0.094pg/ml,空白对照组为0.378±0.088pg/ml,两组有显著差异(p<0.05).结论使用间接免疫磁珠分离法可成功建立 CXCR5+B淋巴细胞和 Tfh细胞的共培养体系,为进一步体外研究细胞之间相互关系奠定基础