以高效亲和色谱和石英晶体微天平生物传感器研究肽肽相互作用

本文利用高效亲和色谱（HPAC）和石英晶体微天平生物传感器（QCM）研究了正义肽与反义肽之间的特异性相互作用。选取人β-干扰素（1-14）片段作为正义肽,根据遗传密码的简并性设计了三条反义肽AS-IFN1、AS-IFN2和AS-IFN3。以所建立的以正义肽为配基的高效亲和色谱体系探讨了反义肽在亲和柱上的保留行为。在pH 7.5条件下,AS-IFN3,即谷氨酸取代的反义肽表现出与固定化正义肽最强的亲和相互作用。采用石英晶体微天平-流动注射分析系统（QCM-FIA）实时考察了正义肽与反义肽的动态相互作用。正义肽和反义肽AS-IFN1、AS-IFN2、AS-IFN3之间的平衡解离常数（K_D）分别为2.08×10^-4、1.31×10^-4和2.22×10^-5 mol/L。对正义肽与反义肽的识别作用机理亦进行了探讨,认为正义肽与反义肽AS-IFN3之间特异性的识别是基于序列依赖性和多模式协同亲和作用的结果。