Survivin基因沉默对鼻咽癌CNE-2细胞株恶性表型的影响

目的:探讨RNA干扰技术沉默Survivin基因对鼻咽癌细胞CNE-2恶性表型的影响.方法:设计、合成针对Survivin基因的干扰序列,并将干扰序列构建至pGCsi/U6/GFP载体,稳定转染CNE-2细胞;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot鉴定干扰效果;经四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、平板克隆形成实验分析沉默Survivin基因后,CNE-2细胞生长速度、细胞周期及恶性表型的改变.结果:沉默Survivin基因后,CNE-2细胞Survivin mRNA、蛋白质表达水平均明显下调;细胞生长速度下降,G1期细胞增多,S期细胞减少,克隆形成能力明显减弱.结论:Survivin基因在CNE-2细胞生长、细胞周期及恶性表型等方面都起着重要的作用.     

福辛普利钠预处理对缺血后适应大鼠心肌组织Toll样受体表达及炎症因子的影响

大鼠预先灌胃福辛普利钠, 观察其和缺血后适应(ischemic postconditioning, IPoC)对大鼠心肌缺血再灌注(ischemic reperfusion, I/R)损伤后心肌组织Toll样受体(toll-like receptor, TLR)表达及心肌组织炎症浸润的影响. 将60只SD (Spragu-Dawley)大鼠随机分为假手术组、I/R组、IPoC组以及福辛普利钠+IPoC组, 每组15只. 假手术组大鼠心脏前降支下置线不结扎; I/R组予以心脏前降支结扎30 min, 再灌注1 h; IPoC组给予心脏前降支结扎30 min, 后予以3次10 s的再灌注/缺血循环, 再持续灌注1 h; 福辛普利钠+IPoC组则预先给予福辛普利钠片0.9 mg/kg, 连续灌胃14 d, 于末次灌胃2 h后, 施以IPoC组的干预过程. 所有实验大鼠腹主动脉取血并分离出心脏组织. 比色法测定血清肌钙蛋白T (cardiac troponin T, cTNT)的含量, NBT染色测定大鼠左室心肌梗死面积, 酶联免疫吸附测定法测定心肌组织单核细胞趋化蛋白-1 (monocyte chemotactic protein-1, MCP-1)和肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)水平. 免疫组织化学方法测定心肌组织TLR2及TLR4的表达, HE染色观察心肌组织炎性细胞的浸润. 结果表明, 与I/R组比较, IPoC组大鼠心肌梗死面积明显缩小(P<0.01), 大鼠血清cTNT水平显著降低(P<0.01), 心肌组织MCP-1, TNF-α含量和炎性细胞浸润数量明显下降(P<0.05, P<0.01), 心肌组织TLR2及TLR4的表达被显著抑制(P<0.01); 与IPoC组比较, 福辛普利钠预处理可进一步降低IPoC大鼠心肌梗死面积(P<0.05), 心肌组织TNF-?水平也显著降低(P<0.01), 对心肌TLR2及TLR4的表达有进一步抑制(P<0.05). 血管紧张素转化酶抑制剂福辛普利钠预处理可加强IPoC对I/R大鼠心肌的保护作用, 其机理可能与抑制TLR介导的炎症信号通路和趋化因子反应有关.     

紫杉醇对低分化鼻咽癌细胞株CNE-2生长凋亡的影响及Survivin mRNA的表达变化

目的:探讨紫杉醇对低分化的鼻咽癌细胞株CNE-2生长抑制率、凋亡的影响以及凋亡抑制基因Survivin的变化.方法:通过MTT法计算紫杉醇作用CNE-2细胞后的生长抑制率,通过流式细胞仪检测紫杉醇对CNE-2细胞凋亡及细胞周期的影响并应用One Step RT-PCR法检测Survivin mRNA表达的变化.结果:观察到CNE-2细胞对紫杉醇具有时间和剂量的依赖性.10-9～10-7 mol·L-1的紫杉醇作用后,随着时间的增加,细胞的凋亡率也明显增加.低浓度的紫杉醇(10-9～10-8 mol·L-1)作用细胞后,并没有出现G2/M期的累积.而当浓度达到10-7 mol·L-1作用24 h后便出现明显的G2/M期阻滞,但48 h后这种阻滞又出现下降.CNE-2细胞被高浓度的紫杉醇(10-7～10-6 mol·L-1)作用24 h后,Survivin mRNA的表达反而显著增加(P＜0.05),低浓度紫杉醇则对Survivin mRNA的表达无影响.10-7 mol·L-1紫杉醇作用CNE-2细胞后,Survivin mRNA表达明显增加并持续到48 h,72 h后则又降至对照组水平.结论:紫杉醇作用CNE-2细胞后可以出现早期明显的G2/M期累积,这种现象可能与Survivin基因表达上调有一定关系.