虎纹捕鸟蛛毒素-IV突变体K27A-HWTX-IV的合成和复性及其生物学活性研究

用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成的方法在固相多肽合成仪上合成了用丙氨酸代替虎纹捕鸟蛛毒素—Ⅳ的第27位的赖氨酸的突变体K27A—HWTX—Ⅳ，通过反相HPLC对不同条件下突变体的氧化复性结果进行监测，摸索出其最佳氧化复性条件为：0．1mol／L Tris—HCl，pH8．0，GSH 1 mmol／L GSSG 0．1mmol／L的复性缓冲液，样品浓度为0．1mg/mL。复性产物经HPLC纯化并用基质辅助激光解吸飞行时间质谱法进行鉴定，相对分子质量为4050．63Da。生物学活性实验小鼠离体膈神经—膈肌标本测活实验表明：10μg/mL天然HWTX—Ⅳ阻断小鼠离体膈神经,膈肌接头传递时间为16min，10μg/mL复性后的突变体阻断小鼠离体膈神经．膈肌接头传递时间为120min，残基的替换导致突变体生物学活性比天然毒素少，证明了第27位的赖氨酸为虎纹捕鸟蛛毒素—Ⅳ活性相关的残基。