草鱼和赤眼鳟正交F_1(♀)回交子代的形态学分析

为探讨草鱼、赤眼鳟正交F1(♀)与亲本(♂)回交子代的形态特征,实验运用传统形态学测定与现代框架测定相结合的方法,测定并分析了草鱼(♂)、赤眼鳟(♂)、正交F1(♀)(草鱼♀×赤眼鳟♂)、草鱼回交子代(草鱼♂×正交F1♀)、赤眼鳟回交子代(赤眼鳟♂×正交F1♀)的可量可数性状。结果表明:回交子代的生长性能显著高于亲本(P0.05),回交子代与其亲本具有相似的头部的特征和眼睛颜色;回交子代与双亲的侧线下鳞数存在显著性差异(P0.05),回交子代的超亲本可量性状占80.00%,成功建立了可有效区分5种鱼的方法,为后续的选育工作提供基础。     

鲢（Hypophthalmichthys molitrix）IL-10基因的克隆及表达分析

白细胞介素10（IL-10）是一种作用广泛的抗炎细胞因子，主要功能是限制和最终终止炎症反应. 用RACE （rapid amplification of cDNA ends）-PCR方法扩增出鲢白细胞介素10（IL-10）的cDNA，其全长为1248nt，包含5′非编码区156nt，3′非编码区552nt，开放阅读框540nt．鲢IL-10的开放阅读框编码179个氨基酸，其中包含构成两对二硫键的4个保守半胱氨酸．RT-PCR结果显示鲢IL-10mRNA主要在脾脏、鳃、头肾和肌肉中表达．将鲢IL-10完整开放阅读框克隆到原核融合表达载体pET-32a-c（+）上，转入大肠杆菌Rosetta-gami（DE₃） 内进行表达，经SDS-PAGE电泳后显示重组融合蛋白在分子量约39ku处有明显表达带，与预期分子量大小一致，且主要以不可溶的包涵体形式存在．变性条件下利用His·Bind树脂成功纯化了融合蛋白，将其免疫家兔，获得兔多克隆抗鲢IL-10抗体，Western blot检测到兔多克隆抗鲢IL-10抗体可有效地与重组蛋白结合．这些结果为进一步研究IL-10的功能奠定了基础．     

鳜鱼和鲢鱼不同组织微管蛋白表达差异分析研究

采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,Western-blotting和酶联免疫反应技术(ELISA),对三种微管蛋白(α,β,γ-tubulin)在鳜、鲢两种鱼的脑、心、脾、肾四种组织中的表达差异进行了比较.实验表明:鳜鱼α-tubulin的表达在心、脑、脾、肾中逐渐减弱;β-tubulin含量的递减顺序为脑、心、肾、脾;而脾、肾、脑、心中γ-tubulin的表达量依次减小.鲢鱼中三种微管蛋白的表达依次为:肾、脑、心、脾(α-tubulin);肾、脾、心、脑(β-tubulin),肾、脾、脑、心(γ-tubulin).两种鱼之间不同组织中的三种微管蛋白在量上的差异也较为明显.研究结果说明微管蛋白的表达具有明显的种属和组织差异性,这种差异性可能与其组织功能相关.     

草鱼原肌球蛋白基因的克隆及其组织表达

为揭示原肌球蛋白基因在草鱼肌肉中的作用,利用RT-PCR和RACE技术克隆获得了草鱼原肌球蛋白基因c DNA,并对该基因在普通草鱼和脆肉鲩不同组织中的表达情况进行研究分析。结果表明原肌球蛋白基因c DNA全长序列为1 705 bp,包含387 bp的5′UTR序列,1 307 bp的3′UTR序列和855 bp开放阅读框(ORF)。其ORF编码284个氨基酸。系统进化分析表明普通草鱼与斑马鱼、墨西哥脂鲤的原肌球蛋白基因核苷酸同源性分别是93%和87%,氨基酸同源性分别是96%和93%。在聚类上普通草鱼原肌球蛋白基因与其他鲤科鱼类同源性较高,表明亲缘关系最近,与传统分类相一致。Real time-PCR结果表明原肌球蛋白基因在所检测的普通草鱼和脆肉鲩7个组织中均有表达,原肌球蛋白基因在普通草鱼腹肌中表达最高,其次为前肠。原肌球蛋白基因在脆肉鲩腹肌中的表达低于普通草鱼,而脆肉鲩中肌肉、肝脏、肾脏、前肠、后肠中原肌球蛋白基因表达量大于普通草鱼相对应组织,但差异不显著。     

中国大鲵胚胎发育形态特性比较研究

通过观察在全人工繁育条件下大鲵的胚胎发育及器官的形成过程,对比仿天然生态养殖的大鲵胚胎发育过程,对大鲵从受精卵到孵化为幼苗出膜进行了连续系统的形态学观察.结果发现:人工繁育的大鲵在胚胎发育至神经胚期和器官形成期,有明显的"神经沟出现"、"视泡形成"和"心脏跳动"的特征,因而在传统分期的基础上增加了"神经沟期"、"视泡形成期"和"心脏跳动期",从而将大鲵的胚胎发育过程细化为23个时期;虽然同种大鲵的人工繁育和仿生态养殖方式绝大部分发育时期的外形特征基本相同,但在卵裂期和神经胚期依旧存在差异;并利用人工繁育技术,提高其孵化率,为进一步研究大鲵的人工繁育提供理论基础和实验材料.     

三角帆蚌theromacin基因克隆及其表达分析

为了构建一个theromacin抗菌肽基因(theromacin)融合表达载体并使其成功表达,通过RT-PCR扩增出三角帆蚌theromacm的开放阅读框序列,将其亚克隆到pUCm-T载体中,转Escherichia coli DHSa,经菌液PCR初步检测及测序验证后同pET32a(+)载体经酶切、纯化及连接,转入到...     

草鱼、赤眼鳟及其杂交F_1的形态差异分析

为了研究正交F1(草鱼♀×赤眼鳟♂)、反交F1(赤眼鳟♀×草鱼♂)的形态特点,采用传统形态学测定与现代框架测定结合的方法,测定了杂交F1及其亲本的可量可数性状,并进行了相关统计分析。结果显示:草鱼、赤眼鳟及正、反交F1在体型、体色、眼睛、鳞片以及口须等性状上有差异;杂交F1的胸鳍分支鳍条、侧线鳞数、侧线下鳞数与赤眼鳟差异显著(P0.05);正交F1的体宽超亲本偏离,反交F1的吻长、口长、口裂长、眼间距、尾鳍长超亲本偏离;聚类结果表明杂种F1的传统可量性状偏赤眼鳟遗传,框架性状偏草鱼遗传;构建了4个群体的判别函数,其判别准确率均为100%。综上所述,杂交F1综合了双亲特点,且存在杂种优势性状,可考虑作为新品种开发。     

鳜鱼基因组(AC)n微卫星富集文库的构建与鉴定

鳜鱼基因组DNA经MseI酶切后,与MseI接头连接,用链霉素和素磁珠亲和捕捉与生物素标记的微卫星寡核苷酸探针(CA)8杂交,杂交复合物通过变性洗脱获得单链目的片段,经PCR扩增形成双链,然后克隆到pGEM-T 载体上,转化至大肠杆菌DH5α中,首次成功构建鳜鱼(Siniperca chuatsi)基因组(AC)n重复类型的微卫星富集文库.测序结果表明,阳性克隆率为60%,说明构建的鳜鱼基因组微卫星富集文库是一个高质量的文库.鳜鱼富集微卫星文库的建立将为下一步进行鳜鱼微卫星标记的筛选提供了有效的工具.     

大鲵细菌性败血症的组织病理学观察

用光镜观察患有细菌性败血症的大鲵的血液涂片以及进行血液病理学检测,结果显示患病大鲵的血细胞形态、数量及比例异常,血清中总蛋白、免疫球蛋白、肌酐、血清铁、尿酸、酯蛋白等指标值均明显低于正常值,谷丙转氨酶明显升高;采用常规石蜡切片技术制作病理切片,对患细菌性败血症大鲵的不同组织进行病理学观察,结果表明,患病大鲵的肺、胃、肠、肝、胰等组织器官发生了不同程度的病变,其病理特征主要表现为:细胞肿大、变性、坏死,多数组织淋巴细胞增多等.患细菌性败血症大鲵的血液、消化和呼吸器官均出现严重病变,功能遭到破坏,这可能是导致其发病死亡的病理学基础.     

斑点叉尾鮰细菌性败血症的组织病理研究

对具有典型细菌性败血症症状的斑点叉尾鮰进行了系统的病理研究,组织性病变主要表现为:鳃小片上皮细胞增生,相互融合在一起呈板块状,呼吸上皮细胞肿胀变性;肠上皮细胞变性、坏死、脱落,固有膜和黏膜下层毛细血管扩张淤血;肝细胞肿胀,空泡变性,甚至发生坏死,肝细胞索结构排列紊乱;胃黏膜上皮细胞变性、坏死、脱落,固有膜毛细血管扩张充血,部分固有膜裸露;肾小管上皮细胞肿胀、变性、坏死,肾小球、肾间质出现水肿、出血现象;肌纤维明显肿胀断裂,出现团块状均质化变性,或发生不规则溶解.