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通过不同梯度浓度的桦木酸处理SGC-7901细胞,研究桦木酸对细胞自噬相关基因表达的影响,从而确定桦木酸在胃癌细胞内与自噬的关联．将人胃癌SGC-7091细胞分为5组,其中3组设置桦木酸的浓度梯度分别为10,20,30mg/L,使用经典抗癌药物氟尿嘧啶（5-Fu）作为阳性对照组,使用0 mmol/L桦木酸为阴性对照组,每组3个复孔,处理细胞48 h,用q RT-PCR和Western blot方法检测桦木酸对人胃癌SGC-7091细胞自噬相关基因mRNA和蛋白表达的影响,使用免疫荧光法定位并检测SGC-7091细胞内的LC3蛋白．与阴性对照组相比,梯度桦木酸处理组的细胞中LC3-Ⅱ,Beclin 1mRNA和蛋白的表达均显著升高（P<0.01）,LC3-Ⅰ蛋白的表达明显降低（P<0.05）．同时激光共聚焦的结果显示高浓度桦木酸诱导LC3蛋白在细胞质内的聚集现象．在设置的梯度浓度范围内,桦木酸能诱导人胃癌SGC-7091细胞发生自噬,且呈剂量依赖性,浓度升高诱导效果也升高． 相似文献
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利用CRISPRi技术构建靶向MRP1的干扰载体,采用生物信息学分析MRP1的启动子序列,设计并合成3对sgRNA干扰片段,构建3种靶向MRP1的干扰表达载体,分别转染A549和A549/DDP细胞后,通过q RT-PCR和Western blot方法检测MRP1 mRNA和蛋白的表达情况,MTT法检测细胞对川楝素的敏感性,激光共聚焦显微镜下观察细胞的形态学变化．结果表明,基因测序证实成功构建了3种干扰载体,分别转染干扰载体至A549/DDP细胞48 h后MRP1 RNA和蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）,其中sgRNA-MRP1-2干扰效果最好;将sgRNA-MRP1-2转染并使用60 nmol/L川楝素处理后,细胞对川楝素的敏感性显著增加,IC50值显著降低（P<0.01）,细胞形态由梭形变为椭圆形,染色质高度凝聚、边缘化． 相似文献
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