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利用CRISPRi技术构建靶向MRP1的干扰载体,采用生物信息学分析MRP1的启动子序列,设计并合成3对sgRNA干扰片段,构建3种靶向MRP1的干扰表达载体,分别转染A549和A549/DDP细胞后,通过q RT-PCR和Western blot方法检测MRP1 mRNA和蛋白的表达情况,MTT法检测细胞对川楝素的敏感性,激光共聚焦显微镜下观察细胞的形态学变化．结果表明,基因测序证实成功构建了3种干扰载体,分别转染干扰载体至A549/DDP细胞48 h后MRP1 RNA和蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）,其中sgRNA-MRP1-2干扰效果最好;将sgRNA-MRP1-2转染并使用60 nmol/L川楝素处理后,细胞对川楝素的敏感性显著增加,IC50值显著降低（P<0.01）,细胞形态由梭形变为椭圆形,染色质高度凝聚、边缘化． 相似文献
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