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以人凝血因子Ⅶ(FⅦ)cDNA和编码力达霉素(LDM)辅基蛋白LDP的质粒(pETVH-LDP)为模板,通过PCR及搭桥PCR构建原核表达人凝血因子Ⅶ轻链(the light chain of FⅦ,lhFⅦ)和LDP融合蛋白lhFⅦ-LDP的重组质粒pET19b-lhFⅦ-LDP.重组质粒转化感受态表达菌株E.coli Rosetta-gami B(DE3)pLysS,诱导表达后亲和纯化,并以Western blot鉴定得到的融合蛋白lhFⅦ-LDP.将lhFⅦ-LDP与LDM的烯二炔发色团(AE)进行分子组装制备强化融合蛋白药物lhFⅦ-LDM.用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,co-IP)检测lhFⅦ-LDP与人肺腺癌细胞A549组织因子(TF)的结合特异性,并通过裸鼠移植瘤实验研究lhFVⅡ-LDM对A549细胞体内致瘤性的影响.结果显示,lhFⅦ-LDP能够与TF特异性结合,并且,强化融合蛋白lhFⅦ-LDM能够显著抑制A549细胞的体内致瘤性. 相似文献
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