丝状真菌米曲霉外源基因表达系统的构建

以米曲霉Aspergillus oryzae RIB40的基因组DNA为模板,PCR扩增得到启动子、终止子、筛选标记基因等表达元件,依次连接到载体pUC119上,构建了米曲霉的重组表达载体pNMA. 将米赫根毛霉脂肪酶基因(RML)连接于pNMA的启动子下,得到表达载体pNMA-RML,通过ApaI酶切线性化转化米曲霉宿主菌A.oryzae niaD300,得到整合型的阳性转化子A.oryzae ONL1. 其培养7天的培养液上清在以三丁酸甘油酯为底物的平板上形成清晰的水解透明圈,碱滴定法酶活测定表明培养液酶活可达2.5 U/mL,培养液上清的SDS-PAGE图谱在32.5 kDa处有RML的特征条带. 以上结果表明RML已经在米曲霉中成功表达,同时证明所构建的米曲霉外源基因表达系统是有效的.     

Mining rice new germplasm containing S5n gene by functional molecular marker and sequencing

Inter-subspecific hybrids between indica and japonica varieties yield strong biological heterosis, but it is difficult to utilize the hybrids directly in commercial production due to sterility of F1. A special gene S5^n may overcome the hybrids sterility, which is caused by the interaction between S5 loci. Recently, S5^n had been cloned, and it was revealed containing a large DNA deletion sequence that made the gene nonfunctional, compared to S5^i or S5^j. We designed a pair of primers flanking the deletion sequence of Ssn, and then applied to distinguish the varieties with S5^n or non-S5^n, convincing result suggested that the primers could be served as functional molecular marker to efficiently identify the new germplasm with S5^n, Using the functional marker, we surveyed 197 varieties from China National Micro-core Rice Collection, and found ten of which represented S5^n including following varieties： Haobuka, Sanbangqishiluo, Mubanggu, Xiaohonggu, Mowanggu＇neiza, Laozaogu, Fanhaopi, Feie＇nu02, Baoxie-7B, Teqingxuanhui. Among them, two varieties Sanbangqishiluo and Laozaogu was previously reported to contain S5^n gene. Further sequence analysis on the DNA sequence covering both sides of deletion in S5^n of the 10 varieties confirmed that the detected sequences in above varieties was identical with those of varieties containing S5^n, such as 02428 and Linglun. These results suggested that the gene in S5 locus of the ten varieties was also nonfunctional and it proved the presence of S5^n gene.     

盐藻的无菌培养及其抗生素标记的选择

对影响盐藻生长的NaNO3、NaH2PO4、NaHCO3和VB1、VB12、VH等几种主要营养盐进行了优化,在单因素实验的基础上做了四因素三水平正交实验,实验结果得出优化配方为N／P值固定为f／2培养基,NaNO3和NaH2PO4添加量为f／2培养基的10倍、NaHCO3 0．4g/L、VB1 100μg／L、VB12 1．0μg/L,其他元素按f／2培养基添加．对盐藻的选择标记进行了研究,选择了氯霉素、G418、潮霉素3种抗生素进行实验,得出氯霉素适合作为盐藻基因工程的筛选抗生素,CAT基因为其阳性筛选标记基因,固体培养基筛选浓度为80μg／mL．为该藻的进一步高密度大规模培养和分子水平的研究提供了依据．     

大鼠肝卵圆细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除（parital hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心给合免疫磁珠分离方法卵圆细胞（oval cell,OC）.用卵圆细胞标志蛋白OC2和OV6的免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver,RL）、分散的肝脏细胞及分离的卵圆细胞,用RT-PCR定量卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量卵圆细胞的OC2和OV6蛋白.初步证实分离的肝卵圆细胞中,OC2和OV6阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的肝卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离肝卵圆细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用.     

AFLP技术在昆虫分子系统学研究中的应用

概述了AFLP分子标记技术在昆虫分类鉴定、遗传图谱构建、遗传多样性分析、群体遗传结构和分化、生态型分析等分子系统学应用研究方面取得的较大进展．总结了AFLP的改进技术,并提出对相关问题的思考．     

牛蒡子炮制前后质量标志物的网络药理学研究

研究牛蒡子炮制前后质量标志物的药效作用靶点,构建“成分-靶点-疾病”作用网络,解释牛蒡子炮制机理。 通过PharmMapper数据库筛选牛蒡子炮制前后6个质量标志物成分的潜在作用靶点,通过STRING数据库构建靶点蛋白相互作用网络;采用Cytoscape软件构建“成分-靶点-疾病”网络图。牛蒡子炮制前后质量标志物成分可通过多靶点作用,在抗肿瘤、抗炎、心脏损伤保护、抗高血压等方面发挥作用,且各个成分的相关作用靶点相互交联,共同发挥多靶点药效作用。通过网络药理学方法揭示了牛蒡子炮制前后质量标志物的主要药效作用,为进一步深入揭示其炮制机理提供了科学依据。     

地被菊六个品种的引种研究

文章报道了地被菊在海南引种的适应性情况。结果表明地被菊生长发育及表现的园艺性状良好。其中三个品种的花期明显长于其它品种;总结了一套适合海南地区的地被菊栽培技术。     

葡萄抗霜霉病基因RAPD标记的序列分析

用WizardDNAClean upSystem纯化葡萄抗霜霉病基因RAPD遗传标记OPO 0 6 - 150 0片段 ,用T easyVector克隆RAPD标记 ,采用自动荧光DNA测序仪 (型号ABI 377DNASe quencer)测定了该DNA片段的核苷酸组成及其排列顺序 .来自中国野葡萄的RAPD标记OPO 0 6- 150 0从左右两端各测了 586bp和 4 52bp .对两端序列的酶切位点进行了分析 .根据两端序列可以设计专一PCR扩增引物作为合成抗霜霉病检测探针的基础 ,用于检测葡萄抗病育种和抗病品种的霜霉病抗性 .     

神农架国家级自然保护区毛茛科植物的区系分析

对神农架国家级自然保护区毛茛科植物进行区系分析研究 ,结果表明 :该地区毛茛科植物种类异常丰富 ,共计 1 9属 97种 ;分布类型以温带分布区为主 ,属的温带分布区类型占 81 2 5% ;该地区区系成份丰富多彩 ,不仅是连接南北植物区系的纽带 ,而且还是中国 日本植物区系和中国 喜玛拉雅区系的交汇点 .UPGMA聚类结果表明 :神农架毛茛科植物区系成份与我国西南山区最为接近 ,其次与华中地区 ,东北 ,日本等地区也有较高的相关性 .     

动物遗传标记概述

文中综述了几种常用的遗传标记方法及其各自的优缺点,着重对分子遗传标记作了较系统的阐述。