麦芽寡糖基海藻糖合酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

应用PCR方法，从芝田硫化叶菌B12中扩增了麦芽寡糖基海藻糖合酶基因（TreY），扩增产物大小为2．2kb，将扩增片段与pUCm-T连接，得到重组质粒pUCm-T-TreY，CaCl2法转化DH5α，并筛选阳性克隆。用BamHI／Ndel分别双酶切pUCm-T-TreY和表达载体pET21a，连接后得重组pET21a-TreY，转化大肠杆菌DE3并进行了表达。表达产物经SDS-PAGE分析，得到一条分子量约为74kDa的特异条带，同核苷酸序列所推导的值相符。     

离子束诱变中Bacillus fordii MH602菌体保护剂的研究

离子束诱变过程中,菌体细胞较长时间处于干燥、营养贫瘠的条件下,死亡率高,本研究比较了在干燥、营养贫瘠条件下,多种寡糖对对数生长期的嗜热海因酶产生菌Bacillus fordii MH602菌体细胞的保护作用．海藻糖效果显著,其最佳保护剂量为2％;同时证明海藻糖的保护作用没有对离子注入效应产生负面影响;首次报道了在离子束诱变技术中采用海藻糖作为保护剂提高突变率和诱变效果．相关结论对于抗干燥性能较差的微生物采用离子束诱变技术进行菌种选育具有实际指导作用．     

谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)海藻糖合成酶的定点突变及其酶学性质研究

以已知晶体结构的Pseudomonas mesoacidophila MX-45菌株海藻酮糖合成酶（MutB）的晶体结构为模板,在SWISS-MODEL模建立谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）海藻糖合成酶的立体结构,并对初始结构作能量优化,通过氨基酸序列比对,选择TreS-glu保守区内的氨基酸R245、D247、E289、F244和保守区外的氨基酸A288进行定点突变,并对突变酶F244C、F244L、F244W、F244Y、A288G、R245X、E289X、D247N、D247E进行纯化和酶学性质研究,比较突变子对酶活性和热稳定性的影响。结果表明,R245、E289突变为其它的19个氨基酸后酶活力全部丧失,D247E和D247N也丧失酶活,F244C、F244L、F244W、F244Y和A288G的比活力分别降低到TreS-glu的38%、24%、62%、64%和35%,A288突变成T288后没有酶活。与TreS-glu相比,F244C、F244W、A288G的Km值基本不变,F244L、F244Y对底物麦芽糖的亲和力降低,F244Y的最适反应温度和TreS-glu相同,均为27℃,而F244C、F244L、F244W和A288G的最适温度提高到32℃。与TreS-glu相比,突变酶的最适反应pH值均有所下降,其中F244C、F244Y和A288G的为7.5,比TreS-glu的8.0均下降了约0.5个单位,而F244L和F244W的为6.5,比TreS-glu的8.0均下降了近1.5个单位。与TreS-glu相比,突变酶的热稳定性均有不同程度提高,其中F244Y、F244W和A288G的Tm值比TreS-glu的提高约1℃,F244L提高约2℃,F244C提高了近4℃。     

Shock induces a long-lasting elevation of blood glucose inAplysia

Glucose, and not trehalose, was found to be the main blood sugar inAplysia californica. Changes in blood glucose in response to stress produced by electric shock were measured in blood obtained both from animals dissected within ten minutes of shocking and from catheterized animals at various intervals, up to two and a half hours after the shock. Electric shock increased blood glucose levels. The rise in blood sugar continued as long as two and a half hours after shock.     

海藻糖与脂质膜相互作用的研究

以蛋黄卵磷脂 (EPC)为模型 ,通过测定相变发生时卵磷脂吸热量的变化及卵磷脂脂肪酸链CH2 基团的对称伸展振动频率变化 ,阐明了海藻糖对蛋黄卵磷脂 (EPC)脂质膜相变的影响 ,并对其作用机理进行探讨 .FTIR红外光谱分析表明 ,海藻糖之所以能在相变温度以上将脂质膜维持在双层相 ,是由于海藻糖和磷脂酰胆碱的头部基团形成氢键 ,这是一种直接相互作用的结果     

长白山天池水中一株产海藻糖菌种的鉴定

从长白山天池水中分离得到一株产海藻糖的菌株 Ｃ Ｂ３９, 并进行鉴定． 结果表明, 该菌株为胶样菌属（ Ｃｏｌｌｏｉｄｅｓ）的一个新种     

角膜内皮体外模型玻璃化法保存研究

以牛角膜内皮细胞在培养至融合时的单层细胞作为角膜内皮的体外模型,采用两种玻璃化溶液,考察玻璃化过程对细胞活性的影响.首先以光学显微镜和扫描电镜考察了体外模型的细胞形态和胞间连接情况,发现培养的角膜内皮细胞融合后无论是细胞形态和胞间连接都与天然的角膜内皮相近.然后用低温显微镜考察了两种玻璃化溶液在升降温过程的结冰情况,发现两玻璃化溶液在100 ℃/min的降温和升温速率下都能玻璃化且反玻璃化较弱.设计了一套保护剂的导入和洗脱方案,使得内皮细胞的体积变化维持在-50%～40%.最后以CCK-8试剂盒考察了玻璃化溶液的毒性和细胞经冷冻后的活性,发现VS2的毒性比VS1强;经VS1和 VS2冷冻后的细胞活率分别为61.3%和51.7%,这说明VS1的保存效果比VS2好.     

口服茯苓多糖硫酸酯前体脂质体的制备及其抗凝血活性研究

茯苓多糖硫酸酯(Pachyman Sulfate,PS)具有和肝素相似的抗凝血活性和机制,研制PS口服制剂意义显著.以氯磺酸-吡啶法制备PS,以海藻糖为载体、薄膜蒸发法制备PS前体脂质体口服制剂,并初步研究其抗凝血活性.PS得率97%,硫酸根取代度3,重均分子量9 978 Da;PS前体脂质体为乳白色粉末,重建脂质体为球状或近球状小囊泡,形态完整,粒径较均匀,有效粒径分布范围在0.7~1.4μm之间,多分散指数小于0.4,zeta电位小于-25 mV,分散性好.重建载药脂质体包封率为20.3%,大鼠口服重建载药脂质体后凝血时间延长率达46%,且有统计学意义.重建空白脂质体有助于PS的口服吸收,且脂质体包封PS后吸收效果更好.     

不同糖对纤维素酶保护的机理研究

旨在通过测量海藻糖、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖、纤维素酶以及纤维素酶分别与这些糖的混合物的红外光谱和差示扫描量热谱图，研究糖和纤维素酶分子间的相互作用，推测海藻糖对纤维素酶保护的机理。结果表明，海藻糖的羟基同酶分子以氢键的形式结合提高了酶的热变性温度，增加了酶的热稳定性。另一方面，海藻糖分子包裹在酶分子周围，或填充在酶分子的空间结构内，特别是酶的活性部位附近，并形成玻璃态，将酶蛋白的空间结构固定住而避免酶的失活。     

纤维微菌海藻糖合成酶基因克隆表达及酶学特性鉴定

【目的】开发适用于海藻糖生产的新型海藻糖合成酶。【方法】通过反向PCR技术,从一株纤维微菌的基因组DNA中获知海藻糖合成酶基因完整ORF序列,进而克隆得到纤维微菌海藻糖合成酶基因(CCTreS),将其与表达载体pSE380构建重组质粒后转入大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达,通过镍柱亲和层析纯化得到纯酶并进行酶学性质测定。【结果】从纤维微菌中克隆并在大肠杆菌中成功表达海藻糖合成酶基因(CCTreS)。经纯化获得的重组酶(CCTreS)在以麦芽糖为底物生成海藻糖时,最适反应pH值为7.0,最适反应温度为45℃,40℃保温1h仍具有80%以上的相对酶活力,在pH值5.5~8.5保存24h,相对酶活力仍保留80%以上。Cu~(2+)对其有明显抑制作用。【结论】该重组酶具有很好的热稳定性和pH稳定性,具有一定的研究价值和潜在的工业应用价值。