A transgenic wheat with a stilbene synthase gene resistant to powdery mildew obtained by biolistic method

Stilbene, a kind of phytoalexin, plays an important role in resistance to fungal and bacterial infection in plants. It strongly inhibits the growth of fungi and sprout of spore. Stilbene synthase gene (Vst1) obtained from grapevine has been transferred into common spring wheat Jinghong 5 by using the biolistic transformation method. Five transgenic plants (T₀) were obtained from the bombarded 2014 immature embryos. One immune plantlet and 3 plantlets with mid-resistance to powdery mildew were identified from the transgenic plants of T₃ generation which came from 2 T₀ transgenic plants.     

eNOS基因27bpVNTR多态性与新疆哈萨克族原发性高血压的相关性研究

探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因27bpVNTR多态性与新疆哈萨克族原发性高血压(EH)的相关性。采用流行病学的病例-对照研究方法,运用多重单碱基延伸分型技术(Multiplex sNaPshot)技术对新疆哈萨克族363名高血压患者(病例组)和370名健康人(对照组)进行eNOS基因27bpVNTR多态性分析,比较基因型、等位基因在病例和对照组中的分布频率与原发性高血压的相关性分析。27bpVNTR基因型bb、aa、ab、bc在对照组和病例组中分布频率分别为78.6%、1.1%、20%、0.3%和78.5%、1.9%、19%、0.6%;等位基因a、b、c分布频率分别为11.1%、88.8%、0.1%和11.4%、88.3%、0.3%;两组eNOS的基因型频率及等位基因差异无统计学意义(P0.05)。各指标如年龄、收缩压、舒张压、平均动脉压、脉压、体重指数、腰臀比、空腹血糖、胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、肌酐、尿酸、载脂蛋白A1/B的平均水平,两组间比较差异有统计学意义(P0.05);高密度脂蛋白、载脂蛋白-A1、载脂蛋白-B两组间均差异无统计学意义(P0.05)。eNOS基因27bpVNTR多态性可能与新疆哈萨克族人群EH不相关。     

酶的研究与生命科学(二):氧化酶和ATP酶的研究

生物氧化是机体能量生成的基础,是生命得以维持的基本保证。细胞色素氧化酶的发现开启了现代生物氧化研究的序幕:一方面鉴定了大量氧化酶,从而充实了氧的利用特征;另一方面脱氢酶及辅助因子的鉴定进一步理解了生物氧化的本质为氢与氧结合生成水,同时释放能量促使ATP生成的过程。ATP合酶和Na+,K+-ATP酶的发现推动了对ATP生成和利用机制的研究。许多酶的催化都需要ATP的辅助,如泛素连接酶等,相关研究拓展了对细胞内物质代谢的认识。笔者通过生物氧化(亦称生物能学)发展过程的介绍而展现氧化酶和ATP酶的重要性。     

青蒿α-bisabolol合酶产物绝对构型的确定

建立气相和液相色谱方法用于鉴定α-没药醇(α-bisabolol)绝对构型,确定青蒿α-bisabolol合酶产物的绝对构型. 手性液相方法分离并制备α-bisabolol的4种立体异构体,结合旋光度测定、气相色谱和标准品确定4种立体异构体的绝对构型. 分别建立气相和液相色谱2种方法来鉴定α-bisabolol的4种立体异构体混合物. 化学合成酶促反应的底物法尼基焦磷酸(farnesyl pyrophosphate,FPP),原核表达、蛋白纯化后进行体外催化,鉴定2个α-bisabolol合酶体外催化产物α-bisabolol的绝对构型. 甜舌草α-bisabolol合酶(Lippia dulcis bisabolol synthase, LdBOS)体外催化FPP,产物构型为(+)-epi-α-bisabolol,与文献报道一致. 青蒿α-bisabolol合酶(Artemisia annua bisabolol synthase, AaBOS)体外催化FPP生成的产物为(+)-α-bisabolol. Agilent CP-Chirasil-Dex-CB气相色谱柱和Chiralpak IA液相色谱柱可分别用以分离、鉴定α-bisabolol的4种手性异构体. AaBOS和LdBOS的催化产物6位碳构型相同,暗示这2种酶与青蒿紫穗槐二烯合酶(Artemisia annua amorpha-4,11-diene synthase, AaADS)的催化机理类似. 利用气相和液相色谱的方法分析手性化合物,具有灵敏度高、稳定性强、简便易行等优点. 手性化合物α-bisabolol绝对构型的分离、鉴定,在医药、食品和化工领域具有重要意义.     

大鼠急性局灶性脑缺血再灌注NO含量和NOS活性的变化及7-NI对其影响的实验研究

目的探讨一氧化氮和神经元型一氧化氮合酶是否参与了急性脑缺血再灌注的发病机制.方法采用栓线法复制大鼠大脑中动脉阻塞模型,观察血清和脑组织NO含量和NOS活性的变化及神经元型一氧化氮合酶抑制剂7-硝基吲唑对再灌注期间两者的影响.结果脑缺血45 min再灌注2 h后血清及脑组织中NOS活性及NO含量增加,再灌注8 h达高峰.7-NI能显著抑制再灌注期间血清及脑组织中NOS的活性及NO的含量.结论 NO和nNOS在急性局灶性脑缺血再灌注的过程中起着重要的作用.     

透性化细胞海藻糖合酶的制备及其性质研究

研究了亚栖热菌CBS-01菌株细胞的渗透处理工艺,并对所得透性化细胞海藻糖合酶的性质进行了考察.结果表明:以2%的甲苯为渗透剂,对10%浓度的菌悬液,50℃渗透处理30~60 m in即得透性化细胞海藻糖合酶.该透性化细胞酶的最适反应pH为6.2~7.2,最适反应温度为50~65℃;50℃时,催化麦芽糖生成海藻糖的转化率为70%.     

一氧化氮和一氧化氮合酶与脑的几个问题

提出了NO、NOS的脑内分型与表达形式；分析了NO、NOS脑内形态学定位与经典神经递质之间相互关系及其共存方式；总结了NO、NOS脑内神经保护和损伤作用及其与脑循环的调节功能。     

氧化葡萄糖杆菌ddsA基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

聚十异戊烯焦磷酸合成酶催化异戊烯二磷酸与丙烯基二磷酸发生连续的综合反应生成聚十异戊烯焦磷酸，构成辅酶Q10的侧链。将氧化葡糖杆菌（Gluconobacter oxydans）的染色体DNA用EcoRI酶切，回收50kb左右的片段为模板，通过PCR扩增得到了聚十异戊烯焦磷酸合成酶基因（ddsA）。测序分析表明该基因有一个951bp的开放型阅读框架，氨基酸序列与其他聚戊烯焦磷酸合成酶具有高度同源性（30％－50％）。将ddsA基因克隆到pUC19载体上得到pUC－GZH表达质粒，将其转入大肠杆菌JM83宿主，经IPTG诱导表达融合蛋白，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）的37ku处出现相应的条带。     

番茄ACC合酶(LeACS2)在大肠杆菌中的可溶性表达

植物激素乙烯参与了植物生长发育等一系列生理过程,通过控制乙烯的合成进而控制经济作物的衰老和果实的成熟,给农业带来深远影响.ACC合酶是高等植物乙烯生物合成的限速酶.通过RT-PCR将番茄ACC合酶(LeACS2)cDNA克隆至大肠杆菌表达载体pET30a中并使之与GST 编码序列进行融合而构建了重组表达质粒pET-LeACS2-GST.转化获得含有该重组表达质粒的大肠杆菌BL21 starTM(DE3) pLysS细胞,在IPTG的诱导下成功表达出含有LeACS2的大小约83 000的融合蛋白.该融合蛋白具有较好的可溶性.通过GST亲和层析和MonoQ阴离子交换两步纯化后的LeACS2能够催化其底物SAM生成ACC.