内源性一氧化氮的生物学效应

一氧化氮是细胞内生成的气体信息分子 ,它穿过细胞膜 ,产生细胞间作用 ,对中枢神经系统内的胞间信息传递、心血管活动和免疫调节有明显的生物学效应 .一氧化氮释放异常具有细胞毒性作用     

四种蝗虫脑一氧化氮合酶组织化学比较研究

运用NADPH黄递酶组织化学法对笨蝗、稻蝗、黄胫小车蝗和云斑车蝗脑一氧化氮合酶进行了比较研究．发现四种蝗虫视叶的神经板层、髓质和视小叶都里阳性反应，蕈形体球形细胞（Kenyon cells）都里阴性反应。蕈形体的蕈体冠和小叶部有外来阳性神经纤维支配．稻蝗、黄胫小车蝗和云斑车蝗中央复合体的扇形体表现出阳性反应，只有黄胫小车蝗和云斑车蝗的椭圆体有阳性反应，笨蝗中央复合体未发现阳性反应．四种蝗虫的中脑触角叶都有强的阳性反应．稻蝗、黄胫小车蝗和云斑车蝗前脑前内侧神经分泌细胞部的部分细胞呈现阳性反应．     

Comparative proteomics analysis of <Emphasis Type="Italic">OsNAS1</Emphasis> transgenic <Emphasis Type="Italic">Brassica napus</Emphasis> under salt stress

Salt stress is one of the major abiotic stresses in agricultural plants worldwide. We used proteomics to analyze the differential expression of proteins in transgenic OsNAS1 and non-transformant Brassica napus treated with 20 mmol/L Na₂CO₃. Total protein from the leaves was extracted and separated through a high-resolution and highly repetitive two-dimensional electrophoresis (2-DE) technology system. Twelve protein spots were reproducibly observed to be upregulated by more than 2-fold between transgenic and non-transformant B. napus. These 12 spots were digested in-gel with trypsin and characterized by matrix-assisted laser-desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) to obtain the peptide mass fingerprints. Protein database searching revealed that 5 of these proteins are involved in salt tolerance: dehydrogenase, glutathione S-transferase, peroxidase, 20S proteasome beta subunit, and ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase. The potential functions of these identified proteins in substance and energy metabolism, stress tolerance, protein degradation, and cell defense are discussed. The salt tolerance of the transgenic rapeseed was significantly improved by the introduction of the OsNAS1 gene from Brazilian upland rice of Oryza sativa (cv. IAPAR 9).     

eNOS基因27bpVNTR多态性与新疆哈萨克族原发性高血压的相关性研究

探讨内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因27bpVNTR多态性与新疆哈萨克族原发性高血压(EH)的相关性。采用流行病学的病例-对照研究方法,运用多重单碱基延伸分型技术(Multiplex sNaPshot)技术对新疆哈萨克族363名高血压患者(病例组)和370名健康人(对照组)进行eNOS基因27bpVNTR多态性分析,比较基因型、等位基因在病例和对照组中的分布频率与原发性高血压的相关性分析。27bpVNTR基因型bb、aa、ab、bc在对照组和病例组中分布频率分别为78.6%、1.1%、20%、0.3%和78.5%、1.9%、19%、0.6%;等位基因a、b、c分布频率分别为11.1%、88.8%、0.1%和11.4%、88.3%、0.3%;两组eNOS的基因型频率及等位基因差异无统计学意义(P0.05)。各指标如年龄、收缩压、舒张压、平均动脉压、脉压、体重指数、腰臀比、空腹血糖、胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、肌酐、尿酸、载脂蛋白A1/B的平均水平,两组间比较差异有统计学意义(P0.05);高密度脂蛋白、载脂蛋白-A1、载脂蛋白-B两组间均差异无统计学意义(P0.05)。eNOS基因27bpVNTR多态性可能与新疆哈萨克族人群EH不相关。     

东北红豆杉紫杉二烯合成酶cDNA克隆及其与紫杉醇产生菌基因组DNA的Southern杂交(英文)

为进一步研究紫杉二烯合成酶的作用机理和紫杉醇生物合成代谢调控机制,采用RT-PCR技术从东北红豆杉(Taxus cuspidata)树叶中获得了紫杉二烯合成酶基因片段,将该片段克隆在载体pGEMT-easy vector上,并转化到E.coliJM109中,经EcoRI酶切鉴定后,对阳性克隆进行序列测定,获得紫杉二烯合成酶基因片段长度为909 bp,编码303个氨基酸,与GenBank中收录的紫杉二烯合成酶的同源性达到98%;对获得的紫杉二烯合成酶基因和紫杉醇产生菌HQD33基因组DNA进行了Southern杂交。结果初步证实了紫杉二烯合成酶存在于通过内生真菌发酵生产紫杉醇的生物合成途径中。为利用分子生物学手段研究通过内生真菌发酵生产紫杉醇生物合成的代谢调控和构建高产紫杉醇基因工程菌株提供了强有力的理论指导。     

NOS在甲状腺功能低下小鼠脑中含量变化的研究

本文研究了甲状腺激素减少时,小鼠的大脑、小脑、海马、嗅脑等脑组织中一氧化氮合酶（NOS）含量的变化.采用丙硫氧嘧啶（PTU）持续灌注20日龄左右雌性昆明小鼠造成甲减模型.采用NOS的生化测定法检测甲减小鼠的大脑、小脑、嗅脑、海马等中的NOS含量;检测指标包括组织中总一氧化氮合酶（TNOS）活性,以及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及结构型一氧化氮合酶（cNOS）两种分型酶的活性.生化测定法显示,甲状腺功能低下小鼠NOS含量与对照组比较在大脑、小脑和嗅脑中均出现了下降,cNOS在大脑、小脑、海马、嗅脑部位也均出现了下调.而iNOS含量在甲状腺功能低下小鼠的大脑、小脑、海马、嗅脑中却出现了上调.由此可得出,甲状腺激素的分泌异常会造成NOS含量的异常,NO信号系统可能参与甲状腺激素缺乏所致的脑损害过程.     

酶的研究与生命科学(二):氧化酶和ATP酶的研究

生物氧化是机体能量生成的基础,是生命得以维持的基本保证。细胞色素氧化酶的发现开启了现代生物氧化研究的序幕:一方面鉴定了大量氧化酶,从而充实了氧的利用特征;另一方面脱氢酶及辅助因子的鉴定进一步理解了生物氧化的本质为氢与氧结合生成水,同时释放能量促使ATP生成的过程。ATP合酶和Na+,K+-ATP酶的发现推动了对ATP生成和利用机制的研究。许多酶的催化都需要ATP的辅助,如泛素连接酶等,相关研究拓展了对细胞内物质代谢的认识。笔者通过生物氧化(亦称生物能学)发展过程的介绍而展现氧化酶和ATP酶的重要性。     

香菇多糖联合依地酸钙钠对铅中毒小鼠学习记忆功能及海马NO,nNOS的影响

将50只小鼠随机分成空白对照组、模型对照组、阳性对照组、香菇多糖低剂量组、香菇多糖高剂量组5个组,用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆功能,微分电位溶出法测定血铅含量,硝酸还原酶法检测NO含量,免疫组化方法观察nNOS阳性细胞表达.结果表明,香菇多糖高剂量组能显著改善铅中毒小鼠的学习记忆功能.与模型对照组相比,香菇多糖高剂量组能显著降低血铅浓度(P＜0.01),提高海马NO含量(P＜0.01),且增强nNOS阳性神经元表达CA1(P＜ 0.05),CA3(P＜0.01).这提示香菇多糖联合依地酸钙钠能改善铅中毒小鼠的学习记忆功能,其作用机制可能与海马NO含量增高及nNOS神经元表达增强有关.     

青蒿α-bisabolol合酶产物绝对构型的确定

建立气相和液相色谱方法用于鉴定α-没药醇(α-bisabolol)绝对构型,确定青蒿α-bisabolol合酶产物的绝对构型. 手性液相方法分离并制备α-bisabolol的4种立体异构体,结合旋光度测定、气相色谱和标准品确定4种立体异构体的绝对构型. 分别建立气相和液相色谱2种方法来鉴定α-bisabolol的4种立体异构体混合物. 化学合成酶促反应的底物法尼基焦磷酸(farnesyl pyrophosphate,FPP),原核表达、蛋白纯化后进行体外催化,鉴定2个α-bisabolol合酶体外催化产物α-bisabolol的绝对构型. 甜舌草α-bisabolol合酶(Lippia dulcis bisabolol synthase, LdBOS)体外催化FPP,产物构型为(+)-epi-α-bisabolol,与文献报道一致. 青蒿α-bisabolol合酶(Artemisia annua bisabolol synthase, AaBOS)体外催化FPP生成的产物为(+)-α-bisabolol. Agilent CP-Chirasil-Dex-CB气相色谱柱和Chiralpak IA液相色谱柱可分别用以分离、鉴定α-bisabolol的4种手性异构体. AaBOS和LdBOS的催化产物6位碳构型相同,暗示这2种酶与青蒿紫穗槐二烯合酶(Artemisia annua amorpha-4,11-diene synthase, AaADS)的催化机理类似. 利用气相和液相色谱的方法分析手性化合物,具有灵敏度高、稳定性强、简便易行等优点. 手性化合物α-bisabolol绝对构型的分离、鉴定,在医药、食品和化工领域具有重要意义.