破囊壶菌及其廿二碳六烯酸生物合成

破囊壶菌是原生生物，7属42种，其中Schizochytrium和Thraustochytrium某些种的廿二碳六烯酸含量很高，是充满发展前景的可以实现工业化生产廿二碳六烯酸的微生物．尽管存在争议，一般认为，廿二碳六烯酸由廿二碳五烯酸在△4-位脱氢而来，现已在Thraustochytrium中鉴定得编码△4-去饱和酶的cDNA序列Fad4．Schizochytrium却可能以多酮化物合成酶催化廿二碳六烯酸的生物合成．     

马尾松银松素合酶基因转化双子叶植物表达载体的构建及鉴定

以马尾松为材料,在获得马尾松银松素合酶基因的基础上,构建了该基因转化双子叶植物的表达载体,该表达载体含有35S启动子和NOS终止子,能启动基因在双子叶植物中高效地表达.设计并合成分别含有Bgl和BstE酶切位点的上下游引物,通过PCR反应扩增出含有该酶切位点的银松素合酶基因cDNA全序列,酶切后连接到pCAMBIA1301植物表达载体上.经PCR鉴定、酶切分析及DNA测序证实cDNA片段大小、序列以及读码框的正确性.最后通过电击将表达载体转化农杆菌LBA4404,为进一步研究银松素合酶基因的功能奠定基础.     

不同长度马铃薯GBSS基因启动子的块茎专一性表达的初报

将０．４,０．８,１．６,２．９ｋｂＧＢＳＳ基因的５’侧翼区与ＧＵＳ基因融合,构建了双元表达载体。０．８ｋｇＧＢＳＳ－ＧＵＳ通过基因枪转化法在块茎切片中获得了瞬间表达。     

鼠伤寒沙门氏菌JL65色氨酸合酶trpB基因的克隆、测序和相关特性的研究

用ＰＣＲ方法从鼠伤寒沙门氏菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）ＪＬ６５染色体ＤＮＡ中扩 增了ｔｒｐＢ基因片段,克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ　Ⅱ ＳＫ（＋）质粒上,并用双脱氧未端终止法测定了其 核苷酸序列．ＪＬ６５ｔｒｐＢ基因和ＷＴ Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ　ｔｒｐＢ基因作比较后,发现仅有３处的核苷 酸差异,其中ｔｒｐＢ基因在的１００位由Ｃ突变为Ａ,１１１位由Ｇ突变为Ａ,１０３０位由Ｇ突变为 Ａ,导致３４位氨基酸残基Ａｒｇ变为Ｓｅｒ,３４４位的Ｇｌｙ变为Ａｒｇ,氨基酸性质均发生变化．说明 是 ｔｒｐＢ１００,ｔｒｐＢ１０３０两处核苷酸的突变使ＪＬ６５的β亚基发生改变,并可能导致ＪＬ６５的冷 敏感．根据互补试验及酶活测定结果,初步将ＪＬ６５ｔｒｐＢ归类于“可修复”的错义突变型．     

高产IAA绿色木霉工程菌株的构建及其应用

农药和化肥的滥用,对人类健康及生存环境构成极大威胁,研制出能够降低化肥用量的的新型肥料十分必要,符合农业可持续发展的新型肥料十分必要。木霉作为新型肥料的常用功能微生物,在农业领域有着广泛的用途。在众多的促生防病机制中,通过产生吲哚乙酸(indole-3-acetic acid,IAA)来促进植株生长是木霉发挥作用的重要方式。为了进一步增强木霉的促生抗病能力,我们在绿色木霉Tv-1511中鉴定并克隆了IAA生物合成途径关键酶色氨酸合成酶(tryptophan synthase,TRPS)的编码基因TvTRPS以及色氨酸脱羧酶(L-Tryptophan decarboxylase,TDC)的编码基因TvTDC,构建了TvTRPS基因和TvTDC基因过表达的绿色木霉工程菌,并研究了其对木霉耐胁迫能力,产IAA能力,植物促生能力等的影响。结果表明,过表达TvTRPS基因和TvTDC基因的木霉工程菌合成IAA的能力显著提高,并且具有更强的耐胁迫能力和促生能力,为绿色木霉在农业生产上的进一步应用奠定了基础。     

氯胺酮的镇痛作用及其对大鼠大脑皮层NO/NOS的影响

为了观察大鼠切口疼痛模型中皮下注射氯胺酮对大鼠的镇痛作用,及其对大脑皮层一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)的影响。采用体重(250±20)g雄性SD大鼠80只,其中行为学评分分生理盐水组,氯氨酮组(5m g/kg组,10m g/kg组、20m g/kg组)和吗啡组共5组,每组8只;NO和NOS测定分正常对照组、生理盐水组、氯胺酮组(10m g/kg组、20m g/kg组)和吗啡组共5组,每组8只。按B rennan法制成切口疼痛模型,以累积疼痛评分和冷刺激评分确定疼痛行为。给药后30m in取大脑皮层,测定NO含量、NOS(总NOS和iNOS)活性。结果表明,氯胺酮组(10m g/kg组、20m g/kg组)、吗啡组累积疼痛评分和冷刺激评分均低于生理盐水组(P<0.05);氯胺酮组(10m g/kg组、20m g/kg组)、吗啡组NO含量及NOS活性均低于生理盐水组(P<0.05)。说明在大鼠切口疼痛模型中,皮下注射不同剂量氯胺酮能产生镇痛作用,NO和NOS可能在氯胺酮的中枢神经系统的镇痛作用中发挥了重要作用。     

重组诱导型一氧化氮合酶基因转染血管平滑肌细胞及对其增殖的影响

探讨重组诱导型一氧化氮合酶基因转染血管平滑肌细胞及产生的一氧化氮对血管平滑肌细胞增殖的影响。将诱导型一氧化氮合酶基因通过真核表达载体转入血管平滑肌细胞中 ,用Griess法测定转染细胞生成的一氧化氮的量。观察转染后平滑肌细胞生长状态情况 ,用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果正常细胞组NO的含量为78.4 4± 1 5 .38,而iNOS转染组NO含量为 2 36 .5 7± 31 .83,两组相比有非常显著差异 (P =0 .0 0 0 ,n =6 ) ,血管平滑肌细胞转染后生成一氧化氮。转染后的平滑肌细胞生长明显受到抑制 ,主要抑制平滑肌细胞周期G1 S期的过渡 ,使细胞停留在G1期。说明血管平滑肌细胞可以成功转染iNOS基因 ,生成的一氧化氮可明显抑制平滑肌细胞的增殖 ,为从血管非内皮成分进行iNOS基因转染提供了实验研究的依据     

<Emphasis Type="Italic">Ginkgo biloba</Emphasis> extract EGb<Superscript>®</Superscript> 761 increases endothelial nitric oxide production <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis> and <Emphasis Type="Italic">in vivo</Emphasis>

Beneficial effects of Ginkgo biloba on peripheral arterial occlusive disease have been repeatedly shown in clinical trials, especially after use of EGb 761, a standardized special extract. Since the underlying mechanisms are widely unknown, we aimed to elucidate the molecular basis on which EGb 761 protects against endothelial dysfunction in vitro and in vivo. Application of therapeutically feasible doses of EGb 761 for 48 h caused endothelial nitric oxide (NO) production by increasing endothelial nitric oxide synthase (eNOS) promoter activity and eNOS expression in vitro. Phosphorylation of eNOS at a site typical for Akt (Ser 1177) was acutely enhanced by treatment with EGb 761, as was Akt phosphorylation at Ser 478. Furthermore, the extract caused acute relaxation of isolated aortic rings and NO-dependent reduction of blood pressure in vivo in rats. These influences on eNOS represent a putative molecular basis for the protective cardiovascular properties of EGb 761.     

慢性乙型肝炎患者血清NO、iNOS和ALT含量变化及意义

探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者血清一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平变化及意义.CHB患者分为轻度(n=75)、中度(n=78)、重度(n=49)3组,以健康人群(n=74)为对照组,用生化方法检测血清中NOi、NOS和ALT水平.CHB患者血清NO和iNOS水平明显高于对照组.与对照组比较,轻、中度CHB患者的血清中NOi、NOS水平显著升高,ALT明显增高,NO含量与ALT水平呈正相关.重度CHB血清中白蛋白明显降低,但NO、iNOS水平无明显改变.NOi、NOS和ALT在CHB演变过程中发挥重要作用,其水平变化可作为评估慢性乙肝病情程度一项参考指标.     

氰丙氨酸合酶在乙烯诱导杨树耐盐中的作用

【目的】探讨木本植物线粒体β-氰丙氨酸合成酶在乙烯诱导的交替呼吸氧化酶(AOX)途径对盐胁迫响应中的作用。【方法】选取盐胁迫下‘南林895’杨叶片,利用HPLC测定氨基环丙烷羧酸(ACC,乙烯前体)含量,实时荧光定量PCR分析基因表达,比色法测定半胱氨酸水平。【结果】盐胁迫使杨树幼苗叶片ACC积累,乙烯合成相关酶(ACS7和ACO3)、氰丙氨酸合酶(CYS C1),以及腈水解酶(NIT4)等基因显著上调表达,同时伴随着线粒体交替呼吸氧化酶(AOX1b)基因的上调和细胞色素c氧化酶(COX6b)基因下调表达。水杨基氧肟酸(SHAM)预处理导致AOX1b基因表达被抑制,电解质渗透率(EL)和丙二醛(MDA)含量上升,但不影响CYS C1表达。而乙烯合成抑制剂氨基氧乙酸(AOA)了抑制CYS C1和盐胁迫诱导的AOX1b基因的表达,并增加EL和MDA含量。此外,AOA恢复盐胁迫减少的半胱氨酸含量,而SHAM和抗霉素A(AA)均无此效应。【结论】杨树叶片CYS C1参与了乙烯激发的耐盐响应,但乙烯诱导的交替呼吸氧化酶(AOX)并未位于CYS C1上游而发挥作用。