拟南芥CAS基因的生物信息学分析及超表达载体构建

对拟南芥氰丙氨酸合酶(cyanoalanine synthase,CAS)基因进行了生物信息学分析,并构建了CAS合酶基因的超表达载体,以期为其后续功能研究奠定基础。生物信息学分析结果表明,编码拟南芥CAS合酶的CYS-C1和CYS-D1基因均含有10个外显子和9个内含子,定位于3号染色体,而CYS-D2基因有9个外显子和8个内含子,定位于5号染色体;3个基因编码的蛋白氨基酸序列相似度较高,CYS-C1蛋白偏碱性且主要在线粒体中起作用,而CYS-D1和CYS-D2蛋白偏酸性,主要在细胞质中起作用。通过RT-PCR扩增了拟南芥CYS-C1、CYS-D1和CYS-D2基因片段,并构建了超表达载体p BI121-35S-CYS-C1、p BI121-35S-CYS-D1和p BI121-35S-CYS-D2,经检测重组质粒已转化到农杆菌GV3101中。     

NOS1免疫阳性细胞在小鼠脑内的分布

目的:研究一氧化氮合酶(NOS1)在小鼠脑内的分布.方法:采用免疫组织化学技术,观察了一氧化氮合酶在正常小鼠脑内的表达.结果:NOS1阳性神经元分布于中枢神经系统的广泛区域,包括大脑皮质、海马、齿状回、间脑和脑干.结论:表明N0与中枢神经系统的诸多功能有关.     

番茄1位氨基环丙烷羧酸（ACC）合成酶基因的分离和克隆

以番茄基因且ＤＮＡ为模板，利用多聚糖链反应技术将ＬＥ－ＡＣＣ２基因的编码区的第四个显子进行扩增。     

NADPH结构类似物对FMN电子传递性质影响的研究

研究了NADPH结构类似物稳定黄素单核苷酸（FMN）功能域屏蔽状态的作用机理.以野生型一氧化氮合成酶还原酶（nNOSr）、突变体nNOSrF1395S、突变体nNOSrR1400E为对象,研究了NADPH结构类似物：2＇-AMP、2＇,5＇-ADP、硫代-NADP＋、3-乙酰吡啶-NADP＋对FMN域的屏蔽和去屏蔽两种状态的影响,证实了烟碱基团对电子传递过程的影响.     

通过S-柠檬烯合酶突变体的动力学分析揭示萜烯合酶进化的机制

使用孔雀绿比色法分析了S-柠檬烯合酶(S-limonene synthase,S-LS)野生型和突变体的动力学特性.研究表明,萜烯合酶经过引入少数残基突变合成新型萜烯化合物仍然可以保持酶的催化活性.该特性可以解释植物中是如何进化出新的萜烯合酶,从而解释了自然界中萜烯化合物的多样性.本研究提出了萜烯合酶的进化模型.同时针对生物合成中萜烯化合物产量不高的难题,为定向改造萜烯合酶提供了解决方法.     

葡萄总RNA的提取及SQS基因保守区域的克隆

采用柱式离心法与TRIzol法相结合的办法，从葡萄的幼叶中提取出高质量的总RNA，其完整性好，纯度高；采用RT—PCR技术，从所提取的总RNA中克隆出角鲨烯合成酶基因的保守区域（494bp）。     

晚期糖基化终产物对大鼠阴茎海绵体组织中一氧化氮含量及其合成酶活性的影响

通过观察大鼠阴茎海绵体组织中晚期糖基化终产物(AGEs)含量的变化对一氧化氮(NO)含量及其合成酶(NOS)活性的影响,探讨AGEs在糖尿病性勃起功能障碍(DMED)发生发展中的作用.成年雄性SD大鼠60只,随机取40只用于制作糖尿病模型,造模成功的大鼠分为两组:糖尿病(DM)组和糖尿病 氨基胍给药(DM AG)组;另20只大鼠亦分为两组:正常对照(CONTROL)组和正常对照 氨基胍给药(CONTROL AG)组;氨基胍(AG)给药组大鼠造模后即在其饮水中按1 g/L剂量加入AG.饲养8周后取各组大鼠阴茎海绵体组织,匀浆后检测AGE-肽(AGE-P)含量、NO含量及各型NOS酶活性.DM组阴茎海绵体组织中AGE-P含量、NO含量及诱导型NOS(iNOS)活性明显高于CONTROL组(P＜0.05),而结构型NOS(cNOS)活性则明显低于后者(P＜0.05),而AG则明显减少了DM大鼠阴茎海绵体组织中AGE-P、NO的生成和减弱了iNOS活性,增强了cNOS活性;CONTROL组与CONTROL AG组间比较在各项指标上则无明显差异(P＞0.05).糖尿病状态下AGEs可以引起大鼠阴茎海绵体组织中cNOS活性减弱,iNOS活性增强,过量的NO生成,可能引起阴茎组织细胞的凋亡,导致阴茎勃起功能的损伤.     

一氧化氮在心血管活动调控中的作用

一氧化氮是20年来医学研究的热点之一，一氧化氮在心血管活动调控和许多心血管疾病如高血压、动脉粥样硬化、器官缺血再灌注损伤的病理机制中都有重要作用．其作用即有有利的一方面，又有有害的一方面．在一氧化氮合酶作用下产生的一氧化氮对机体具有保护作用。另一方面，受细菌内毒素或细胞因子等诱导，一氧化氮合酶表达上调并产生大量一氧化氮引起细胞损伤和循环衰竭．目前有许多临床实验正在评价一氧化氮在心血管疾病中的作用．     

不同长度马铃薯GBSS基因启动子的块茎专一性表达的初报

将０．４,０．８,１．６,２．９ｋｂＧＢＳＳ基因的５’侧翼区与ＧＵＳ基因融合,构建了双元表达载体。０．８ｋｇＧＢＳＳ－ＧＵＳ通过基因枪转化法在块茎切片中获得了瞬间表达。