一种cDNA-5＇末端的克隆方法

应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TDT)在cDNA 5＇末端加同聚物尾的方法,通过延长加尾时间、改变加尾步骤,大大加强了加尾效率,使得在cDNA末端快速扩增技术(RACE)中应用TDT加尾法进一步获得mRNA的5＇端成为一种行之有效的方法.     

飞蝗两种群羧酸酯酶及谷胱甘肽S-转移酶活性与马拉硫磷敏感性关系的研究

对飞蝗天津北大港种群及河北沧州种群进行了生物测定与生化水平的比较分析,生物测定结果显示,天津北大港种群对马拉硫磷的LD50值为河北沧州种群的13.2倍,显示天津北大港种群已对马拉硫磷产生了耐药性.两种群羧酸酯酶比活力分析表明,以α-醋酸萘酯(α-NA)为底物时,两种群羧酸酯酶比活力无显著差异；以α-丁酸萘酯(α-NB)和β-醋酸萘酯(β-NA)为底物时,飞蝗天津北大港种群较河北沧州种群羧酸酯酶比活力为低,且具有显著差异.以1氯-2,4-二硝基苯(CDNB)为底物对两种群谷胱甘肽S-转移酶活性进行检测,结果表明,河北沧州种群谷胱甘肽S-转移酶比活力高于天津北大港种群.以上结果显示,天津北大港种群对马拉硫磷的耐药性,可能与羧酸酯酶和谷胱甘肽S-转移酶没有直接的相关性,而与靶标敏感性的下降有关.     

肠道降脂药物新靶点SOAT2介导脂质摄取抑制和降脂作用

目前,已发现的靶向抑制肠道脂质摄取的降脂药物作用大多局限于胆固醇,达不到预期的降脂效果,且具有一定的副作用.因此,寻找能同时有效抑制肠道脂肪酸和胆固醇摄取的新药物及新靶点是可行的新策略.为了寻找和筛选对肠道脂质摄取具有抑制效应的天然化合物,本文构建了基于脂质摄取和转化的荧光高通量体外双评价体系.经过对104个天然化合物的筛选发现,盐酸小檗碱(BBR)的效应最为明显,且对肠道胆固醇和脂肪酸摄取的双重抑制作用均呈现时间-剂量依赖性.此外,随着剂量和处理时间的增加, BBR可以显著抑制酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶2(SOAT2)的表达.进一步通过SOAT2干扰实验证实, SOAT2特异性介导了BBR对脂质摄取的抑制作用,并发现SOAT2可能是同时调控胆固醇与脂肪酸摄取的关键靶点.因此,本研究通过利用高通量筛选体系,为降脂药物筛选提供了新策略,并提出肠道SOAT2可能是一种潜在的降脂新靶点,可用于筛选和寻找更安全有效的治疗药物,同时也为BBR的临床应用提供了新的证据支持.     

“它带来的变化是基本的和颠覆性的”

●60年前,DNA双螺旋结构的阐明对于分子生物学的诞生具有里程碑意义,并由此促发了生命科学领域一系列革命性的变化。DNA的遗传信息得以完整地传递到下一代是因为DNA分子自身复制的一种半保留机制。DNA双螺旋结构是由两条方向相反的多聚核苷酸链相互缠绕构成的,这两条链所携带的遗传信息相当于镜像关系,不管保留哪一半,它都能复制出另一半。这     

H2株甲肝减毒活疫苗K7的核苷酸全序列分析

应用ＲＴ－ＰＣＲ获取Ｈ２株甲肝减毒活疫苗（Ｋ７）的ｃＤＮＡ片段，经末端终止测序ＰＣＲ试剂盒和全自动测序仪（ＡＢＩ３７７）作序列测定，用Ｍａｘｔｒｉｇｅｎｅ软件进行计算机分析，Ｋ７疫苗病毒的核苷酸全长含７４４３个碱基．Ｋ７对比其亲代Ｈ２株，减毒的ＨＭ１７５株以及ＨＭ１７５野毒株，同源性分别为９９．７５％，９９．９５％和９９．６１％；彼此间在Ｐ１和Ｐ２连接区１６８个碱基的同源性为９９．４％～１００％，均为ⅠＢ基因亚型．前三者在５’非编码区均有１３１～１３４位和２０３位５个碱基缺失，且结构蛋白基因区序列完全一致．本文用分子病毒学方法证实了Ｋ７疫苗的优异纯毒水平，也为开展甲型肝炎分子流行病学工作提供了基础资料     

一例鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症患儿的护理

鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症(OTCD)属少见先天性遗传代谢病,患者尿素循环中断,血氨增高,血瓜氨酸、精氨酸降低,谷氨酸酰胺、丙氨酸升高,而尿乳清酸和嘧啶排泄增加,最终出现脑病等临床表现[1-3],护理较为特殊.现就2005年9月收治一例OTCD患儿的护理体会报告如下.     

沙田柚种子化学成分的研究

从沙田柚种子中分离出一种柠檬苦素类似物，其结构经元素分析，ＭＳ，ＩＲ，￣１ＨＮＭＲ和￣（１３）ＣＮＭＲ确定为ｎｏｍｉｌｉｎ。     

Inhibition of DNA restrictive endonucleases and Taq DNA polymerase by trimalonic acid C60

Activities of trimalonic acid fullerene (TMA C_60) on DNA restrictive enzymatic reaction were investigated by using two restrictive endonucleases Hind III and EcoR I and plasmid pEGFP-N1 with single restric-tive site for both enzymes. Meanwhile, TMA C60 was also tested to clarify its effects on polymerase chain reaction (PCR) with the catalyst of Taq DNA polymerase and the template of plasmid pEGFP-N1. The products from restrictive reactions or PCR were detected by agarose gel electrophoresis. It was found that the product amounts from restrictive reactions or PCR decreased significantly with addition of TMA C60. The inhibition by TMA C60 was dose-dependent and IC50 values for reactions of Hind III, EcoR I and PCR were 16.3, 6.0 and 6.0 μmol/L, respectively. Addition of two scavengers of reactive oxygen species (ROS), L-ascorbic acid-2-phosphate ester magnesium and sodium azide at the con-centrations of 2―10 mmol/L did not antagonize the activities of TMA C60 against PCR and two restrictive reactions. However, increase of Taq DNA polymerase amounts in PCR system antagonized the activities of TMA C60. These data implied that TMA C60 was able to inhibit the activities of the three above-mentioned enzymes involved in DNA metabolism, and that this inhibition probably did not correlate to ROS.     

人胎盘G—蛋白ab3a cDNA的克隆

为了获取全长的小分子G－蛋白Rab3a，以用于研究Rab3a与其他蛋白相互作用关系，本实验以人胎盘总cDNA为模板，PCR扩增到人Rab3a cDNA全编码区。产物回收后克隆于质粒pYESTrp2的BamHI/Xhol位点，测序结果表明，本实验获得的Rab3a cDNA包含了起始和终止密码子。与PCR引物设计的参照Rab3a比较有5个核苷酸变异，与翻译的氨基酸序列完全一致。由此表明本实验获得的Rab3a cDNA可用于进一步研究。     

邻菲啰呤和核苷酸对Tb(Ⅲ)的协同荧光增强效应(英)

对邻菲囉呤(Phen)存在下16种核苷酸对Tb(Ⅲ)荧光的增强效应进行了系统研究。根据I/I_0值(I和I_0分别为有和无Phen存在时体系的荧光强度)的大小可把这16种核苷酸分为3种类型:(1)对腺瞟啉核苷酸,I/I_0值在150—230之间,这就使得用该体系来研究腺苷酸与Ca和Mg离子间的作用成为可能;(2)对嘧啶碱基核苷酸类,I/I_0值在10—50之间,(3)鸟嘌啉核苷酸类,I/I_0值大约为0.8。我们发现Phen和核苷酸对Tb(Ⅲ)的荧光增强具有协同效应,这种协同效应可能是由于Phen和核苷酸芳环之间的疏水相互作用肥Phen限定在距Tb(Ⅲ)较近的范围内,因而增强了能量转移的效率及荧光强度。