Vc二步发酵伴生菌苏云金芽孢杆菌的选育

苏云金芽孢杆菌经紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)及两者的复合诱变,获得1株高效伴生菌株UN-366.在pH 6.5~6.8的发酵培养基中与氧化葡萄糖酸杆菌混合发酵,UN-366的平均糖酸转化率提高了6.32%,古龙酸的质量浓度达到了83.7 g/L,经连续5代转接发酵实验,性状稳定.     

甲胺磷农药降解菌的筛选鉴定及其降解效能研究

分别从黄冈棉田、荆州农田、沙市农药厂等长期受有机磷农药污染的不同环境土壤取样,通过富集培养,筛选分离到10株甲胺磷(MAP)降解菌.测定了各菌株的降解效能.选取降解效果较好的HS-A32菌株进行了初步研究.提取该菌总DNA进行16S rDNA PCR扩增、测序,BLAST检索及序列分析表明,HS-A32菌与不动杆菌的同源性为98%.结合生理生化实验结果,初步确定HS-A32菌为不动杆菌属(Acinetobacter).通过薄层色谱(TLC)及高效液相色谱(HPLC)对MAP降解进行了定性和定量分析.结果表明,该菌能以MAP作为唯一的碳源和氮源生长.接种该菌于500 mg/L的MAP无机盐液体培养基中,35℃、120 r/min振荡培养3 d,对甲胺磷降解率可达86%,是一株甲胺磷高效降解菌.     

基于蛋白质药效团匹配的化合物功能预测

采用了基于蛋白质药效团匹配的化合物评价策略.以配体分子为提问结构对相应数据库进行反向筛选,根据筛选结果可以得到提问分子在人体内可能的作用受体,并以此为依据进行分子结构改造,以加强配体分子的结合专一性.选取环氧合酶2的专一性抑制剂Rofecoxib按照药效团匹配方法进行反向筛选评价,结果与实验事实吻合,并且提出了一个Rofecoxib的潜在靶标.此方法为未知化合物的功能预测和"老药新用"提供了一种新方法、新思路.     

真菌α-淀粉酶高产菌株的诱变选育研究

以米曲霉2197为出发菌株,采用紫外线、硫酸二乙酯6、0Co-γ射线、亚硝酸、微波及离子束交替进行的复合诱变育种技术,通过平板初筛、固体麸皮初筛、固体麸皮复筛,获得一株真菌-α淀粉酶高产菌株ZLF 13,并对其进行了生活力试验和遗传稳定性试验.结果表明,突变株ZLF 13生长代谢旺盛,营养要求低,遗传稳定性好,产酶水平较出发菌株提高6.4倍,达946 u/g.     

稻瘟病菌粗毒素对水稻幼胚愈伤组织的影响及抗性筛选

利用目前稻瘟病不同的优势小种菌株的液体培养提取的粗毒素对水稻幼胚进行处理,稻瘟病菌粗毒素提取液对水稻幼胚的愈伤的诱导和分化的有明显的抑制效应.随着毒素浓度的增加,水稻胚性愈伤获得率和分化能力显著降低.在诱导培养基中加入毒素对幼胚的筛选取效果较好,可以获得较多的胚性愈伤和较多的分化苗.培养基中毒素的浓度处理以30%效果好.水稻幼胚的抗性筛选过程中胚性愈伤获得和分化苗数较高,是很好的培养材料;而且不同的水稻品种产生的耐性不同,并可以同时筛选出抗稻瘟病的突变体.     

静息培养基的筛选及在此体系中庆大霉素的合成

通过对比实验,讨论了培养基中各种组分对庆大霉素合成与分泌的影响;由此确定了静息细胞培养基的配比,并应用此系统考察了影响庆大霉素合成的因素。结果表明：培养温度为34℃、添加适量次级代谢物、体系内硫酸锰浓度为500mg／L及每升添加0．020mL的Tween20都肥促进庆大霉素的合成。     

缩氨基硫脲类钯抗癌配合物初步筛选与作用机理的荧光法研究

新合成了8-乙酰基-4-甲基-7羟基香豆素缩氨基硫脲、3-乙酰基-7-羟基香豆素缩氨基硫脲及其与钯的配合物,以溴化乙锭为荧光探针,研究了配合物与小牛胸腺DNA的作用机制,初步判定了配合物的抗癌活性,计算了与DNA的结合常数。研究表明荧光筛选法结果与体外筛选的四唑盐染色法结果基本一致。     

MC1R天然拮抗剂的高通量初步筛选

为了寻找高效稳定的黑色素皮质激素受体1(melanocortin 1 receptor, MC1R)的拮抗剂,利用作者前期工作中建立的高通量筛选方法对 1 000种中草药提取物进行了筛选,并检测了这些提取物对小鼠B16-F1细胞系黑色素生成量的影响.结果表明,补骨脂等10种粗提物具有拮抗促黑激素（MSH）激活MC1R的作用.其中,补骨脂、破茎松萝、桑根和太白树粗提物能明显降低B16-F1细胞的产黑色素能力,但其机制有所不同,补骨脂主要作用于MSH对C1R的激活过程,而其余3种提取物基本上直接作用于cAMP通路.本实验为利用上述中草药调控皮肤细胞中的黑色素生成提供了初步线索.     

抗心律失常药物筛选研究进展

抗心律失常药物治疗是心律失常的基础治疗,大规模随机双盲试验表明抗心律失常药物存在总有效率不高,致心律失常副作用和对患者生存率改善作用不佳等问题. 就抗心律失常药物发展历程、存在的问题、研究进展和药物发现的新策略进行综述。     

人LDHA原核表达、纯化及体外抑制剂筛选模型的建立

在多数肿瘤细胞中高度表达的乳酸脱氢酶A(LDHA)与肿瘤的发生、发展和预后密切相关,筛选LDHA小分子抑制剂可提供一种富有潜力的靶向抗肿瘤策略.本研究以pET-28a为载体,构建了人LDHA表达质粒并于大肠杆菌BL21(DE3)中稳定表达,产量达到2.65mg/L.基于LDHA的催化反应建立了以丙酮酸钠和还原型烟酰胺腺嘌呤二核甘酸(NADH)为底物的筛选模型.实验结果表明:模型的LDHA最适质量浓度为60ng/mL,以质量分数0.25%草酸铵为阳性对照,筛选模型的Z因子为0.812.至此,本研究建立了LDHA抑制剂体外生化筛选模型,其成本低、可操作性强,符合高通量筛选要求,为发现新颖的LDHA抑制剂奠定了基础.