外源基因在转基因动物乳腺中的特异性表达研究

动物基因工程研究最大的突破就是转基因动物研究的进展,自八十年代初第一批转基因小鼠问世以来,转基因动物的研究已从方法学研究步入了应用性研究阶段,转基因动物除作为研究工具广泛应用于发育生物学、免疫学、遗传学以及医学等生命科学领域外,外源基因在转基因动物的特异性表达,尤其是在乳腺的表达,又可将转基因用作生物反应器进行了生物活性蛋白的生产而于商业生产,在转基因动物乳腺的特异性表达研究中,寻找乳蛋白基因调控     

Developmental control of heat shock and chaperone gene expression Hsp70 genes and heat shock factors during preimplantation phase of mouse development

Heat shock genes are found in all organisms, and synthesis of heat shock proteins is induced by various stressors in nearly all the cells forming these organisms. However, a particular situation is noticed for hsp70 genes in mouse embryos at the beginning of their development. First, spontaneous expression of hsp70 is observed at the onset of zygotic genome activity. Second, inducible expression is delayed until morula or early blastocyst stages. A better understanding of both these points depends on a more careful analysis of hsp70 expression in relation to their major regulators, the heat shock factors. In this review, we will see how the development of the preimplanta tion embryo highlights the complexity of heat shock gene regulation involving trans-cis interactions and the cellular and nuclear environment.     

家兔基因文库的建立

根据鸟枪法克隆基因的原则，建立了家兔总ＤＮＡ文库。为适应同位素标记探针法克隆筛选方法，建立了以人噬菌体为载体的文库。每个重组子携家兔基因组ＤＮＡ平均２０ｋｂ，共获重组噬菌体达１０＾６。以人生长激素ｃＤＮＡ为探针，采用噬菌斑原位杂交、斑点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交等操作，对以噬菌体为载体的文库进行了筛选和有效性验证。结果表明：（１）人生长激素与兔生长激素的ＤＮＡ存在相当的同源性，以人生长激素ｃＤＮＡ     

GUS基因对红豆草部分酶解小细胞团的转化

采用电击法，将大肠杆菌的ＧＵＳ基因（β－葡糖苷酸酶基因为报告基因）导入红豆草部分酶解小细胞团，利用ＧＵＳ基因产物与底物Ｘ－Ｇｌｕｃ反应的组织化学定位试验，检测到ＧＵＳ基因在受体组织中的表达。同时，对部分酶解的程度、不同电压条件下的转化效率以及两种质粒的不同启动子对ＧＵＳ基因表达的强度等进行了讨论。     

视网膜母细胞瘤基因产物部分性质的研究

研究Ｒｂ基因产物的代谢动力学和功能调节，发现整个细胞周期中都有Ｒｂ蛋白合成，其含量随细胞周期进行而变化，蛋白代谢的半衰期约为１１—１２小时，有非磷酸化和多种程度磷酸化形式。Ｒｂ蛋白的磷酸化水平是随细胞周期过程和细胞生长状态而变化的，在Ｇ０、Ｇ１期蛋白处于低磷酸化状态，到达Ｇ１／Ｓ界限，细胞获得磷酸化Ｒｂ蛋白的能力．     

芝麻油掺假快速检测新方法的研究

本试验对芝麻油掺假定性和定量检测的新方法进行了研究，筛选了检测用的特异显色剂和最佳条件。此新方法既能检测芝麻油掺假，又能检测出掺假植物油的品种。目视定量检测试验误差为±５％．     

一个简单高效的甘蓝转化系统的建立

将苗龄为５－７天的甘蓝子叶柄下胚轴分别培养于再生率很高的两个培养其中。当培养７－１０天时，通过基因枪轰击，进行ＧＵＳ基因的转移，结果表有，ＧＵＳ基因导入了甘蓝细胞并进行了瞬间表达。     

用信息论方法研究几类核酸序列的密码子使用与基因表达水平的关系

研究了Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ和ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓＹｅａｓｔ三类核酸序列的密码子使用频率与基因表达水平的关系，依照每一基因中最适密码子、非最适密码子和稀有密码子出现的概率，计算其信息熵Ｅ。首先，发现Ｅ与ＣＡＩ值保持了很好的线性关系，且三类序列的线性拟合方程非常接近，因此，用信息熵Ｅ作为描述基因表达水平的物理量是合适的；其次，三类序列的Ｅ─Ｐ（Ｒ）（稀有密码子概率）曲线都接近对数关系，说明稀有密码子在抑制基因表达水平方面，起着很重要的作用；第三，由各种关系曲线的相似性，可以推测，Ｅ．ｃｏｌｉ等原核生物与真核生物Ｙｅａｓｔ在密码子使用与基因表达水平的关系方面，其机理是相似的。     

钝齿棒杆菌YL_1基因文库的建立及异亮氨酸基因在大肠杆菌中的克隆表达

以ｐＵＣ１９质粒为载体建立了异亮氨酸产生菌钝齿棒杆菌（Ｃｏｒｙｍｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｃｒｅｎａｔｕｍ）ＹＬｌ的基因文库，并通过酶切重组子、斑点杂交得到证实．共筛选５８００个重组子，一个特定ＤＮＡ片断在库中存在的可靠性达９９．９９％．从中克隆重组了带有ｉｌｖＡ基因片断的重组质粒ｐＹＩ９４，转化ＡＨＶ的大肠杆菌ＥＤ８６５４－５，使本来不产Ｉｌｅ的大肠杆菌可以积累Ｉｌｅ１．５ｇ／Ｌ，为进一步高效表达构建工程菌创造了条件．     

电击基因转移系统的研究

电击法是一种新的生物技术，其转化效率是用化学法所得不到的．ＬＮ—１０１和ＬＮ—２０１是两种基因脉冲导入系统，能提供可以控制的高压、大电流脉冲。