Molecular evidence for increased hematopoietic proliferation in the spleen of the b/b laboratory rat

The splenomegaly and the appearance of a significant number of CFU-E (erythroid colony-forming units) and BFU-E¹ (erythroid burst-forming units) in the Belgrade laboratory rat (b/b) spleen prompted us to analyse further the molecular evidence for increased hematopoietic proliferation in the b/b spleen. Messenger RNAs (mRNAs) specific for globins, proteins for iron transport and deposition and the band 3 protein were used in rat erythropoietic tissues as markers for proliferation and erythroid differentiation. In the b/b spleen, all mRNAs analysed display an erythroid-specific pattern of expression. This analysis also revealed an enhanced level of mRNA for ferritin in the +/b spleen, whereas erythrocyte-specific mRNA production was normal.     

Studies of a key protein in the mechanism of the excitation-contraction coupling process of frog skeletal muscle,using phenylglyoxal

The excitation-contraction (E-C) coupling process in single twitch fibres from frog toe muscle was inhibited selectively by phenylglyoxal (PGO), a specific guanidyl modifying reagent. A new protein (31.5 kDa), which has PGO-binding ability and seems to play a key role in the E-C coupling process, was solubilized from transverse tubule membrane-junctional sarcoplasmic reticulum complexes (TTM-JSR) of frog skeletal muscles, using¹⁴C-PGO. The monoclonal antibody against this protein applied extracellularly inhibited the E-C coupling process of the single fibres. This protein appears to constitute the very first step of input for E-C coupling. It is considered to behave as an indispensable part of an electrometer to measure membrane potentials. Therefore, the name electrometrin is suggested for the new protein.     

SARS冠状病毒N蛋白的表达及二级结构预测分析

通过RT-PCR获得SARS冠状病毒N蛋白基因，分别克隆到原核表达载体pET21a，pET32a和pGEX-4T-1中，将3种重组质粒pET2la-N，pET32a-N和pGEX-4T-1-N分别转化大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导，细菌中分别表达出约46kD的重组N蛋白、约60kD的6xHis-N融合蛋白和约70kD的GST-N融合蛋白，表达量分别达总蛋白的45％、40％和30％．进一步的分析表明：6xHis-N融合蛋白在大肠杆菌中为可溶性表达，该可溶性组分占细菌裂解液的70％左右，且能被6xHis抗体所识别．用蛋白分析软件对N蛋白进行了序列分析和二级结构预测．SARS冠状病毒N蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达，有助于进一步结晶后进行X射线晶体衍射分析其结构与功能．     

小麦RIL群体中籽粒蛋白质组分的分离与主要品质性状的相关分析

利用普通小麦重组自交系群体为材料,研究了小麦籽粒蛋白质组分在后代群体中的分离和分布,同时对籽粒蛋白质组分与其它主要品质指标的关系进行了研究.结果发现籽粒蛋白质组分在群体后代中表现为微效多基因控制的数量性状,相对亲本的性状变异较大.醇溶蛋白和谷蛋白相对含量与湿面筋含量、SDS沉降值之间呈显著正相关,与硬度呈正相关.清蛋白、球蛋白相对含量与湿面筋含量、SDS沉降值和硬度呈负相关.     

一个在梅山猪×大白猪杂交组合的背最长肌中差异表达的新基因的分离、cDNA 序列分析及组织表达谱

为了揭示猪杂种优势的分子机理,用mRNA差异显示技术从梅山猪×大白猪杂交组合的背最长肌中分离到一个差异表达的基因,并用半定量RT-PCR进行鉴定,随后通过cDNA末端快速扩增法(RACE)得到该基因的cDNA全长.经与GenBank进行Blast比较,这个基因与猪的已知的基因没有明显的同源性.基因预测显示这个基因编码一个由188个氨基酸组成的蛋白质,且该蛋白质具有保守的PRA1 family protein的结构域,同时该蛋白质和人、大鼠、小鼠的PRA1 family protein 3分别具有88%,88%,87%的同源性,因此将这个基因命名为猪的PRA1 family protein 3基因.进化树分析表明猪的PRA1family protein 3和人的PRA1family protein 3具有比大鼠、小鼠的PRA1family protein 3更近的亲缘关系.组织表达谱分析显示这个基因在肌肉与脂肪组织中表达丰富,在脾中中等表达,在心、肾、卵巢、肺中少量表达,在肝与小肠中几乎不表达.同时对这个基因的功能及与猪的杂种优势的关系进行了讨论.     

抗冻蛋白基因转化植物的研究展望

重新评估了用美洲拟鲽抗冻蛋白基因转化烟草的研究，认为植物耐寒性状的提高与转基因植物中冻抗蛋白含量呈正相关是转基因植物成功的关键性指标。美洲拟鲽抗冻蛋白的空间结构与冷冻诱导蛋白相似而且都保护细胞膜免受冻害，因而提出了用冷诱导蛋白调节元的顺式作用元件和反式作用因子的调控序列来控制抗冻蛋白基因在植物中冷诱导表达的思路。     

蛋白质二级结构中同义密码子与氨基酸上下文关联的偏好型

通过对人(Homo sapiens)的117个蛋白质和大肠杆菌(E．coli)的87个蛋白质的统计分析，发现mRNA序列中的同义密码子与氨基酸的上下文关联是和蛋白质二级结构有关的，并给出了各二级结构中有意义的上下文关联型．讨论了该结果对蛋白质结构预测的改进意义及其在基因工程领域可能的应用。     

rhBMP-6的表达和纯化

骨形态发生蛋白(bone　morphogenetic protein，BMP)—6属于转化生长因子(transforming growth fac-tor)—β超基因家族，在骨的形成中具有重要作用，并受雌激素选择性上调．本研究利用RT—PCR从人胎盘组织中扩增BMP—6成熟肽的DNA片段，克隆到pGEx—5x—1中，构建GST—BMP6融合蛋白表达载体pGEx—BMP—6，转化E.coli DH5a．克隆质粒转化的工程菌，经IPTG诱导4h后，高效表达GST—BMP6融合蛋白，在SDS—PAGE上出现一新蛋白带，分子量约为42kD，约占总蛋白的25％，表达产物以包涵体形式存在．菌体超声破碎，经0．3％N—十二烷基肌氨酸钠(SKL)溶解包涵体，离心后的上清液加入0．6％　Triton　x—100整合SKL，然后利用谷胱甘肽Sepharose—4B亲和层析纯化．结合GST—BMP6的介质经洗涤、xa因子酶切得到纯度达95％的rhBMP—6蛋白。     

两种不同示踪剂用于蛋白质与抗原分子微阵列信号检测的对比研究

以氧化型琼脂糖凝胶膜为基片，制作蛋白质与抗原分子微阵列，建立了检测固相人IgG,游离IgG和自身抗体分子的免疫学测定模式，分别以辣根过氧化物酶－二氨基联苯胺一双氧水（HRPDAB－H2O2）和胶体金－硝酸银－对苯二酚2种示踪系统作为蛋白质与抗原分子微阵列信号显示剂，并对其作用的原理与特点进行讨论，检测结果发现基于胶体金的免疫金银染色法（IGSS）比固相酶免疫测定法（EIA）敏感，2种示踪系统对固相人IgG的最低检出量分别为0．05ng和0．5ng；而对血清游离IgG的最低检出量IGSS法比EIA法至少高出10倍，两法用于自身抗体的测定亦表现出较好的重复性，在14例HCV感染者中，自身抗体的总体检出率分别为38．6％和31．4％，结果具有显著的同步性，故同时辅以2种示踪剂并用于阵列芯片的联合测试，有助于提高自身抗体的总体检出水平。