有限稀释法筛选重组AcNPV病毒

有限稀释法筛选重组ＡｃＮＰＶ病毒钟劲胡美浩１）（北京大学生命科学学院,北京,１００８７１）关键词重组病毒;梯度稀释;筛选;测活中图分类号Ｑ３３２０引言昆虫杆状病毒表达系统是一高效表达外源基因的表达系统。用于基因工程表达外源基因的ＡｃＮＰＶ（ａｕｔｏｇ...     

腺病毒载体介导胸苷激酶基因/ACV对大鼠脑胶质瘤的离体和活体杀伤作用

建立缺陷型重组腺病毒载体介导的胸苷激酶基因治疗系统（Adtk／ACV）,进行离休和活体治疗大鼠C6脑胶质瘤研究．将质粒pAdtk与pJM17共转染腺病毒包装细胞──293细胞,同源重组后制备纯化的Adtk并以PCR证实;Adtk对离休C6细胞的杀伤作用随着Adtk滴度和ACV剂量增加而增强,并有旁观者效应,而未转染C6细胞和AdLacZ转染C6细胞均未被杀伤;扫描电镜下见Adtk／ACV处理的细胞呈明显病理改变;ACV可有效杀伤Adtk／C6细胞．在大鼠脑立体定向仪引导下于右额叶接种2×106个C6细胞,分别于第3,6,8和10天原位注射Adtk,同时腹腔注射ACV（100mg／（kg·d-1））,3d组、6d组、8d组大鼠成活期在90d以上,组织学检查未发现肿瘤细胞．10d组成活期（28．5±4．6）d,而C6未治疗组和AdLacZ／ACV治疗组成活期分别为（1．8±3．1）d和（14．0±2．2）d．本文建立的Adtk／ACV在离体和活体水平对大鼠C6脑胶质瘤有强烈的杀伤作用,效果确实,应用方便,ACV价格便宜,有潜在临床应用价值．     

植物病毒增殖的超循环理论与抗病毒植物基因工程

考虑了两个典型的植物病毒ＴＭＶ和ＰＶＹ,从病毒基因组的复制,翻译和组装各个环节的反应方程出发得到了病毒增殖的动力学方程。这组方程是Ｅｉｇｉｎ超循环理论在病毒ＲＮＡ增殖系统中的应用和发展。     

黑胸大蠊浓核病毒的病理学研究

应用组织化学方法以及电镜超薄切片技术对黑胸大蠊浓核病毒感染蜚蠊的病理学作了初步研究．经孚尔根—亮绿染色、甲基绿—派洛宁染色、吖啶橙染色,发现蜚蠊中肠柱状上皮、盲囊、马氏管和砂囊组织不被蜚蠊浓核病毒感染外,其它几乎所有蜚蠊组织都被病毒感染,并在细胞核内形成孚尔根反应强阳性,派洛宁和吖啶橙好染的均匀物质团．电镜下发现,感染细胞核明显膨大,核内异染色质浓缩并被推向核的边缘,核仁分离并最后消失．核内病毒粒子从发生基质形成、释放,最后使核膜破裂而进入细胞质中．在少量细胞中可见到大片晶格排列的病毒颗粒．感染细胞内线粒体、内质网均退化,空泡化     

内联网络安全的研究与探讨

本文论述了当前内联网络网络安全工作对于国家安全和经济建设的重要意义、它所面临的种种威胁、网络安全体系功能需求，并阐述网络安全技术最新发展，给出了一个较为完备的安全体系可以采用的各种加强手段，包括防火墙、加密认证、网络安全扫描、入侵检测等技术。     

牛泡沫病毒BFV3026 gag基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

从牛泡沫病毒BFV3026感染的胎牛肺细胞中提取Hirt DNA,PCR扩增BFV3026　gag基因。序列分析确证后，将其克隆于原核表达载体pET32A，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导，使Gag蛋白得以高效表达。SDS－PAGE及Western blot证实：表达蛋白占菌体总蛋白的40%，本工作的完成为Gag蛋白功能的研究奠定基础。     

重组肠激酶在甲醇酵母中高效表达的培养条件研究

对重组肠激酶在甲醇酵母中高效表达的发酵条件进行了优化，并在BiofloⅢ发酵罐中实现了高密度培养和高效表达。结果表明；温度30C，培养基pH6．0，当酵母密度达到200A600mm以上时，加入无水甲醇，控制甲醇的流加体积，使其终体积分数为1．0％～3．O％，继续诱导培养72h左右，酵母菌密度可达到150g／L，重组肠激酶总活性可达58kIU／L发酵液。     

Identification of antiviral- relevant genes in the cultured fish cells induced by UV-inactivated virus

~~Identification of antiviral- relevant genes in the cultured fish cells induced by UV-inactivated virus~~     

N-terminal of L protein of vesicular stomatitis virus contains a new signal sequence

The L protein (241kD) of vesicular stomatitis virus (VSV) is the most important snbnnit of the replication complex. The existence of specific localization signal in the L protein was investigated by making recombinant constructs expressing truncated mutants of the L protein fused to green fluorescent protein (GFP) in transient transfection assays. The chimeric genes encoding varied N-terminal of L and GFP gene were put under the control of T7 promoter or CMV promoter. The fusion proteins were transiently expressed in BHK-21, COS-7, CHO or Hep G2 cells. When more than 120 residues were deleted or only 96 residues were kept on the N-terminal, the fusion proteins were shown to be distributed throughout the cells, cytoplasm and nucleus under the confocal microscope. However, other chimeric proteins with 120 or more amino acids were dotted and distributed in the perinuclear regions. And the fusion protein with 96—120 aa has the similar distribution. A thirteen-residue peptide QGYSFLHEVDKEA (108—120) was identified as localization signal, whose function would be absolutely distributed with the deficiency of D or V. Our results show that there is an independent localizing signal in N-terminal domain of L protein of VSV and this functional signal is conserved in different cell lines.     

板蓝根粗提液抑制流感病毒的实验研究

对板蓝根凝聚粗提液的抗流感病毒作用进行了研究。用丙酮脱脂提取板蓝根生药的凝集素，并分别测定各样品的血凝活性，并用45.3mg/mL的样品对流感病毒（A1／京防／97－53H1N1，A1／京防／262／95）进行了体外抑制试验。结果表明：板蓝根凝集素对流感病毒具有显著的直接杀灭作用和预防作用及较好的治疗作用，而且得出抑制流感病毒的效果与板蓝根凝集素血凝活性的高低有关。