电击法转移含人凝血因子IX基因重组质粒的影响因素

反转录病毒载体在基因治疗中可能会产生野生型病毒颗粒而引起安全性问题，本文研究含ＦＩＸｃＤＮＡ重组质粒基因治疗血友病Ｂ的可能，构建了不具反转录病毒载体结构的两重组质粒ｐＳＣＩＸＴＮ和ｐＣＩＸＴＮ，前者合ＳＶ４０早期启动子和ｈＣＭＶ启动子共同控制的ＦＩＸｃＤＮＡ，后者仅含ｈＣＭＶ启动于控制的ＦＩＸｃＤＮＡ，它们都含有ＴＫ启动于驱动的ｎｅｏ基因，通过电击法将基因转移到ＰＡ３１７和ＨＴ１０８０细胞，在ＨＴ１０８０细胞中的ＦＩＸ表达量分别为２２０、２１２ｎｇ／（１０６细胞·２４ｈ）通过与ｐＣＭＶＩＸ共转染靶细胞，可以增加人ＩＸ因子表达１．５～３．５倍，显示了用质粒载体转染靶细胞在血友病Ｂ基因治疗中是一条潜在可行的途径．本项研究用自制的电击仪转移ＰＡ３１７和ＨＴ１０８０等细胞，最高的转移效率达１０－３，并探讨了细胞种类，ＤＮＡ量，ＤＮＡ结构，电压，脉冲时间与转移效率及表达量的关系．     

Production of functional rat liver PSP protein in Escherichia coli

An efficient Escherichia coli expression system for the production of a perchloric acid-soluble protein (PSP) has been constructed. Complementary DNA encoding PSP was inserted into an inducible bacterial expression vector pGEX-4T-1. After the plasmid introduced into E. coli was expressed by isopropyl 1-thio-β-D-galactopyranoside (IPTG), the recombinant product was purified by glutathione-Sepharose 4B affinity chromatography. The purified product showed the expected NH₂-terminal sequence, but the translation inhibitory activity of this product was 10 times lower compared with that of authentic PSP isolated from rat liver. Received 8 October 1998; received after revision 6 November 1998; accepted 6 November 1998     

用ELISA双抗体夹心法检测人重组白细胞介素2(rHuIL-2)在酵母菌中表达的研究

采用ELISA夹心法检测人重组IL-2在酵母菌中表达产物的免疫学活性.结果表明,本法具有特异性强、简易、快速和重复性好等特点,尤其对利用工程菌制备及纯化rlL-2过程中能较快地监测出是否有该产物表达.     

毕氏酵母流加发酵过程的比生长速率控制

在已建立的毕氏酵母发酵过程结构模型基础上，进行了甲醇流加阶段恒定比生长速率控制研究。实验结果表明，基于模型的甲醇进料策略可以将细胞比生长速率恒定地控制在设定值；在比生长速率均值相等的情况下，恒定比生长速率进料策略较之恒速进料策略蛋白产量更高。     

重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβ CTP109～145的构建

目的：为发展多特异性避孕疫苗,制备重组抗原pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145,方法：根据pZP3α全长和hCG 0633CTP109-145编码的DNA序列设计两对引物,通过部分重聚合酶链式反应（overlaping PCR）,扩增出pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145片断,克隆到载体质粒pPIC9K中,然后导入大肠杆菌DH5α,用PCR和双酶切反应鉴定重组质粒,并用DNA测序仪对重组质粒测序,结果：3步PCR扩增出pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145DNA片段,插入到载体质粒pPIC9K的克隆位点,获得重组pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145表达质粒,测序结果显示插入序列与设计预期完全一致。结论：重组质粒pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145构建成功,为表达重组抗原pPIC9K－pZP3α－hCGβCTP^109-145,探讨重组多特异性避孕疫苗抗生育效能的研究建立基础。     

胶原蛋白的接枝改性及与腈纶共混纤维的研究

通过接枝聚合的方法对胶原蛋白进行改性，显著改善了胶原蛋白易溶于水的缺点，使之能够应用于纤维工业，并通过红外光谱对接枝改性的胶原蛋白进行了表征．同时，研究了几种不同比例胶原蛋白与聚丙烯腈共混纺丝液的纺丝性能，通过Instron 5565型强力仪、扫描电镜等对纤维的力学性能与形貌进行了测试和分析．     

巩膜胶原含量与其生物力学性能的关系研究

通过研究巩膜胶原含量与其生物力学性能的关系，为临床上改变巩膜的生物力学性能提供参考。对兔眼进行后巩膜加固术，用盐酸水解法测术后不同时期加固条带区巩膜胶原含量的变化，并在Instron5544材料性能试验机上，采用单向拉伸方法测其弹性模量的变化。结果显示，后巩膜加固术后加固条带区巩膜试件胶原含量的变化与弹性模量的变化趋势相近。可见增加巩膜的胶原含量能提高巩膜的线弹性模量，从而增强巩膜抵抗变形的能力。