EM发酵豆渣、鱼杂、鸡血及其粗蛋白含量测定分析

生产生活中产生的农副产品,如豆渣、鱼杂、鸡血等,含有大量的粗蛋白,可以作为一种物美价廉的饲料.本实验在已有研究基础上,利用环境微生物(environment microbe,EM)菌种对其进行发酵处理,采用凯氏定氮法(GB/T6432-94)检测其粗蛋白质含量.发酵结果表明:处理后的豆渣+麦麸、玉米粉+鱼杂、玉米粉+鸡血、玉米粉+豆渣4组材料的粗蛋白含量分别提高2.63、2.62、2.71和2.07个百分点,其营养价值得到有效提高;其中残留的有害物质如重金属、抗生素等能够得以降解消除;病原微生物如某些致病厌氧细菌和大肠杆菌等能得到很好的抑制;同时,饲料的适口性大大提高.     

核糖体蛋白S3表达减少对果蝇发育的影响

为探讨核糖体蛋白S3在果蝇（Drosophila）发育中的作用,采用RNAi法,分别在果蝇和果蝇s2细胞中干扰核糖体蛋白S3表达,观察对果蝇表型的影响。结果显示,减少核糖体蛋白S3表达引起果蝇幼虫发育延迟,眼睛、翅膀和刚毛生长缺陷等。进一步实验表明,在翅原基中有明显的凋亡信号;S2细胞数目减少;细胞凋亡和细胞周期相关基因表达异常。上述结果暗示核糖体蛋白s3丧达减少导致的果蝇发育改变可能通过细胞凋亡的方式来实现。     

人RANKL胞外结构域原核表达载体的构建及表达条件优化

细胞核因子κB受体活化因子配体(Receptor activator of the NF-κB ligand,RANKL)是TNF超家族的重要成员之一,属于Ⅱ型跨膜蛋白,通过与其受体核因子κB受体活化因子(RANK)构建的信号通路参与乳腺癌的发生、肿瘤骨转移、骨质疏松、关节炎等病理过程。人RANKL胞外结构域基因片段与原核表达载体pET-21b融合并转化至表达菌Rosetta,并对其表达条件进行了优化。通过对诱导时机,诱导温度,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度,诱导时间及甘油浓度的条件优化表明,当IPTG的浓度为0.2 mmol/mL,20℃振荡诱导培养6 h时,甘油浓度为4%时,可在上清中获得高效表达的pET-21bRANKL融合蛋白,为该蛋白的进一步纯化及结构与功能研究打下了良好的基础。     

氧化还原因子-1的原核表达纯化及其活性鉴定

为建立氧化还原因子-1(Ref-1)的原核表达系统,将经过酶切后的人源Ref-1编码片段定向克隆到pGEX-4T-3载体上,构建了pGEX-4T-3/Ref-1原核表达载体,重组质粒转化至BL21(DE3)工程菌,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导重组工程菌表达可溶性融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B(Glutathione Sepha-rose 4B)亲和纯化重组蛋白,透析后用聚乙二醇8000(PEG8000)浓缩,获得纯度达92%的融合蛋白,产率为3.7 mg/L,融合蛋白占菌体总蛋白的6.8%.蛋白质印迹(Western blot)显示该蛋白可以被抗体特异性识别,证实其为GST-Ref-1融合蛋白.GST-Ref-1蛋白体外增强了激活蛋白-1(AP-1)的DNA结合能力,并能拮抗H2O2造成的AP-1氧化损伤.     

蛋白质的挤压组织化改性─—大豆蛋白在挤压过程中的物理、化学变化

将挤压过程用于蛋白质改性，使大豆浓缩蛋白经挤压组织化处理后，成为一种具有一定组织特性的功能蛋白质。由缓冲液浸出试验、聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，并结合傅立叶变换红外差谱测试结果可知：大豆浓缩蛋白在挤压组织化过程中，发生了二硫键交换反应，但并未形成异肽键，蛋白质的相对分子质量也无变化。维持组织蛋白结构的主要空间构象力是二硫键和疏水相互作用。     

制备蛋白A单分子膜层装配抗体构建肿瘤标志物检测芯片

免疫分析方法主要依赖于固定在固相基底上的抗体对相应抗原的特异性识别, 抗体在固相基底上固定后最大程度保持生物学活性是设计免疫分析方法的关键技术. 本研究利用在疏水性硅基底表面制备蛋白A单分子膜层可以特异结合抗体的Fc端, 进而实现对抗体的定向化装配, 进一步构建格式化阵列用于肿瘤标志物检测. 研究结果表明, 制备的蛋白A单分子膜层的厚度为1.8±0.6 nm, 抗体可以经蛋白A单分子膜层实现定向化装配, 由此设计的传感阵列检测肿瘤标志物甲胎蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)可以实现1.0 ng/mL的灵敏度, 血清检测结果与电化学法(ECLIA)测定进行统计学检验没有显著性差异(P>0.05).     

有趣的发光生物与奇妙的发光蛋白*

“生物发光”现象一直以来都吸引着科学家的好奇心,它看似神奇,但在自然界十分普遍。“生物发光”现象有着独特的生态功能和进化意义。在漫漫历史长河中,人类对生物发光现象的探索从未停止过。从用发光生物作为最原始的照明工具,到利用绿色荧光蛋白标记细胞内组分;从对生物发光机理的探究,到荧光蛋白种类的开发, 科学的脚步在一步步前进,生命的秘密也在一点点被点亮。     

温度对芥蓝幼苗叶片蛋白质和核酸的含量的影响

以中花芥蓝为材料,设置T1(18/12℃),T2(24/18℃),T3(30/24'C),T4(36/30℃)4个不同温度处理.研究了温度对芥蓝蛋白质和核酸含量的影响.结果表明,可溶性蛋白质含量以T4处理最高,T1处理次之,T3处理再次,T2处理最低.随着温度处理时间的延长各处理样品的可溶性蛋白质含量出现先上升后下降的消长变化.茎端核酸,DNA,RNA含量随着温度升高而下降.随着温度处理时间的延长,各处理样品的核酸、RNA含量除T4处理持续下降外,其他三个处理下降后有所回升;而DNA含量随着处理时间的延长,除T1处理下降后上升外,其他三个处理表现为降-升-降的变化趋势.低温可提高核酸的合成.维持核酸的稳定性.高温不利于核酸,DNA,RNA的合成,导致核酸含量的下降.     

核桃楸树皮提取物抗肿瘤及免疫调节作用的研究

研究核桃楸树皮提取物(HT)的抗肿瘤及免疫调节作用.建立荷瘤小鼠模型,检测HT抑瘤率及对免疫器官、腹腔巨噬细胞吞噬功能、T淋巴细胞增殖、血清IL-2、TNF-α水平以及机体免疫功能的影响;建立小鼠免疫功能低下模型,检测HT对外周血细胞的影响.实验表明HT具有明显的抑瘤作用,高剂量组抑瘤率达54.6%,可显著提高荷瘤小鼠胸腺及脾脏系数、巨噬细胞吞噬功能、T淋巴细胞增殖I、L-2及TNF-α的表达以及延长游泳及耐缺氧时间,并能升高免疫抑制小鼠的白细胞(p<0.050~0.001).HT可有效抑制肿瘤增殖并调节机体的免疫功能.     

邻苯二酚紫共振散射法测定蛋白质含量

基于人血清白蛋白(HSA)对邻苯二酚紫的共振散射的增强效应,拟定了一种新的测定HSA的共振散射法．在pH=4．20的条件下,邻苯二酚紫只有极弱的光散射,但它与蛋白质的结合物却有强烈的共振散射作用,在λ562nm处,光散射有最大的散射强度,并且光散射强度与蛋白质HSA的浓度成线性关系,线性范围为0．0～10．0mg／L,该法简便,快速,用于人血清样品蛋白质的测定,并与用CPA-pA-Ba法测定的结果相比较,结果令人满意．