Salsolinol合成酶的克隆和表达

 Salsolinol 合成酶是一种催化多巴胺和乙醛生成Salsolinol 的酶,与帕金森病发病机制密切相关。研究发现Salsolinol 合成酶与泛素的氨基酸序列高度相似,只有4 个氨基酸位点有差异。本研究以泛素基因为模板,采用聚合酶链式反应技术对4 个位点进行定点突变,将突变基因片段克隆到载体pET30a-GST 上,构建pET30a-GST-Sal synthase 重组载体,转化BL21 后,IPTG 诱导重组菌表达融合蛋白,经亲和层析柱纯化。结果表明,实现目的位点的定点突变,获得Sal 合成酶基因,成功构建了GST-Sal synthase 原核表达质粒,在大肠杆菌中表达纯化后得到较高纯度的GST-Sal synthase 融合蛋白。     

糖尿病肾病患者血脂异常与尿蛋白关系

探讨糖尿病肾病(DN)患者血脂异常与尿蛋白关系.选取122例住院的DN患者,年龄(62.26±12.67)岁,女性49例,男性73例,测定血脂代谢各指标,同时留取24h尿蛋白定量(24h pro),依据蛋白尿定量分为肾病和非肾病综合征组,比较两组相关血脂指标,并行相关性分析比较.肾病综合征组患者的TC(总胆固醇)、NHDL、Lpa和Apo-B水平均显著高于非肾病综合征组(P0.05);TC、NHDL、Apo-B和Apo-E均分别与24h尿蛋白定量和糖化血红蛋白(HbA1C)相关(P0.01),Lpa与24h尿蛋白定量及肾小球滤过率(eGFR)相关,LDL-C及TG仅与HbA1C相关(P0.01),Apo-A1仅与24hpro相关(P0.05);各血脂指标依据四分位法分组,TC、NHDL-C、TG、Apo-A1、Apo-B、Lpa及Apo-E随着数值升高,组内24h尿蛋白定量(≥3.5g)百分比例增高(P0.05),而LDL-C及HDL-C组内比较无统计学差异(P0.05).DN患者随着24h蛋白尿增多,血脂异常更为显著,尤其在肾病综合征患者以TC、NHDL、Lpa及Apo-B升高为主,而血脂异常进一步加重肾脏病进展,有效控制血脂有望改善肾脏病预后.     

混合发酵提高玉米粉的蛋白质含量

用2g玉米粉在250mL的三角瓶中与40mLNa_2HPO_4/KH_2PO_4缓冲液(1/15mol/L,pH6.81,含(NH_4)_2SO_41％)混合,然后接种枯草杆菌和热带假丝酵母,发酵基质置于摇床中30℃,120r/min培养72h,蛋白质含量由7.56％增长到28.47％(干基重,P<0.005)。     

近十年中国新城疫病毒F蛋白氨基酸变异分析

为了研究近十年来中国发现的新城疫毒株的致病性,我们选取2000—2011年间在中国发现的主要为Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ5种基因型的NDV,对其F蛋白氨基酸变异情况进行了分析．结果表明：中国的新城疫病毒的不同基因型的F蛋白氨基酸均出现了不同的变异,不同基因型相同的位点也发生了变异,这些变异造成新城疫病毒的爆发流行．因此,本文为研究NDVF蛋白与其致病性的关系提供了理论依据．     

基于量子化学方法研究杯[4]芳烃4种构象与苯二酚异构体的相互作用

采用量子化学方法,构建了4种构象的杯[4]芳烃(Cx4)分别与邻苯二酚、间苯二酚、对苯二酚的构型,采用DFT-B3LYP/STO-3G*基组对构型进行了优化,得到了最优化的超分子构型,通过频率计算得到了超分子相互作用的稳定化能和吉布斯自由能,并对结果进行了讨论,对杯芳烃固定相的研究有很好的指导意义.     

Sorption Behaviour of Acid Dyes by Soybean Protein/Poly （vinyl alcohol） Blend Fibre

The sorption behaviour of acid dyes by soybean protein/poly（vinyl alcohol） blend fibre was studied. The quantity of dye sorbed by the fibre increased markedly with the decrease in the pH of dyebath and reduced with the addition of neutral electrolyte when the pH was below 4.5, Acid dyes exhibited higher sorption rate constant and lower half dyeing time for the fibre than for spun silk and wool, which was related to the special morphological structure of the fibre, At pH 4, the sorption of disulphonated acid dyes with higher molecular weight followed the dual sorption mechanism of Langmuir plus Nernst-type partitioning well as they interacted with the fibre through electrostatic forces, hydrophobic forces and hydrogen bonds. It is considered that soybean protein and PVA components should be simultaneously dyed by disulphonated acid dyes with higher molecular weight.     

快速测定特定水体中细菌总数的微波破壁水解-荧光衍生法

建立了一种快速测定特定水体中细菌总数的化学方法.利用微波辐射能,破坏细菌细胞壁并辅助水解蛋白质成为氨基酸,而后用荧光胺（FLA）衍生,测定衍生物的荧光强度,进而推算细菌总数.细菌微波破壁水解的最佳实验条件为：水解液中HCl浓度4 mol/L、微波功率400 W、辐射时间10 min.最佳衍生条件为：pH值2.0～2.2,3 mL试液中加入10-3mol/L FLA溶液1.0 mL（FLA与氨基酸的分子比高于130：1）、衍生温度4℃.方法的测定相对标准偏差为3.64%（n=6）,对于大肠杆菌菌液样品,本文所建立的化学方法与标准方法的测定结果无显著性差异.本法可望开发成特定水体样品中细菌总数的快速测定法.     

蛋白质残基相互作用网络在线服务及可视化分析

蛋白质残基相互作用网络对理解蛋白质的结构特征,生物学功能和结合位点预测等研究有重要的作用.然而,现有的蛋白质残基相互作用分析方法易用性较差,需要下载和安装程序,较少提供友好易用的网络可视化功能,极大限制了蛋白质结构、功能和药物设计的相关研究.建立了蛋白质残基相互作用网络在线服务及可视化计算平台(http：//renault.fun),用户不需要下载和编写程序,仅需上传蛋白质结构数据和口袋相关信息即可搭建蛋白质残基相互作用网络,并实现度中心度(degree centrality),接近中心度(closeness centrality)和中介中心度(betweenness centrality)等网络特征的计算.该计算平台可进一步实现蛋白质残基相互作用网络的可视化,分析蛋白质表面结合口袋的网络特性,对理解蛋白质结构和药物设计的相关应用研究有较大的帮助.     

人源蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B功能域及其全酶的原核表达及活性比较

通过设计引物,利用RT-PCR从人肝癌细胞(huh-7)中克隆蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)全长及功能域PTPc的cDNA序列并连接到pGEM-T Vector载体上,测序正确的cDNA序列连接到表达载体pET-32a(+)上,分别在大肠杆菌Transetta(DE3)和BL21(DE3)菌株中稳定表达目标蛋白,经Ni 2+亲和柱纯化后目的蛋白达到了电泳纯,通过酶促动力学方法分析两种蛋白的体外活性.本实验成功表达了PTP1B和PTPc可溶性蛋白,并发现Transetta(DE3)菌株较BL21(DE3)有更高的蛋白表达能力;酶促动力学分析表明,PTP1B全酶的Vmax为16.13mmol·L-1·s-1,Km为0.94mmol/L;其功能域PTPc的Vmax为5.49mmol·L-1·s-1,Km为0.54mmol/L.表明PTP1B全酶的活性高于PTPc功能域的活性.     

衰老大鼠学习行为与海马突触相关蛋白表达的研究

研究衰老大鼠的学习行为与海马内突触相关蛋白的表达．运用Y-迷宫方法对幼年对照组（断乳期）和老年期（22月龄）雄性Sprague—Dawley大鼠进行Y-迷宫空间学习记忆行为训练,之后利用免疫组化和Western blot方法检测2组大鼠海马内突触素（synaptophysin,Syn）、生长相关蛋白（GAP-43）的表达情况．研究结果：（1）2组相比,老年组的学习能力较强,幼年对照组记忆能力较强（P〈0．05）;（2）生长相关蛋白GAP-43在老年组海马内的表达显著高于幼年对照组;而突触素的表达低于幼年对照组（P〈0．01）．提示,GAP-43和突触素可能参与大鼠空间分辨学习记忆的过程,老年大鼠的中枢神经系统保持着潜在的神经元退化修复的功能．