EGFP和ALR融合基因表达载体构建及其在HeLa细胞中的表达

从人血液中提取总DNA,利用PCR技术扩增人肝细胞再生增生因子基因,将其插入表达载体pEGFP—C1的多克隆位点中,构建增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescence protein gene,EGFP）和人肝细胞再生增强因子（human augmenter of liver regeneration gene,ALR）融合基因表达载体pEGFP／ALR,并将其转染Hela细胞系,用含G418的DMEM／F12培养液筛选转基因细胞,然后利用PCR和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测转基因细胞中ALR基因的存在及其表达,用荧光显微镜检测EGFP基因的表达．结果显示：得到了构建正确的EGFP和ALR融合基因表达载体;在转基因细胞中,PCR扩增得到1．7Kb的ALR条带,蛋白电泳得到57KD大小条带．与ALR和EGFP融合蛋白大小相符;荧光显微镜下观察到发绿色荧光的Hela细胞．在转基因细胞中,EGFP和ALR同时存在并表达,绿色荧光蛋白可作为报告基因指示目的基因的表达,从而简化了目的基因繁琐的检测手段．     

绿色荧光蛋白标记的芽孢杆菌在幼龄畜禽体内的动态分布

应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组芽孢杆菌(Baci1010).以GFP为标记研究该工程菌在仔猪和小鸡体内的动态分布.试验结果表明:投喂含质量分数为0.1%工程菌(Baci1010)菌液的全价配合饲料12h后,在仔猪和小鸡的肠道内可检测到该工程菌的存在,36h后在小鸡盲肠内该工程菌的数量达到(155±33)×105个/g,48h后在仔猪盲肠内该工程菌的数量达到(133±35)×105个/g,在仔猪和小鸡体内,该工程菌都能在肠道内迅速复活并繁殖成为有益菌.     

大豆分离蛋白水解多肽聚集物的组成及相互作用

研究了大豆分离蛋白（SPI）的枯草杆菌蛋白酶水解产物的聚集作用，以及参与聚集组分的氨基酸组成及其相互作用．十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和SE—HPLC分析显示，SPI的枯草杆菌蛋白酶降解产物大部分为分子质量小于6．5ku的小分子组分，聚集物主要由这些小分子组分组成．聚集物可溶于脲素、盐酸胍或SDS，而难溶于β-巯基乙醇．氨基酸分析显示聚集物中的疏水性氨基酸含量高于SPI．说明疏水相互作用是聚集物形成的主要推动力，氢键、静电引力参与稳定聚集物的结构，而二硫键很少参与聚集物的形成．文中还从蛋白质分子结构的角度，探讨了SPI的枯草杆菌蛋白酶水解多肽的聚集机理．     

抗坏血酸对大豆某些生理指标的影响

在相等土壤肥力和相同体积花盆中培养的大豆幼苗,分别用浓度5、10、20mmol.L-1的抗坏血酸(VC)和自来水(CK)浇灌,18d后逐步测定正在扩张生长期的叶片中可溶性糖、可溶性蛋白含量、硝酸还原酶(NRA)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性.结果表明:10mmol.L-1 VC处理的大豆叶片可溶性糖、可溶性蛋白含量,SOD酶活性比CK均有所提高;3个处理的硝酸还原酶(NRA)活性均比CK有所增大;10mmol.L-1 VC处理对POD酶活性影响不明显.     

Nicotinamide/nicotinic acid mononucleotide adenylyltransferase, new insights into an ancient enzyme

Nicotinamide/nicotinic acid mononucleotide adenylyltransferase (NMNAT) has long been known as the master enzyme in NAD biosynthesis in living organisms. A burst of investigations on NMNAT, going beyond enzymology, have paralleled increasing discoveries of key roles played by NAD homeostasis in a number or patho-physiological conditions. The availability of in-depth kinetics and structural enzymology analyses carried out on NMNATs from different organisms offer a powerful tool for uncovering fascinating evolutionary relationships. On the other hand, additional functions featuring NMNAT have emerged from investigations aimed at unraveling the molecular mechanisms responsible for complex biological phenomena such as neurodegeneration. NMNAT appears to be a multifunctional protein that sits both at the core of central metabolism and at a crossroads of multiple cellular processes. The resultant wealth of biochemical data has built a robust framework upon which design of NMNAT activators, inhibitors or enzyme variants of potential medical interest can be based.     

For whom the bell tolls? DING proteins in health and disease

DING proteins, identified mainly by their eponymous N-terminal sequences, are ubiquitous in living organisms. Amongst bacteria, they are common in pseudomonads, and have been characterised with respect to genetics and structure. They form part of a wider family of phosphate-binding proteins, with emerging roles in phosphate acquisition and pathogenicity. Many DING proteins have been isolated in eukaryotes, in which they have been associated with very diverse biological activities, often in the context of possible signalling roles. Disease states in which DING proteins have been implicated include rheumatoid arthritis, lithiasis, atherosclerosis, some tumours and tumour-associated cachexia, and bacterial and viral adherence. Complete genetic and structural characterisation of eukaryotic DING genes and proteins is still lacking, though the phosphate-binding site seems to be conserved. Whether as bacterial proteins related to bacterial pathogenicity, or as eukaryotic components of biochemical signalling systems, DING proteins require further study. Electronic supplementary material  The online version of this article (doi:) contains supplementary material, which is available to authorized users.     

外源激素对牡丹胚性愈伤组织诱导的影响

为了探讨外源激素的添加对牡丹胚性愈伤组织诱导过程中生理生化特性的影响.以牡丹品种‘凤丹白’叶柄诱导的愈伤组织为材料,研究不同浓度NAA和TDZ对胚性愈伤组织诱导过程中POD(过氧化物酶)、SOD(超氧化物歧化酶)、CAT(过氧化氢酶)和可溶性蛋白的影响.结果表明,抗氧化酶类活性和蛋白质含量与胚性细胞早期发育发生密切相关,在胚性愈伤组织形成时期,POD和CAT活性变化趋势基本一致,而SOD活性变化则相反;SOD活性经过短暂下降后回升,于第15天达到第二个峰值后稳步下降,表明SOD在胚性愈伤组织诱导初期起主导作用;POD与CAT活性出现峰值时间较SOD滞后,推测POD和CAT活性的升高能够促进胚性愈伤组织的形成和早期发育;可溶性蛋白含量于胚性细胞形成前一直保持较高水平,在第15天达到峰值后下降,说明其含量的升高有利于胚性细胞的形成和发育,其累积对形成胚性愈伤组织有促进作用.添加NAA 0.2 mg/L和TDZ 0.5 mg/L对牡丹胚性愈伤组织的诱导效果最好.     

拟南芥钙依赖蛋白激酶CPK11与ABA响应元件结合因子ABF4相互作用的研究

为研究钙依赖蛋白激酶CPK11参与ABA信号通路的方式,本文利用体外酵母双杂实验(Y2H)以及体内双分子荧光互补实验(BiFC)分析CPK11与ABA响应元件结合因子(ABA-responsive element binding factors, ABFs)ABF4之间的关系.酵母双杂交实验表明CPK11与ABF4存在体外相互作用,双分子荧光互补实验表明CPK11与ABF4存在体内相互作用.以上实验共同证明CPK11与ABF4存在直接相互作用.作为CPK11的同源蛋白CPK4与转录因子ABF4在植物体内也存在相互作用.以上实验表明CPK11及其同源蛋白CPK4可能通过与转录因子ABF4相互作用从而参与钙离子介导的ABA信号通路.     

共振光散射光谱法测定微量蛋白质

利用光吸收和共振光散射(RLS)光谱研究了铝试剂(ATA)与蛋白质在水溶液中的相互作用.在pH2.50时,蛋白质可使弱的ATA光散射信号曾强.基于这种现象,我们运用RLS技术,建立了测定纳克级蛋白质的方法.该方法简单、实用、灵敏.BSA的线性范围为0.010~27.4μg/mL,HSA的线性范围为0.010~30.5μg/mL.BSA的检测限为10.7 ng/mL,HSA的检测限为10.2 ng/mL.对实际人血清样品中的蛋白质进行了测定,其结果与临床方法一致.氨基酸、金属离子或其它共存化合物的干扰很小.     

日本沼虾卵巢发育特征及其蛋白质的变化

报道了日本沼虾卵巢发育特征及其卵巢发育过程中蛋白质的变化.日本沼虾在发育过程中,卵母细胞体积逐渐增大,其干物质含量随卵巢发育成熟而增加;凝胶电泳发现卵巢在不同的发育时期,蛋白质的种类有明显的不同.