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81.
克隆一个源于北极冻土沙雷氏菌的脂肪酶基因lip18,实现其在大肠杆菌中的表达,并进行酶学性质研究.克隆脂肪酶基因lip18,并构建p ET-28a(+)-lip18重组表达载体,导入大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导优化重组蛋白表达,并研究其酶学性质.克隆得到脂肪酶基因lip18,全长为1 842 bp,编码614个氨基酸.重组菌的诱导温度对蛋白表达影响很大,在最适诱导温度为20℃时脂肪酶大量表达,重组脂肪酶的相对分子质量约为65 ku.酶学性质研究表明:重组酶高效水解C10~C16的中、长链脂肪酸,最适作用温度30℃,最适作用pH值7.0,并且在0℃条件下有一定的催化活性,热稳定性差,是低温中性脂肪酶;同时,对有机溶剂有较好的耐受性. 相似文献
82.
酵母snoRNA基因簇启动子的比较分析 总被引:1,自引:1,他引:0
报道对酿酒酵母snoRNA基因簇启动子序列的研究结果.通过计算机分析,发现酿酒酵母中Z2Z8和SnR190U14snoRNA基因簇有相似的启动子结构.这两个snoRNA基因簇都是由一个上游的启动子负责整个基因簇的转录,产生多个顺反子snoRNA的前体,然后再加工成熟为各个独立的snoRNA.在启动子保守序列TATAbox的上游还发现2个RAP1序列,表明snoRNA基因簇的表达可以通过RAP1元素与核糖体蛋白基因的表达协同调控.这是在snoRNA基因的启动子中首次发现RAP1调控元素.对snoRNA基因簇的进化特点也进行了讨论. 相似文献
83.
植物基因的克隆与转化研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
朱玉贤 《河北科技大学学报》1999,20(2):5-9,28
综述了近20a来植物基因工程、特别是DNA重组技术和基因遗传转化技术的发展历程,比较了各种分子克隆和转化方法的优劣,将有助于广大青年学者了解并掌握现代分子生物学的最新动态 相似文献
84.
A DNA fragment about 1.5 kb has been isolated from spleen of adult Chinese swine by RT-PCR. The DNA fragment encodes immunoglobulin IgG H chain gene. Sequencing analysis showed that the DNA fragment is 1 425 bp long, complete CDS. The C region of the gene has been classified as Subclass Ig γ3, and is the same as reported by Sun et al., but V region of the present gene is 42 bp less by comparison. The gene has been ligated into expression vector pET-3b (NSEB)( - ). A protein about 52 ku has been expressed in E. coli with an expression level of about 21 % . 相似文献
85.
利用人胚胎肝组织提取总RNA,从总RNA 中分离纯化出m RNA,经逆转录得到cDNA 第一条链,并以之为模板和相应寡聚脱氧核苷酸为引物,进行PCR 合成人锰超氧化物歧化酶cDNA 基因,将所得cDNA 克隆到质粒pBluescriptSK 上,转化大肠杆菌DH5α细胞,进行诱导表达筛选,将筛选的克隆进行cDNA 全序列测定 相似文献
86.
利用启动子探钍型载体pSUPV4 直接在大肠杆菌细胞中克隆到多个来自白腐丝状真菌-黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium )的基因启动子片段.这些基因启动子片段能在大肠杆菌细胞中启动重组卡那霉素抗性基因(rkanr)的表达,不同片段赋予宿主细胞以不同的卡那霉素抗性水平,最高的可达1000μg/m L,最低的则为50μg/m L.琼脂糖凝胶电泳显示这些重组质粒DNA 中均有不同大小的插入片段,其范围是0.5~6.0kb.选取一个插入3.9kb 的重组质粒pPC33 所作的Southern 杂交结果表明,插入片段以单拷贝形式存在于P.chrysosporium 的基因组中.当此片段5′-端被除去1.8kb 后,余下的2.1kb 片段可使融合的Kanr 基因的表达效率提高60% . 相似文献
87.
选取3种总蛋白含量差异较大的水稻为材料,在分析其谷蛋白含量的基础上,克隆它们的Gt1启动子,并采用vector NTI软件对这3个Gt1启动子序列进行比较.结果显示,在不同总蛋白和谷蛋白含量的水稻品种中,Gt1谷蛋白基因启动子是有差异的. 相似文献
88.
2株黄瓜花叶病毒卫星RNA的cDNA克隆及序列分析 总被引:1,自引:1,他引:0
在辣椒上获得2株黄瓜花叶病毒卫星RNA(CS1和CS2),通过cDNA克隆和测序并将其与35个已知的卫星RNA序列进行同源比较.结果表明,CS1和CS2的全长序列分别为336,382nt;与CS2、Rs和Yns比较,CS1从第80位起有连续30多个核苷酸的缺失.由此推测,卫星RNA的二级结构也随这些核苷酸的缺失而发生了改变.将CMV卫星RNA分为4个组,卫星RNA CS1属于中小卫星组小卫星亚组Ⅱ,CS2属于长卫星组,CS1与其他来源的卫星RNA的同源性为80.4%~93.7%,CS2与其他来源的卫星RNA的同源性则为75%~94.8%;两之间的序列同源性为86%.CMV卫星RNA的序列同源性和分组与卫星RNA分布的地区和寄主来源并无直接联系. 相似文献
89.
竹红菌素是我国特有的一类苝醌类光敏色素,在开发新型抗肿瘤抗病毒药物、光敏活性农药及新型光电转换材料等方面应用前景广阔.聚酮合酶( Polyketide synthase,PKS)是合成竹红菌素的一种关键酶,通过全基因组测序及分析发现在Shiraia sp. Slf14中存在一个III型聚酮合酶基因.利用RT-PCR技术,以其总RNA为模板,扩增得到目的片段,并成功构建表达载体pET-22b(+)-PKSIII,采用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,在大肠杆菌BL21( DE3)中成功表达出了目的蛋白,SDS-PAGE结果显示表达重组产物分子质量约为43 kDa,与理论值一致,为III型聚酮合酶的催化活性研究提供理论依据. 相似文献
90.
通过分析GenBank中Burkholderia cepacia脂肪酶的序列,设计简并引物,采用同源克隆的策略,成功地从B. cepacia XYU-6菌株中克隆到脂肪酶基因bcl,其大小为1095 bp,编码364个氨基酸( GenBank登陆号KR233260).将bcl基因与质粒pET-28b(+)连接并转化大肠杆菌,使脂肪酶BCL的大肠杆菌胞内过表达,其活力是野生菌的12.9倍.通过将bcl基因克隆到细胞表面展示载体pZXL中,构建脂肪酶BCL的细胞表面展示工程菌,使BCL在Lpp-OmpA引导下定位于大肠杆菌细胞表面,其活力是野生菌的3.9倍.研究结果为脂肪酶BCL后续的分子改造和应用奠定基础. 相似文献