异色瓢虫的HSP90基因的克隆与特性分析

采用同源克隆和锚定PCR技术,从异色瓢虫Harmonia axyridis(Pallas)中克隆到热休克蛋白HSP90基因的cDNA全序列(Genbank number:FJ501962)。cDNA全长2 480 bp,包含3′非编码区域(UTR)为200 bp和5′UTR为126 bp,开放阅读框(ORF)长2 154 bp,编码717个氨基酸。预测的相对分子质量为82 230,理论等电点为4.96,无糖基化位点、跨膜结构和信号肽。在N端具有HSP90基因保守的ATPase结构,含有HSP90家族的C末端的保守序列EEVD。与赤拟谷盗Tribolium castaneum相比较,同源性高达90%,系统发育分析也表明两者的亲缘关系最近。HaaHSP90基因的克隆和比较分析为进一步深入研究异色瓢虫的抗逆机理及其进化具有重要意义。     

多模式项目资源配置及其免疫优化决策

针对多模式下单项目资源配置问题,在项目拥有的资源受限下,综合工期与资源均衡等因素,探讨资源受限下项目资源配置优化模型。借助克隆选择原理的免疫应答机制和多种生物免疫机理,设计免疫克隆选择算法求解所获模型的最佳决策方案。比较性的数值实验结果论证了模型的合理性和算法的有效性。     

以潮霉素B磷酸转移酶基因为遗传标记的启动子探针型载体的构建

用来自大肠杆菌的潮霉素Ｂ磷酸转移酶基因（ｈｙｇｒ）作为遗传标记构建了启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ８,该基因的转录和翻译起始区以及５’－端编码区两个密码子均被除去,载体骨架为大肠杆菌质粒ｐＵＧＶ２,该标记基因的终止子来自Ｐｈａｎｅｒｃｈａｅｔｅｃｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ的ＬＩＰ６基因     

日本血吸虫Sj23与IL-12多价DNA疫苗的构建

构建能共同表达日本血吸虫23kDa膜抗原(Sj23)与细胞因子IL-12的多价DNA疫苗．RT-PCR的方法从日本血吸虫成虫获得Sj23的基因片段,克隆到载体pVIVO2-mIL12／mcs上,进行酶切和测序鉴定．采用免疫荧光的方法检测多价DNA疫苗pVIVO2-Sj23-IL12在小鼠骨骼肌细胞的表达．成功地构建了能共同表达日本血吸虫23kDa膜抗原(Sj23)与细胞因子IL-12的多价DNA疫苗．此多价DNA疫苗在免疫小鼠肌细胞的细胞膜和细胞浆均获得了Sj23的表达．     

枯草芽孢杆菌B10木聚糖酶基因的分子生物学

从腐烂苎麻周围土壤中经过初筛和复筛得到具有脱胶能力的枯草芽孢杆菌菌株B10。采用PCR方法对B10的木聚糖酶基因进行克隆．在木聚糖选择平板上用刚果红染色法筛选出阳性克隆,对阳性克隆的重组质粒进行鉴定和测序．结果表明,该木聚糖酶基因全长642个碱基,编码214个氨基酸。与已报道的来自枯草芽孢杆菌木聚糖酶的基因只有2个碱基的差别．该基因在大肠杆菌中表达。过夜培养物中胞外、胞内和胞质间的酶活分布分别为22．7％,28．2％和49．1％．该木聚糖酶的最适作用pH值为6,最适作用温度为50℃。具有较宽pH范围和较好热稳定性。     

钩端螺旋体LAg42膜蛋白基因的克隆及原核表达

分别以问号状赖型钩体017株,56601株及双曲钩体PatocI株基因组为模板,PCR扩增目的基因lag42与质粒pET32a(＋)构建重组原核表达质粒,在大肠杆菌BL21中诱导表达.结果显示不同毒力赖型钩体均能扩增出约1100 bp的片段,而PatocI株则未能扩增出目的片段;不同赖型钩体的lag42基因的同源性很高.融合表达质粒pET-lag42转化大肠杆菌BL21后,经IPTG诱导,表达出约62kDa的重组融合蛋白,用Western blotting证实其有良好的抗原性,纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获     

哈萨克族食管癌中Survivin基因启动子区CpG岛真核表达载体的构建

 食管癌的形成与多种基因的异常表达有关,哈萨克族食管癌的发病又有其独特的机制。克隆并研究早期相关基因的启动子区CpG岛可为进一步揭示其发病机制奠定基础。本研究构建Survivin基因启动子区CpG岛真核表达载体,探讨其甲基化在新疆哈萨克族食管癌中的作用。通过Primer 5.0设计软件设计引物,采用常规PCR法从新疆哈萨克族食管癌患者的基因组DNA中扩增出Survivin基因启动子区CpG岛,CpG岛与真核表达载体pCAT3 promoter经HindⅢ单酶切后,连接试剂盒将二者连接并转导入甲基化酶缺陷的大肠杆菌E. coli ER1793中扩增。DNA测序证明获得Survivin基因启动子区CpG岛,并成功克隆入真核表达载体pCAT3 promoter中。     

Identification of a bi-directional promoter from Tomato yellow leaf curl China virus

A bi-directional promoter of Tomato yellow leaf curl China virus (TYLCCNV) was obtained with the total DNA from TYLCCNV isolate Y10 infected tobacco leaves as a template. Plant expression vectors were constructed by fusing the amplified DNA fragment with the gus gene and nopaline terminator in different orientations. The vectors containing promoter fragments were transferred into leaf cells and plant stems of Nicotiana benthamiana by Agrobacterium-mediated method. Transient expression results showed that both the complementary and virion-sense promoters could drive the gus gene to express, and the GUS activity of the complementary-sense promoter was stronger than that of the virion-sense. Co-expression of the vector containing βC1 gene of TYLCCNV DNAβ with the vector containing a bi-directional promoter revealed that the βC1 protein has no impact on expression of either the virion- or the complementary-sense promoter.     

带有绿色荧光蛋白基因(gfp)的植物重组表达质粒pBI-GFP的构建

利用 DNA重组技术 ,将经定点突变改造的绿色荧光蛋白基因 ( gfp)克隆到植物表达载体p BI-1 2 1中 ,成功地构建了植物重组表达质粒 p BI-GFP.