烟酸羟基化菌株睾酮丛毛单胞菌JA1抗性质粒的消除

睾酮丛毛单胞菌JA1可羟基化烟酸产生6-羟基烟酸,并且对多种抗生素具有抗性.碱变性法提取JA1细胞内的质粒, 检测到一个约19 kb大小的质粒.用0.002 5% SDS进行质粒消除实验,结果表明,质粒消除后菌株对卡那霉素敏感,但仍对氨苄青霉素、安普霉素和链霉素具有抗性,推测质粒携带卡那霉素的抗性基因.同时,质粒消除后,JA1菌株烟酸脱氢酶酶活性没有变化,推测烟酸脱氢酶的基因并不在质粒上.     

外源乳酸脱氢酶基因在双歧杆菌中的表达

以大肠杆菌 双叉双歧杆菌的穿梭质粒pHJ为基础,插入从Lactococcuslactis总DNA中用PCR方法扩增得到的报告基因乳酸脱氢酶基因(ldh),构建了双叉双歧杆菌的表达质粒pHJ LDH,并采用电转化法导入双叉双歧杆菌进行了表达研究.对双叉双歧杆菌总蛋白的SDS PAGE分析结果表明,ldh报告基因的表达产物形成了明显的条带,Western blotting结果确认了该条带为ldh基因的产物.LDH的酶活性定量测定结果表明,重组双叉双歧杆菌的蛋白粗抽提液中LDH的比活性为5.5U/mg,菌中LDH的表达量约为2mg/L.此工作为今后双叉双歧杆菌的基因工程奠定了基础.     

A novel salicylaldehyde dehydrosenase-NahV involved in catabolism of naphthalene from Pseudomonas putida ND6

A novel salicylaldehyde dehydrogenase involved in catabolism of naphthalene from Pseudomonas putida ND6, NahV, has been identified. NahV exhibited lower identity in amino acid sequence with the classic salicylaldehyde dehydrogenase, NahF, from P. putida ND6. This is the first report of an isofunctional enzyme of bacterial salicylaldehyde dehydrogenase. Comparison of Km and Vmax values of NahV and NahF demonstrated that NahF has a more efficient catalytic reaction than NahV, while NahV has much higher affinity for salicylaldehyde and NAD^＋. Both enzymes exhibited broad substrate specificities and catalyzed the oxidation of salicylaldehyde, 5-chlorosalicylaldehyde, formaldehyde, m-nitrobenzaldehyde, o-nitrobenzaldehyde, o-methoxybenxaldehyde, glutaraldehyde, caprylic aldehyde, and glyoxal. However, the relative rates at which the substituted analogs are transformed differ considerably. NahV activity could be enhanced by Fe^2＋, Cu^2＋ and Zn^2＋; whereas NahF activity could only be stimulated by Fe^2＋, NahF is more stable than NahV at elevated temperatures. Dot-blot hybridization analyses showed that nahF-like genes occurred in all naphthalene-degradation bacteria isolated in this study, whereas nahV-like genes were present in only some naphthalene-degrading bacteria.     

生物酶对五氯联苯降解的初步研究

多氯联苯（PCBs）是具有代表性的持久性有机污染物（POPs）,其氯代数目越多,降解越难。本文以分离筛选的6株PCBs降解细菌为材料,制备了含有NADH辅酶再生系统关键酶甲酸脱氢酶（FDH）的PCBs降解复合酶,研究了其对PCBs的降解效果。结果表明,Pseudomonas sp. MGB11胞内酶/FDH复合酶对五氯联苯PCB114的降解率在10 h内可达69.4%,对于高毒性、难降解的高氯PCBs的污染修复具有应用价值。     

四个意大利蜜蜂品系苹果酸脱氢酶Ⅱ基因的遗传差异分析

研究了意大利蜜蜂(A.m.ligustica)4个王浆、蜂蜜生产性能不同品系-美意(Em)、澳意(Eo)、苏意(Es)和平湖浆蜂(Ep)的MDHⅡ同工酶基因型频率、基因频率及杂合纯合度.试验发现,MDHⅡ的a、b、c三个等位基因在4个品系中出现的频率不同.c在Em、Eo、Es和Ep中的基因频率分别为0.507、0.483、0.680和0.820,为优势等位基因.该结果表明在产浆性能高的品系中c基因频率较高,意味着可将c基因频率作为意蜂王浆产量性能的一个遗传标记.等位基因a在Em、Eo、Es和Ep中频率分别为0.323、0.263、0.193和0.087;在Em中出现的频率最高.而等位基因b在Eo中频率(0.253)高于其他3个品系(Em,0.170;Es,0.127;Ep,0.093).Ep的纯合度最高,达0.753,高于Em(0.533)、Eo(0.633)和Es(0.540).经独立性检验,4个意蜂品系MDHⅡ同工酶的基因型频率、基因频率、纯合度均达到极显著差异水平.     

加强辅酶循环再生实现不对称合成(S)-1-苯基-1,2-乙二醇

以β-羟基苯乙酮为底物,利用羰基还原酶不对称合成(S)-1-苯基-1,2-乙二醇(PED)过程中,葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化NADPH再生反应与还原反应形成耦联,合成(S)PED的浓度分别达到0.78 g·L-1和0.75 g·L-1,对映体过量值(e.e.%)分别为91.84％和63.96％;连续分批还原反应后其总转化数(TTN)为26和58;经硫酸铵盐析、离子交换层析DEAE Sepharose、苯基疏水层析Phenyl Sepharose和亲和层析Blue Sepharose后得到电泳纯     

固定化乳酸脱氢酶的催化性质研究

研究了固定化乳酸脱氢酶(LDH)的制备和催化性质,讨论了戊二醛体积分数、酶的偶联时间、pH值对酶固定化的影响.对游离酶和固定化酶催化性质的研究结果表明:酶促反应最适pH分别为9.2和10.2,最适温度分别为51℃和50℃,米氏常数分别为16.2 mmol/L和0.7 mmol/L.与游离酶相比,固定化酶的活力稳定性更佳,有更好的贮存稳定性和复用性.     

山蝠,绒山蝠和爪哇伏翼乳酸脱氢酶同工酶的比较研究

采用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳法对山蝠,绒山蝠和爪哇伏翼的脑,肾,骨骼肌和胃４种组织的乳酸脱氢酶同工酶进行了研究。结果表明,从酶谱的区带数目,分布,迁移率,各区带相对含量和亚基的相对含量来看,均表明三者的相应组织的酶谱各具特征,而且差异极为显著,表现出很强的种属特异性。     

高产木糖醇酵母菌的筛选鉴定及两级法发酵特性

从300多种土壤样品中进行筛选,最终得到10株可耐受300 g/L木糖的酵母菌株,且其木糖醇转化率超过64.0%.其中酵母菌株SB18在150 g/L木糖下的木糖醇转化率为68.5%,为相同条件下转化率最大的菌株,并经18SrDNA测序鉴定为热带假丝酵母.酶活测定结果显示SB18木糖还原酶主要依赖辅因子还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH),其酶活性远大于木糖醇脱氢酶活性.对SB18进行两级法发酵条件研究,确定补充氮源为尿素和酵母提取物,接种量为0.5 g/L,转速转换时间为36 h.在此条件下由250 g/L木糖摇瓶发酵252 h得到207.65 g/L木糖醇,转化率为83.1%,达到理论值的91.8%.本研究表明酵母菌SB18在高浓度木糖醇的工业生产中具有很大的应用潜力.     

三元全酶系统的共固定化和辅酶再生

本文研究了用对-氨基苯砜乙基(ABSE)-交联琼脂糖做载体,通过戊二醛共价交联,对醇脱氨酶、乳酸脱氢酶、辅酶Ⅰ进行了位置对位置的共固定化。按本实验方法得到的固定化三元全酶系统的辅酶再生能力为相应游离酶系统的5倍。本文还对该三元全酶系统的固定化机理和辅酶再生性能做了一定的讨论。