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51.
王亚军 《四川大学学报(自然科学版)》2016,53(4)
甲状旁腺激素(PTH)与动物钙稳态调控和骨代谢平衡相关,其生理作用是通过甲状旁腺激素受体(PTHR)介导。甲状旁腺激素受体家族包括三个不同的亚型,其中甲状旁腺激素3型受体(PTH3R)在非哺乳类脊椎动物生长发育过程中起着重要作用,然而PTH3R在鸟类中的研究则相对较少。 本研究采用RT-PCR方法,首先克隆了珍珠鸟和家鸡的PTH3R基因全长cDNA序列。结果显示,家鸡PTH3R (cPTH3R) cDNA全长1632 bp,编码543个氨基酸,珍珠鸟PTH3R(zPTH3R-w) cDNA序列全长1563 bp,编码520个氨基酸,其蛋白均含有信号肽序列、七次跨膜区等特征性结构。此外,在珍珠鸟中还发现一个新剪接变体zPTH3R-v1,其cDNA序列全长1468 bp,编码488个氨基酸,其缺失了第3外显子进而导致第1跨膜结构域缺失。利用生物信息学方法,我们还对珍珠鸟和家鸡PTH3R蛋白序列进行三维建模。 采用RT-PCR方法,本研究也对珍珠鸟PTH3R基因进行组织表达分析。结果显示,zPTH3R及其剪切变体zPTH3R-v1在珍珠鸟脑及外周组织中广泛表达。珍珠鸟和家鸡PTH3R基因的成功克隆与结构解析,将为下一步开展PTH3R在鸟类中的功能研究奠定重要基础。 相似文献
52.
克隆一个源于北极冻土沙雷氏菌的脂肪酶基因lip18,实现其在大肠杆菌中的表达,并进行酶学性质研究.克隆脂肪酶基因lip18,并构建p ET-28a(+)-lip18重组表达载体,导入大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导优化重组蛋白表达,并研究其酶学性质.克隆得到脂肪酶基因lip18,全长为1 842 bp,编码614个氨基酸.重组菌的诱导温度对蛋白表达影响很大,在最适诱导温度为20℃时脂肪酶大量表达,重组脂肪酶的相对分子质量约为65 ku.酶学性质研究表明:重组酶高效水解C10~C16的中、长链脂肪酸,最适作用温度30℃,最适作用pH值7.0,并且在0℃条件下有一定的催化活性,热稳定性差,是低温中性脂肪酶;同时,对有机溶剂有较好的耐受性. 相似文献
53.
提出了一种能够实现两维移动和一维转动的空间3自由度并联机构,其固定平台与运动平台通过1个PU^支链、2个CU^支链相连接。基于该机构运动约束方程,得到位置反解、正解和速度方程的封闭表达式。最后,应用实例验证了理论分析的正确性。 相似文献
54.
植物基因的克隆与转化研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
朱玉贤 《河北科技大学学报》1999,20(2):5-9,28
综述了近20a来植物基因工程、特别是DNA重组技术和基因遗传转化技术的发展历程,比较了各种分子克隆和转化方法的优劣,将有助于广大青年学者了解并掌握现代分子生物学的最新动态 相似文献
55.
A DNA fragment about 1.5 kb has been isolated from spleen of adult Chinese swine by RT-PCR. The DNA fragment encodes immunoglobulin IgG H chain gene. Sequencing analysis showed that the DNA fragment is 1 425 bp long, complete CDS. The C region of the gene has been classified as Subclass Ig γ3, and is the same as reported by Sun et al., but V region of the present gene is 42 bp less by comparison. The gene has been ligated into expression vector pET-3b (NSEB)( - ). A protein about 52 ku has been expressed in E. coli with an expression level of about 21 % . 相似文献
56.
利用人胚胎肝组织提取总RNA,从总RNA 中分离纯化出m RNA,经逆转录得到cDNA 第一条链,并以之为模板和相应寡聚脱氧核苷酸为引物,进行PCR 合成人锰超氧化物歧化酶cDNA 基因,将所得cDNA 克隆到质粒pBluescriptSK 上,转化大肠杆菌DH5α细胞,进行诱导表达筛选,将筛选的克隆进行cDNA 全序列测定 相似文献
57.
基于模糊几何理论,通过隶属函数的建立,首次将矢量GIS中几何数据的位置不确定性同点与目标间拓扑关系的判定结合起来,详细地分析了确定性和不确定性点与含有不确定性的GIS目标间拓扑关系的判断。并将分析结果应用于区域边界的判定之中,以丰富和完善现有区域边界判定的理论和成果。 相似文献
58.
2株黄瓜花叶病毒卫星RNA的cDNA克隆及序列分析 总被引:1,自引:1,他引:0
在辣椒上获得2株黄瓜花叶病毒卫星RNA(CS1和CS2),通过cDNA克隆和测序并将其与35个已知的卫星RNA序列进行同源比较.结果表明,CS1和CS2的全长序列分别为336,382nt;与CS2、Rs和Yns比较,CS1从第80位起有连续30多个核苷酸的缺失.由此推测,卫星RNA的二级结构也随这些核苷酸的缺失而发生了改变.将CMV卫星RNA分为4个组,卫星RNA CS1属于中小卫星组小卫星亚组Ⅱ,CS2属于长卫星组,CS1与其他来源的卫星RNA的同源性为80.4%~93.7%,CS2与其他来源的卫星RNA的同源性则为75%~94.8%;两之间的序列同源性为86%.CMV卫星RNA的序列同源性和分组与卫星RNA分布的地区和寄主来源并无直接联系. 相似文献
59.
竹红菌素是我国特有的一类苝醌类光敏色素,在开发新型抗肿瘤抗病毒药物、光敏活性农药及新型光电转换材料等方面应用前景广阔.聚酮合酶( Polyketide synthase,PKS)是合成竹红菌素的一种关键酶,通过全基因组测序及分析发现在Shiraia sp. Slf14中存在一个III型聚酮合酶基因.利用RT-PCR技术,以其总RNA为模板,扩增得到目的片段,并成功构建表达载体pET-22b(+)-PKSIII,采用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,在大肠杆菌BL21( DE3)中成功表达出了目的蛋白,SDS-PAGE结果显示表达重组产物分子质量约为43 kDa,与理论值一致,为III型聚酮合酶的催化活性研究提供理论依据. 相似文献
60.
通过分析GenBank中Burkholderia cepacia脂肪酶的序列,设计简并引物,采用同源克隆的策略,成功地从B. cepacia XYU-6菌株中克隆到脂肪酶基因bcl,其大小为1095 bp,编码364个氨基酸( GenBank登陆号KR233260).将bcl基因与质粒pET-28b(+)连接并转化大肠杆菌,使脂肪酶BCL的大肠杆菌胞内过表达,其活力是野生菌的12.9倍.通过将bcl基因克隆到细胞表面展示载体pZXL中,构建脂肪酶BCL的细胞表面展示工程菌,使BCL在Lpp-OmpA引导下定位于大肠杆菌细胞表面,其活力是野生菌的3.9倍.研究结果为脂肪酶BCL后续的分子改造和应用奠定基础. 相似文献