常规PCR与RACE结合法快速从cDNA文库中克隆基因

首先根据Fe(Ⅱ)-转运蛋白基因家族的保守区设计同源的常规PCR引物(F1，R1)，扩增出490bp的特异片段。然后根据RACE法原理，巧妙地设计3′RACE(F2)和5′RACE(R3)特异性引物，使两者既能分别与文库载体上的筛选扩增引物配对扩增cDNA 3′和5′末端序列，又能使扩增出的3′RACE和5′RACE产物序列有重叠部分；另外设计引物时还兼顾到使F2和R3也能配对，从而能对3′RACE和5′RACE扩增产物进行双特异性引物常规PCR鉴定。该方案不但能够直接根据序列鉴定3′RACE和5′RACE产物是否为同一基因序列，还能快捷地用常规PCR鉴定3′RACE和5′RACE扩增产物是否为特异性扩增，避免了对非特异性扩增产物的克隆测序等繁琐的鉴定过程，优化了基因克隆策略。最后根据拼读出的全长序列设计引物(F4，R4)扩增出完整编码区。应用该方法成功地从小金海棠缺铁处理的根系cDNA文库中克隆了Fe(Ⅱ)-转运蛋白基因的cDNA。说明该方案是一种从cDNA文库中克隆目的基因的快捷优化方法。     

利用支持向量机预测生物膜蛋白类型

利用统计学习理论中的支持向量机(SVM)，基于氨基酸组分含量预测生物膜蛋白类型。使用文献中2059个训练集和2625个检验集膜蛋白序列数据，运用统计预测中的校准检验，留一法交叉检验和独立数据集检验方法进行分类预测。结果表明，SVM对膜蛋白类型预测具有明显的优越性，该算法对当前已有方法起到重要的补充作用。     

一个特殊的顺式发夹核酶对感染烟草原生质体的影响

研究一个烟草花叶病毒(TMV)cDNA3′末端被特异切割的发夹核酶对感染原生质体的作用。选用一个外源基因绿色水母荧光蛋白(GFPuv)作为报道基因，取代了大部分的CP编码区域，以研究在烟草原生质体中发夹核酶对TMV载体的复制，通过GFP的表达来确定表达量。顺式发夹核酶对TMV载体感染效率的影响通过体外转录来观察。TMV GFPRIB体外转录感染原生质体的效率比与其不含该核酶的对应物的感染效率高3～5倍。Northern杂交结果表明，包括核酶在内的3’末端非病毒序列在体外转录反应开始后就被顺式发夹核酶切除了。当直接用载体DNA pSTMVGFPRIB感染原生质体时，感染原生质体的数量比与之相对应的pSTMVGFP NOS感染原生质体数多50％～80％。     

日本沼虾感光细胞中Gq蛋白α亚基的鉴定与亚细胞定位

Gq蛋白是大多数无脊椎动物感光器中光信号传导中酶反应链的第二信使．本文用免疫印迹的方法研究了日本沼虾感光器中Gqa的存在，并应用免疫电镜技术观察了Gq蛋白在其感光器中亚细胞的分布，为研究Gq蛋白在光信号传导中的作用提供新的依据．     

苹果褪绿叶斑病毒库尔勒香梨分离物外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达

将ACLSV CP基因克隆到表达载体ρET-28a( )中，转化大肠杆菌BL21，筛选得到阳性克隆pET-ACP，用IPTG诱导使其表达，SDS-PAGE电泳分析表明，预期的22kD外壳蛋白在大肠杆菌中得到大量表达，并加以纯化，用于制备抗血清。     

利用枯草杆菌整合表达嗜铬粒蛋白抗真菌片段

为实现CGA1-76片段基因在枯草杆菌中的稳定表达,将CGA1-76片段基因的表达元件重组到枯草杆菌转座子质粒pHV1249微转座子mini-Tn10内,利用mini-Tn10将CGA1-76片段基因的表达元件整合到枯草杆菌DB1342染色体上,用氯霉素和红霉素筛选枯草杆菌转座工程菌DB1342(TnSVTQ).DB1342(TnSVTQ)在无选择压力条件下经10 d连续传代培养,转座子内氯霉素抗性丢失率为0%,说明转座子稳定整合在DB1342染色体上.SDS-PAGE和免疫印迹分析结果表明,在蔗糖诱导下,CGA1-76片段基因在DB1342(TnSVTQ)中获得表达,产物被分泌到细胞外.孔穴琼脂扩散法测定表达上清的抑制真菌活性,结果表明重组CGA1-76能抑制烟曲霉菌和黄曲霉菌的生长,抑菌圈直径分别为9 mm和8 mm.     

我国重组蛋白药物产业化取得重大突破

西北大学现代分离科学研究所成立于1994年(前身为现代分离科学研究室,成立于1986年),1995年被批准为陕西省重点实验室,是我国第一个专门从事现代分离科学理论研究,特别是生物大分子分离和纯化的新     

糖皮质激素对原代培养的海马细胞中p44/42的快速非基因组激活作用

用Western blot方法研究了皮质酮(B)对原代培养海马细胞15 min刺激下p44/42的快速激活作用.主要结果有(1)在5～15 min的时间内,皮质酮可以激活p44/42.当激活时间为15 min时,p44/42升得最高,30 min后恢复到正常水平,呈钟形的瞬时激活特点.(2)B激活p44/42的作用,不能被GR阻断剂RU38486所阻断.根据快速、GR受体阻断剂不能阻断两点,基本上可以认为,所观察到的p44/42的激活属于GC的快速非基因组作用.(3)酪氨酸激酶阻断剂Genistein不能阻断,而GDPβs可以阻断此作用,提示GC的这一效应不是通过TRK受体,而是通过G-蛋白耦联受体(GPCR).(4)PKA的阻断剂H89不能阻断,而PKC阻断剂G(o)6976及MEK(即MAPKK)阻断剂PD98059能够阻断这一效应,所以B快速激活p44/42的信号转导通路可能是GC→GPCR→PKC→MEK→p44/42.     

特种玉米栽培技术要点

特种玉米可分为两类：专用玉米和优质玉米。像甜玉米、糯玉米、爆裂玉米、青饲青贮玉米属于专用玉米，其用途单一，不能作它用；高油玉米、优质蛋白玉米属于优质玉米。特种玉米在栽培技术上要求比较严格，需要层层把关，否则当代所结的籽粒可能会失去特种玉米的性质，影响经济效益和社会效益。现将特种玉米栽培技术要点总结如下。     

A generalized approach for protein design based on the relative entropy

In the present study, we have developed the method brought forward recently for protein design based on the relative entropy. The new approach can be used in more common situation other than the special limits in the anterior method. The results indicate that our generalized method has increased the prediction precision for protein sequence and will be in favor of the study for protein design.