细菌F质粒转移实验的有效方法的研究

本文报道了一种简易有效的F′质拉转移的方法。这种方法仅用了包含链霉素(str)和氯霉素(cm)的选择性培养基,就能选出转移子。其目的是希望把F′从供体转移给受体,供体不抗str,受体不抗cm,把杂交中的混合菌涂布在LB cm str平皿上,供体和受体均被杀死,只有转移子才能生长。选得的转移子是:F′lac~ ::Tn9 pro~ /Δ(lac pro)gal E str~r重组体。     

恶性肿瘤气虚痰瘀证患者内分泌激素及免疫功能状态分析

对恶性肿瘤中医辨证分型及其恶性肿瘤气虚痰瘀证患者的内分泌激素和免疫功能状态进行了分析。采用流式细胞术检测了41例恶性肿瘤气虚痰瘀证和42例非气虚痰瘀证患者血清CD 3、CD 4、CD 8和NK细胞的变化;用放射免疫计数法检测了ACTH、CORT、IL-1β和IL-6。结果表明,①恶性肿瘤患者中医辨证分型气虚痰瘀证占49.39%。②气虚痰瘀证组和非气虚痰瘀证组CD 3、CD 4、CD 4/CD 8、NK均下降,CD 8升高,上述指标与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05);其中气虚痰瘀证组CD 3、CD 4与非气虚痰瘀证组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。③气虚痰瘀证组和非气虚痰瘀证组IL-1β和IL-6与对照组比较均降低(P<0.01),但两组间无明显差异(P>0.05)。④气虚痰瘀证组和非气虚痰瘀证组ACTH含量升高(P<0.01),CORT含量升高(P<0.05),具有统计学意义,但两组之间无显著差异,无统计学意义(P>0.05)。由此可知,气虚痰瘀证是恶性肿瘤的重要证型,恶性肿瘤气虚痰瘀证组和非气虚痰瘀证组都存在免疫细胞及内分泌激素方面的改变,尤以气虚痰瘀证组更加突出,以CD 3、CD 4、CD 8、NK、IL-1β和ACTH的改变为主。     

超顺磁性Fe3O4@SiO2空心亚微球的制备及其在质粒DNA分离纯化中的应用

采用溶剂热法合成超顺磁性空心亚微球,然后通过正硅酸乙酯水解-聚合反应,在亚微球表面包覆SiO₂,形成核壳结构Fe₃O₄@SiO₂空心亚微球。以该Fe₃O₄@SiO₂亚微球为分离介质,实现了大肠杆菌（E. coli）质粒DNA的高效、快速分离。     

大肠杆菌不耐热肠毒素及其分子生物学

产肠毒素大肠杆菌是与腹泻相关的一类大肠杆菌 ,肠毒素可分为耐热肠毒素和不耐热肠毒素。文章从肠毒素免疫性与作用机理 ,不耐热肠毒素的基因质粒、定位、亚基因克隆及表达 ,以及牛源大肠杆菌不耐热肠毒素等方面内容的国内外进展进行了讨论     

短小芽孢杆菌遗传操作系统的建立及应用

短小芽孢杆菌SCU11产生的胞外碱性蛋白酶具有良好的生皮脱毛效果,在生物制革领域有很大的应用前景.但该菌株的遗传转化系统尚未建立起来,限制了菌株的遗传改造和基因功能研究等方面的工作.本研究采用高渗透压电转化法,实现了对短小芽孢杆菌的电转化;在Ebuffer配方为甘露醇1M,山梨醇0.5M,甜菜碱7.5%,甘油10%,电场强度24KV/cm条件下,转化效率为3.5×10~3 CFU/μg DNA.构建了E.coli-Bacillus穿梭载体pUCETs,建立了短小芽孢杆菌基因敲除体系,利用该系统成功敲除了基因组中的peptidaseC40基因.本研究所建立的电转化系统及基因导入/敲除体系,为短小芽孢杆菌基因组编辑奠定了基础.     

重组质粒pMG36e-nisI-gfp在乳酸菌中的应用

本研究将带有nisI和gfp(绿色荧光蛋白)基因的乳酸菌表达栽体pMG36e-nisI-gfp转化至乳酸菌中,观察其在宿主内的稳定性.对重组菌进行了菌体形态、传代培养、质粒验证等研究,考察了该质粒的稳定性.结果显示:重组菌在不含抗生素的培养基中连续传代20代后,质粒丢失率低;菌体大小和形态基本不变;质粒经HindⅢ酶切后大小不变;GFP在第0、5、10、15和20代宿主菌中都可以表达,表达量没有明显差别,在SDS-PAGE中的带型一致;初步的动物实验验证了该质粒作为遗传标记的应用效果.说明该质粒在宿主菌中具有良好的稳定性.     

Lrrc10蛋白表达载体的构建

为了构建重组质粒pET-Lrrc10和Lrrc10蛋白表达,利用Nco Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切载体pMD18-T-Lrrc10,回收目的片段与经同样酶切后的表达载体pET-30a(+),转入E.coli strainDH5α,菌落PCR筛选阳性菌落,提取阳性菌质粒并进行PCR和酶切鉴定;将重组子转入E.coli strain BL21(DE3),于37℃振荡培养,用1 mmol/L IPTG诱导目的蛋白的表达。结果表明,成功构建了融合表达载体并命名为pET-Lrrc10。转入E.coli strain BL21(DE3)进行目的蛋白的表达,获得与预期分子量大小相一致的融合表达蛋白Lrrc10;Lrrc10蛋白以包涵体形式存在于宿主菌中,且IPTG诱导4小时,目的蛋白表达量最大。     

Separation of DNA fragments by cross-linked polymer coating capillary electrophoresis with non-gel sieving matrix

A new type of flush/fill equipment driven by high-pressure (1MPa) nitrogen gas for filling the capillary is demonstrated. High-viscous and microlitre grade volume solution can be filled into a capillary by means of this equipment. The capillary coated by cross-linked polyacrylamide and filled with “interpenetrating polymer networks” non-gels sieving matrix (0.8% hydroxyethyl cellulose, 10% sucrose in 1×TBE buffer) was applied for separating DNA fragments. All 11 fragments of Ø174/Hae III DNA were successfully separated. The man-made circle plasmid from E. coli were separated and detected.     

研究聚ADP核糖基化作用与细胞恶变关系的双基因真核表达重组体的构建

本文将聚ADP核糖聚合酶基因1．4kb部分序列反向插入真核表达载体pMAMneo和pSMG中，同时12位密码子突变的活化ras癌基因也一同克隆到上述载体中，从而获得具有不同真核基因筛选标记的双基因真核表达重组体pMAMneo－Cl．4－T24，pMAMneo－Cl.4－arT24，及pSMG－Cl．4-T24，上述质粒的构建成功为研究聚ADP核糖基化作用与细胞恶变的关系提供了一种新的分子模型．