Efficient expression of human factor Ⅸ cDNA in liver mediated by hydrodynamics-based plasmid administration

The transfection of plasmid DNA into mammalian cells is an indispensable tool in the study of gene transfer and gene function. Since the original report in 1990 on the successful expression of a reporter gene in muscle[1], plasmid DNA injection has been widely used to mediate gene transfer study. As a gene transfer vector, naked DNA has many obvious advantages. It is easy and cheap to be prepared and more safe after transfection. But the plasmid mediated gene expression is low because of t…     

Ri质粒在绿豆离体器官培养中转导发根的全息现象

生物体每个相对独立部分的结构和功能,都是其整体结构和功能的成比例的缩小,这种现象称为生物全息律.以绿豆(Phaseolus radiatus L.)的上下胚轴和叶片为外植体,进行了Ri质粒转化根的试验.结果表明,离体的绿豆上下胚轴和叶片,在进行发根培养时,同样存在着生物全息现象.这种现象为研究离体器官的形态发生,以及发根农杆菌Ri质粒的发根效应,提供了一种新的观点.     

含抗HIV广谱中和抗体2F5、4E10靶基因载体的构建及鉴定

目的:构建含HIV gp120,gp41序列中广谱中和抗体2F5,4E10作用靶基因的载体并进行鉴定,为后期重组载体表达产物诱导产生中和抗体及抗HIV亚单位疫苗的研究奠定基础.方法:根据NCBI中HIV gp120,gp41基因序列中可与2F5、4E10结合的区域设计引物并进行PCR反应,将PCR得到的目的片段插入到载体pET28a中,对重组载体进行PCR鉴定、酶切鉴定及DNA测序.结果:PCR鉴定、酶切鉴定及DNA测序结果证实重组载体构建成功.结论:成功构建了含HIV gp120,gp41序列中广谱中和抗体2F5,4E10作用靶基因的载体.     

两种消除Klebsiella pneumoniae重组型质粒的方法

对于工业发酵菌种肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae),研究发现有两种消除其重组型质粒的有效方法,一种是连续传代培养,另一种是使用消除剂十二烷基硫酸钠(SDS)。对K.pneumoniae重组菌连续20代传代培养后,发现其质粒具有较高的消除率;而以0.2%SDS复合Ca2+处理K.pneumoniae重组菌,也能有效消除其重组型质粒,且该方法省却了反复的传代培养,能快速得到质粒消除菌,更具简便易操作性。消除了质粒的K.pneumoniae能再次接纳新的质粒,有效避免了因质粒不相容性带来的转化不成功,进而可用作宿主菌积累更多的生理性状。     

几种诱导昆虫细胞RNA干扰质粒的构建和效果比较

构建了四种可以在昆虫细胞中表达形成dsRNA的质粒,比较了其诱导RNA干扰,抑制目标基因———绿色荧光蛋白(GFP)基因表达的效果.四种质粒都不同程度地抑制了质粒介导的GFP表达,其中尤以单个果蝇hsp70启动子表达反向重复序列,并带有杆状病毒AcMNPV增强子hr5的质粒效果最佳,使GFP表达量下降到原来的3.9%.当用于抑制由杆状病毒介导的GFP表达时,以两个相向排列的AcMNPV ie1基因启动子的构造有明显的抑制效果.这些结果对于在昆虫细胞中有效地利用RNA i研究基因功能有参考意义.     

3种中药对产酶菌R质粒消除作用的研究

用煎煮法制备的黄芩、黄连和鱼腥草中药原液,在对产β-内酰胺酶金黄色葡萄球菌测定最小抑菌浓度的基础上进行了耐药质粒(R质粒)消除试验,并用美国国立临床实验室标准化委员会颁布的标准进行消除效果的判定。结果表明:黄芩、黄连和鱼腥草3种中药原液对2株产β-内酰胺酶金黄色葡萄球菌耐药质粒具有不同程度的消除作用,消除率分别达到15.27%、14.58%和6.25%及5.56%、0.00%和3.47%。     

氧化亚铁硫杆菌质粒pTf—52限制图谱和嵌合质粒pSDF—1的构建

从一株氧化亚铁硫杆菌(Thiobacillus ferrooxidans)中分离到一个分子量为4.5×10~6Md 的质粒 pTf—52,用 Pst Ⅰ、BglⅡ、Kpn Ⅰ酶切此质粒,进行限制性酶切分析,作出了 pTf—52的限制图谱;并将 pTf—52插入到 pBR325的 Pst Ⅰ位点,体外重组,转化 E.coli HB101,构建成一个能够在 E.coli 中进行复制的嵌合质柱 pSDF—1(Tc~rCm~rAp~s),分子量为8.2×10~6Md。经限制性酶切分析,确证 pSDF—1是由 pBR325和 pTf—52重组成的,并确定了这两种质粒在 pSDF—1中的连接方向。     

基因重组质粒稳定性与苯丙氨酸发酵的研究

本研究应用具有苯丙氨酸生产基因 pheA~(FR)、aroF~(FR)、CI_(857) 的质粒 pSY130～14和质粒 pS Y16,重组构建了具有苯丙氨酸生产基因系统的新质粒 pSY200-14。然后,使其转化到大肠菌 AT2471中,育成了基因重组菌株 AT2471/pSY200-14。试验表明,新菌株质粒稳定性比原菌株有较大的提高。在2. 5升通气搅拌罐进行苯丙氨酸发酵试验,在搅拌转速850rpm、通气速率1. 0VVM,38. 5℃和 pH7. 0的条件下,发酵48小时苯丙氨酸生成量达14. 2g/L,比原菌株 AT2471/pSY130-14增产11. 8%。     

氧化硫硫杆菌重组质粒pSDT125的构建及其在大肠杆菌之间的转移

对氧化硫硫杆菌(Thiobacillus thiooxidans)隐蔽性质粒pTt12进行了限制性酶切分析,并绘出了限制性酶切图谱,其大小为13.7Kb.将pTt12质粒与pBR325质粒重组,得到了重组质粒pSDT125(Cm',Ap',Tc~s).氧化硫硫杆菌重组质粒pSDT125本身不具有接合转移能力,但它在广泛寄主范围的转移性质粒RP4的带动下以较高的频率在大肠杆菌(Escherichia coli)之间转移,表明在氧化硫硫杆菌质粒pTt12上存在着与接合转移有关的DNA序列.