水稻cFBA和菠菜cpTPI串联基因在鱼腥藻7120中的表达及其对光合作用的影响

利用转基因技术,将水稻cFBA和菠菜cpTPI串联基因转入到鱼腥藻7120中进行表达．结果发现：与野生藻相比,转基因藻蛋白粗提液中两个酶的比活力提高了33．3％;转基因鱼腥藻的生长明显优于野生型鱼腥藻,当在培养基中添加适量NaHCO3时,这一优势更加明显;转基因鱼腥藻的净光合速率和真实光合速率都有明显提高,光饱和点和光补偿点也有所提高．以上这些结果表明,在鱼腥藻7120中特异的提高“非限速酶”——FBA和TPI的水平,能在一定程度上提高转基因鱼腥藻的光合作用速率和生长速度．     

葡萄糖异构酶的双层固定化及其在高果糖浆工业化生产中的应用

在对多孔三甲铵甲基聚苯乙烯(TMPS)载体的合成研究基础上，运用分子沉积技术，完成葡萄糖异构酶(GI)200ks双层固定化试验，并在万吨生产线上进行1700t果葡糖浆生产试验。结果表明，开发的双层固定化葡萄糖异构酶(IGI)活力可达到2200μmol/min·g于胶，活力回收率达68．5%。载体机械强度良好，双层IGI的活力比单层IGI活力提高114%，IGI的半衰期45d左右，3个半衰期的转化力为11840kg干基葡萄糖/kgIGI。这一结果与普通IGI相比，相同高果糖浆生产能力的异构化装置可缩小1倍，载体用量可减少1倍。     

Molecular mechanisms of nitrosative stress-mediated protein misfolding in neurodegenerative diseases

Nitrosative and oxidative stress, associated with the generation of excessive reactive oxygen or nitrogen species, are thought to contribute to neurodegenerative disorders. Many such diseases are characterized by conformational changes in proteins that result in their misfolding and aggregation. Accumulating evidence implies that at least two pathways affect protein folding: the ubiquitin-proteasome system (UPS) and molecular chaperones. Normal protein degradation by the UPS can prevent accumulation of aberrantly folded proteins. Molecular chaperones – such as protein-disulfide isomerase, glucose-regulated protein 78, and heat shock proteins – can provide neuroprotection from aberrant proteins by facilitating proper folding and thus preventing their aggregation. Our recent studies have linked nitrosative stress to protein misfolding and neuronal cell death. Here, we present evidence for the hypothesis that nitric oxide contributes to degenerative conditions by S-nitrosylating specific chaperones or UPS proteins that would otherwise prevent accumulation of misfolded proteins. Received 5 December 2006; received after revision 7 February 2007; accepted 15 March 2007     

植物乳杆菌LAI的酵母表面展示

为了研究亚油酸异构酶(LAI)的功能并构建基因工程菌株,克隆了植物乳杆菌1p15-2-1的lai基因并对其编码序列进行分析比对,随后将其融合酵母信号肽序列和0-凝集素锚定序列,构建酵母表面展示载体;使用电击法转化酿酒酵母K601,并在尿嘧啶缺失型培养基上筛选出转化子.氨基酸序列比对分析表明,LAI与肌球蛋白交叉反应抗原...     

链霉菌基因组提取方法的比较与改进

将链霉菌菌株Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．纯化后,测得其葡萄糖异构酶的比活力为０．４１４ｕ／ｍＬ,使用苯酚氯仿法提取提的基因组ＤＮＡ浓度较低,ＲＮＡ和蛋白较多,但用大量法时仍可得到大量的ＤＮＡ,使用试剂盒法得到的基因组ＤＮＡ浓度较大,但仍有大量ＲＮＡ存在,由亚精胺法得到的基因组ＤＮＡ浓度较好,ＲＮＡ很少,自行设计的改进法得到的基因组ＤＮＡ,量特别大,纯度很高,ＤＮＡ大小集中在３０ｋｂ左右,ＲＮＡ很少,非竽相应的基因工程操作。     

蔗糖异构酶PalI包埋和交联固定化方法比较

采用海藻酸钠包埋法和戊二醛交联法两种固定化方法,对来源于Klebsiella sp. LX3的蔗糖异构酶PalI的稳定性和可重复利用性进行研究。结果发现,海藻酸钠包埋法在海藻酸钠、CaCl2 质量分数为1.5%、2%时,所得固定化酶的酶活最高,其最适反应温度为40℃,最适pH值为6;戊二醛交联法在(NH₄)₂SO₄质量分数为90%,戊二醛体积分数为2.5%时得到的固定酶酶活最高,交联酶的最适反应温度为50℃,最适pH值为5。通过对酶的稳定性比较,两种方法酶稳定性都优于游离酶。4℃保存20d后游离酶的酶活降低到30%,而戊二醛交联酶活性在95%以上,海藻酸钠固定化酶残余酶活仍在60%左右。戊二醛交联法固定酶活性优于海藻酸钠固定化酶,重复利用12次戊二醛交联酶,其残余酶活仍为80%。     

Increase Renaturation Yield of Reteplase Using the Recombinant Human Protein Disulfide Isomerase

Reteplase, the recombinant type of novel tissue plasminogen activator (t-PA) variant, is a promising thrombolytics in clinics. Expressed in the form of an inclusion body, reteplase consists of about 40% of the total intracellular proteins of Escherichia coli. The recombinant human protein disulfide isomerase (rhPDI) is used to increase the chance for the correct matching of the 18 hydrosulfide groups of the reteplase molecule in the renaturation process and it increase is the reteplase renaturation yield from 1%-2% to 15% - 20% with a the purity about 99% and the specific activity of 5(105 IU/mg is reached.This novel method can reduce significantly the cost of production.     

嗜酸氧化亚铁硫杆菌的核糖-5-磷酸异构酶的同源建模研究

采用同源建模技术和分子动力学模拟方法,构建了嗜酸氧化亚铁硫杆菌Acidithiobacillus ferrooxidans(A.f)的核糖-5-磷酸异构酶(rpiA)基因编码的蛋白质三维分子结构模型。将结构模型进行绑定位点搜索并与底物核糖-5-磷酸(R5P)进行柔性分子对接,结果显示,R5P被招募到A.ferrooxidans的RpiA的活性位点并随后被激活;残基Asp81,Thr31,Lys121,Ser30,Glu103,Asp84,Lys94,Asp118,Lys7,Gly97,Gly29,Gly95,Thr28和H2O对底物绑定或催化起重要作用,其中,Gly97,Gly29,Gly95和Thr28是新识别的残基,它们在其他生物体的RpiA中相当保守但未被发现。     

‘红叶’杜仲叶色转变过程中叶片生理指标变化

【目的】研究‘红叶’杜仲不同时期叶片生理指标变化规律,为揭示其特殊叶色转变机理提供理论依据。【方法】以‘红叶’杜仲和‘小叶’杜仲为材料,选择5个时期进行叶片色素含量测定。分别测定叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、类胡萝卜素、类黄酮和花色苷含量。使用CR2500型色差计(日本MINOLTA公司)测定L(明度值)、a^*(变红度值)及b^*(变黄度值),利用a^*和b^*计算出色泽饱和度(Chroma,C^*)和色调角(hur angle,h),并进一步计算叶片颜色指数(color index)。对叶色转变过程及花色苷合成代谢途径中的关键酶苯丙氨酸裂解氨酶(PAL)和查尔酮异构酶(CHI)进行提取和酶活性测定,研究各时期差异显著性并通过相关分析研究各指标间的关联程度。【结果】① ‘小叶’杜仲虽与‘红叶’杜仲变化规律相似,但两品种各指标的初始值及变化幅度均存在显著差异。‘小叶’杜仲颜色指数始终属于黄绿级,而‘红叶’杜仲第1、2阶段属于黄绿级,第3、4阶段属于粉红级,第5阶段达到深红级。② 两个品种各种色素含量均为逐步上升,但在C_a(叶绿素a含量)、C_b(叶绿素b含量)、C_T(总叶绿素含量)、C_Car(类胡萝卜素含量)、C_f(类黄酮含量)和C_A(花色苷含量)这几种物质含量变化中,叶片颜色变红过程中最关键的是花色苷含量。分别比较两品种第5时期(38 d)相对于第1时期(6 d)各色素含量的增幅,得到‘红叶’杜仲的C_A增幅是‘小叶’杜仲的553.96%。③ 无论‘小叶’杜仲还是‘红叶’杜仲,不同时期的PAL酶活性无显著差异,且各时期两品种的酶活性值大小相近。而‘红叶’杜仲CHI酶活性随着叶色的转变直线上升,第5时期(38 d)为第1时期(6 d)的306.14%,不同阶段间差异达到极显著水平;‘小叶’杜仲CHI酶活性随着叶色转变也有逐步升高的趋势,但是增幅较小,不同时期的酶活性无显著差异。④ L、a ^*及b^*与类胡萝卜素含量、花色苷含量及类黄酮含量呈极显著相关,而与叶绿素a含量、叶绿素b含量、总叶绿素含量及叶绿素a与叶绿素b含量比无显著相关关系。CHI酶活性和杜仲叶片L、a^*、b^*、类胡萝卜素含量、花色苷含量及类黄酮含量间均存在显著或者极显著的相关关系,而PAL与叶片色差值间则无显著相关性。【结论】在‘红叶’杜仲叶片颜色转变过程中,花色苷含量变化幅度远大于叶绿素含量变化幅度,是其呈色的直接原因;‘红叶’杜仲CHI酶活性高在‘红叶’杜仲典型叶色转变过程中具有关键作用。     

从木糖生产酒精发酵工艺的研究

本研究应用酵母Saccharomyces Cereviciae AM12菌株,在木糖异构酶存在下,以木糖为基质发酵生产酒精。重点研究了基质浓度对酒精发酵速率的影响及菌体的接种量、增殖与乙醇生成的关系。实验结果表明,无论是氧限制或厌气发酵过程,在木糖异构酶的存在下,该菌株均可利用木糖发酵生成酒精。但是,在乙醇积累的同时,伴有副产物木糖醇的生成。