柠康酸培养体系对A. pascens DMDC12的胁迫作用与其SOD活性的提高

研究报道了野生型高度耐盐节杆菌Arthrobacter pascens DMDC12）经柠康酸体系培养后,导致胞内超氧化物歧化酶（SOD）大量表达．该菌的无细胞粗酶液SDS—PAGE表明,随着培养过程中碳源柠康酸的利用,亚基相对分子质量约为25000处的蛋白产生了显著诱导．经N-末端测序表明该蛋白为SOD,无细胞粗酶液酶活可达787U／g湿菌体．4种不同培养体系对该菌SOD活性影响表明,常规的葡萄糖、酵母膏或柠檬酸作为碳源或能源时,菌体的SOD处于较低水平,发酵液pH呈碱性可对该菌SOD有一定促进作用．在柠康酸培养体系中,无细胞粗酶液SOD的比活为常规培养基培养后的2．3—4．3倍,表明除pH外尚存在其他因素比如某种中间代谢物对菌体产生的胁迫压力显著促进了SOD的表达．本研究首次报道微生物生长环境胁迫作用对菌体SOD活力的影响,相关结论对利用微生物生存胁迫手段促进菌体大量产生SOD具有重要的指导作用．     

极端嗜盐菌HBCC-1的分离与培养特性

从连云港台南盐场盐溶液中分离到一株极端嗜盐菌HBCC-1,革兰氏阴性,杆状,橙红色.通过比较酵母膏、可溶性淀粉、蔗糖和葡萄糖等不同碳源以及(NH4)2SO4,Ca(NO3)2,蛋白胨和胰蛋白胨等不同氮源对该菌株生长的影响情况,结果表明:酵母膏为其最佳碳源,蛋白胨为其最佳氮源.进一步研究表明,该菌株的最适生长盐浓度为3.42 mol/L,温度为35℃,pH为7.0.     

新疆达坂城盐湖中度嗜盐菌的16SrDNA序列研究

中度嗜盐菌作为一类微生物资源,已经在很多方面应用。从新疆达坂城盐湖样品中分离得到17株中度嗜盐菌。其中11株为革兰氏阳性,6株为革兰氏阴性,并完成表型和16SrDNA序列的测定．其表塑特征和16SrDNA序列分析结果表明这些菌分别属于Halomonas、Bacillus、Salinicoccus、Halobacillus、Marinococcus、Thalassobacillus、Nesterenkonia属,其中大部分属于Halomonas属。     

田菁根瘤菌嗜盐α-淀粉酶的基因克隆表达与分子改造

【目的】克隆表达田菁根瘤菌嗜盐α-淀粉酶基因,并对其进行基因改造,为探索与嗜盐性相关的氨基酸位点提供参考。【方法】从田菁根瘤菌及周围土壤的宏基因组中克隆到一个命名为RSA的极端嗜盐淀粉酶。通过与同源性为75.33%的嗜盐α-淀粉酶K6的序列比对发现,RSA-D205位点与已报道的K6-N204(嗜盐相关的氨基酸位点)相似,从而对其进行定点饱和突变以研究相关酶学性质。【结果】共获得17个突变子,其最适NaCl浓度较RSA均有不同程度的降低。RSA-D205R、RSA-D205C酶反应温度高达80℃,拓宽了其应用范围。【结论】RSA-D205氨基酸残基位点与Na~+结合位点有一定的联系;另外,精氨酸(R)、半胱氨酸(C)对淀粉酶的高温改造具有参考价值。     

Osmotic adaptation of moderately halophilic methanogenic Archaeobacteria,and detection of cytosolicN,N-dimethylglycine

Methanohalophilus mahii SLP andMethanohalophilus halophilus Z-7982, two closely-related, moderately halophilic, methylotrophic methanogens, were tested for their adaptation to saline conditions. They grew in a wider range of salinities than previously reported, in a defined medium with as little as 0.1 M NaCl, and with a high as 4.0 M NaCl forM. halophilus and 4.5 M NaCl forM. mahii. Fastest growth occurred with 1.5 M NaCl forM. mahii and 1.0 M NaCl forM. halophilus. M. mahii also grew in media in which NaCl was replaced by sucrose or KCl as osmolytes up to the osmolal equivalent of 2 and 2.5 M NaCl (these media contained other sodium salts totaling about 0.1 M Na⁺). In media with either sucrose of KCl replacing NaCl,M. mahii grew fastest at osmolalities approximately equiosmolal to 1 M NaCl.M. mahii not only grew well at a wide range of osmosities, it also tolerated rapid shifts in osmolality. Cells subjected to a rapid 10-fold hypertonic shift resumed growth without a prolonged lag. When cells were subjected to a rapid 10-fold hypotonic shift, 90% of cells lysed, but the remaineder continued to swell with little further lysis during the next 45 min. Surviving cells resumed growth.Methanohalophilus strains grown in defined medium had low cytosolic Na⁺ concentrations; K⁺ concentrations were as high as 0.35 M. Organic osmotica in the cytosol include glycine betaine and larger amounts of N,N-dimethylglycine.     

高盐度废水生化需氧量的测定

就嗜盐菌种和普通菌种测定高盐度废水BOD进行实验分析,实验结果表明采用驯化嗜盐菌种测定的BOD值能够更客观反映高盐度废水的有机污染程度。     

德夯嗜盐耐盐菌抗菌活性筛选和系统发育

以8个敏感菌株作为指示菌,采用琼脂扩散法,对分离自湖南省德夯峡谷(28°15′~28°43′ N,109°30′~109°45′ E)普通非盐环境土壤样品中的294株嗜盐及耐盐细菌进行抗菌活性筛选,并对其中具有较强抗菌活性的菌株进行基于16S rRNA基因序列的系统发育分析.受试菌株中有109株的发酵产物具有抗菌活性（阳性率37.1%）,其中5个菌株具有较强抗菌活性（JSM 102030,JSM 102052,JSM 102054,JSM 102066,JSM 102082）.基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,这5个菌株分别属于细菌域(Eubacteria)的3个门(Actinobacteria,Firmicutes,Proteobacteria)中的3个科(Bacillaceae,Halomonadaceae,Nocardiopsaceae)的4个属,菌株JSM 102030属于Halobacillus属,与该属已知种Halobacillus trueperi DSM 10404T的系统发育关系最为密切（序列相似性为99.1%）,JSM 102052和JSM 102054属于Halomonas属,与Halomonas alkaliphila 18bAGT的系统发育关系最为密切(序列相似性为98.3%),JSM 102066属于Nocardiopsis属,与其系统发育关系最为密切的是Nocardiopsis prasina DSM43845T (序列相似性为99.3%),JSM 102082与Oceanobacillus属的Oceanobacillus kimchii X50T以99.6%的16S rRNA基因序列相似性聚在一起.研究结果表明,分离自湖南省德夯峡谷普通非盐环境土样的嗜盐及耐盐细菌中存在较高比例的抗菌活性菌株,且这些细菌具有较为丰富的系统发育多样性.     

一株产淀粉酶中度嗜盐菌Nesterenkonia sp.DQ-1的分离鉴定

利用平板筛选法从大庆盐碱地土壤中筛选到一株产淀粉酶并能在广泛NaCl浓度范围(0～25%)和广泛pH值范围(pH值为6～10)生长的耐盐碱菌DQ-1,对其进行形态学、生理生化鉴定和16SrDNA序列分析,DQ-1呈球形,大小约为0.5～0.8μm,最适培养条件为:NaCl 3%,30℃,pH=7.5;同源性比对结果表明,该菌株与多种涅斯捷连科氏菌的16SrDNA序列同源性高达99%。结合生理生化指标,初步确定DQ-1菌株可能是耐盐涅斯捷连科氏菌属的一个亚种。DQ-1产生的淀粉酶最佳反应条件为NaCl 2%、pH值在7～7.5、温度40℃,酶在0～12%的NaCl中具有活性,在pH值为5～12不失活,说明DQ-1产生的淀粉酶是一种能广泛耐盐碱的极端酶。     

一株中度嗜盐菌Halomonas sp.NY-011的分离与鉴定

从盐生杜氏藻（Dunaliella salina）培养物内筛选到一株能在广泛NaCl浓度范围（0.5 %～21 %, w/v）和广泛pH值范围（pH 5～11）生长的嗜碱耐盐菌NY011.细胞形态电镜观察和生理生化分析表明, NY-011呈杆状,大小为（0.51～1.53）μm×（1.02～2.55）μm,革兰氏阴性,有荚膜,无鞭毛,不运动,好氧生长,淀粉水解酶呈阴性,接触酶呈阳性.其最适培养条件为：2% NaCl,30 ℃,起始pH值10.16S rDNA序列比对和构建的系统发育树表明该菌属于盐单胞菌