拟松材线虫两个HSP基因的克隆与分析

采用RACE(快速扩增cDNA末端)技术从拟松材线虫中克隆了HSP70蛋白编码基因mc2和HSP90蛋白编码基因mc19,两个基因的全长cDNA分别为2 067和1 222 bp。生物信息学分析结果表明：mc2基因的ORF为1 926 bp,推测的编码蛋白包含642个氨基酸,分子质量为170.85 ku,等电点为4.69。mc19基因的ORF为1 083 bp,推测的编码蛋白包含361个氨基酸,分子质量为97.70 ku,等电点为4.83。多序列比对和系统进化树结果分析都表明,拟松材线虫的mc2、mc19基因的编码蛋白与植物寄生线虫HSP70和HSP90蛋白具有较高的同源性,拟松材线虫和松材线虫之间的亲缘关系尤其密切。     

用差减cDNA文库筛选由热激导致的小鼠睾丸中差异表达的基因

采用抑制性差减杂交（Suppression Subtractive Hybridization, SSH）方法,构建正常和热激小鼠睾丸组织的差减 cDNA 文库,以期 筛选出小鼠生精过程中对热敏感的基因。分别从正常和热激小鼠睾丸组织提取总RNA,反转录成cDNA,以正常小鼠睾丸组织cDNA作为待检组织(tester),以热激小鼠睾丸组织cDNA作为驱动组织(driver), 经过2轮杂交和抑制性PCR扩增,产物与T载体连接,经蓝白斑筛选,提取质粒,经EcoRI酶切鉴定插入片段并测序,由此构建了2种组织间差异表达基因的差减cDNA文库。用半定量RT-PCR方法,进一步验证 了该文库中差减出的基因基本上为差异表达的基因。对随机挑选其中的932个克隆测序,对有效测序的565个基因序列与GenBank数据库中发布的序列进行同源性比较,大部分片段都可以检索到同源序列。 结果显示,cPGES/p23等13个基因热激后表达量上调;septin2等120个基因热激后表达量下调。其中cPGES/p23为本研究中首次发现的小鼠生精过程中对热敏感的基因。     

水稻黑条矮缩病毒基因组第九组分cDNA的克隆及序列分析

从我国发病的玉米材料中提取水稻黑条矮缩病毒,抽提病毒RNA,利用RT-PCR等手段,获得了病毒基因组第九组分（S9）cDNA克隆。序列分析结果表明：S9全长1900bp,含有2个不重叠的ORF,编码蛋白的分子质量分别为39.9,24.2ku,与日本株S9核苷酸序列同源性为89%,与意大利株MRDV S8同源性为86%。     

Molecular characterization of a K+ channel blocker in the scorpionButhus martensii Karsch

K⁺ channel blockers of scorpion venoms are of important value in studying pharmacology and physiology of specific K⁺ channel of cells. Based on the amino acid sequences of BmP01 previously characterized as a small-conductance Ca²⁺-activated K⁺ channel blocker, two “back to back” degenarate primers have been designed and synthesized for inverse PCR strategy, its full-length cDNA has been cloned from the venom gland of the Chinese scorpionButhus martensii. The cDNA is composed of 3 parts: 5′ UTR, ORF and 3′ UTR. The flanking sequence of translation initiation codon ATG is AAAATGA, which is highly conserved in scorpion Na⁺ channel toxin and protozoan genes, suggesting that these genes may have followed a common mechanism for translation initiation. The 3′ UTR contains poly(A) signal AATAAA. The open reading frame encodes a precursor of 57 residues with a signal peptide of 28 residues and a mature peptide of 29 residues. The signal peptide is rich in hydrophobic amino acid residues and its length is significantly different from that of the determined scorpion Na⁺ channel toxin. The deduced amino acid sequence of mature peptide is completely consistent with BmP01 previously determined by primary structure analysis.     

脑表达的X连锁基因的克隆、染色体定位和初步功能研究

通过筛选人18周胎脑cDNA文库,得到一条与Bexl和Bex2在高度同源性的基因,经HUGO／GDB人类基因命名委员会的同意命名为BEX1,Northern杂交发现该基因在脑和胰腺中高表达,在心脏,胎盘,肝脏和肾脏中有较低表达,而在脑和骨骼肌中没有表达,用斯坦福大学G3辐射杂交系将BEX1定位于Xq22上的Marker DXS990和DXS 1059之间,以BEX1作为杂交探针小对小鼠的原位杂交中发现BEX1的小鼠同源基因在小鼠的生精小管中有表达,而在间质组织中没有表达,在成年小鼠（出生10周）中BEX1同源基因在生精小管的外周细胞中表达,在中层细胞（包括次级精母细胞和精子细胞）和内层细胞（主要由精子组成）中没有表达,而在6周的处于青春期的小鼠中,BEX1的同源基因在整个生精小管中都有表达,但外层细胞的表达比中层和内层细胞的表达要高得多,而在3周的幼年小鼠中,BEX1的同源基因仅有微量表达,所以BEX1在小鼠中的同源基因在青春期表达上升,生精小管成熟后表达维持在一定的水平,这提示BEX1基因可能参与精子发生及生精小管发育的过程。     

肥厚性疤痕成纤维细胞的基因芯片分析

用基因芯片分析肥厚性疤痕与正常皮肤成纤维细胞在静息及TGF－beta3刺激下的表达谱的改变,正常成纤维细胞在TGF－beta3刺激前后的表达谱与肥厚性疤痕成纤维细胞在TGF－beta3刺激前的表达谱正相关（r=0.76037),刺激后2种成纤维细胞的表达差异与肥厚性疤痕成纤维细胞TGF－beta3刺激前后的表达谱差异正相关（r=0.826 762),构成以上差异的基因有620条,涉及细胞骨架蛋白,细胞周期蛋白,细胞因子,受体,转录因子及糖,蛋白质和酸代谢的酶类,未发现胶原蛋白I,III的表达水平的改变,结果提示：1,肥厚性疤痕成纤维细胞在静息状态下表现出与正常细胞受TGF－beta3刺激后相似的反应,其可能处于一种应激状态;2．TGF－beta3刺激后2种细胞的反应差异与肥厚性疤痕细胞的异常反应相关,TGF－beta3的作用背景可能是肥厚性疤痕的分子病理学基因之一,3．基因表达变化涉及细胞因子,细胞周期调控,凋亡等,其具备疾病遗传异质性的分子基础。4．胶原表达无明显上升,提示在肥厚性疤痕发病中,胶原纤维及细胞外基质堆积有复杂的分子生物学基础。     

大鼠脑损伤后海马GAP-43 mRNA水平的变化

以DIG（Digoxigenin）标记的GAP-43 cDNA片段为探针,使用原位杂交方法,检测了大鼠皮层硬性脑挫伤后GAP-43 mRNA水平的变化。结果表明：海马CA3、CA1和DG区的GAP-43 mRNA水平在损伤后48h明显升高,其中CA3区变化最甚,而且伤侧比对侧显著。1周和2周后表达仍维持较高水平,但不如48h的高,这显示表达的峰值在1周之内。上述结果为研究脑损伤后生理及机能代偿的修复机制提供了有意义的信息。