戊二醛对原子力显微镜观测大肠杆菌的影晌

戊二醛作为生物材料的固定剂,在原子力显微镜（AFM）制样中已广泛使用．虽然已有用戊二醛观测大肠杆菌的文献报道,但到目前为止,关于戊二醛在AFM观测大肠杆菌中的作用还缺乏系统研究．首先分析AFM扫描图像的假像,进而探讨戊二醛的浓度和固定时间对AFM图像质量和大肠杆菌表面形貌的影响．结果表明,戊二醛的浓度和固定时间对AFM图像的清晰度、大肠杆菌的微观结构以及细胞的三维尺寸都有着重要影响．在相同固定条件下所扫描的AFM图像与扫描电子显微镜（SEM）图像对比发现,两者的形貌相似,而AFM图像比SEM图像分辨率更高,在定量分析上也更有优势．     

Effects of heavy metal on dielectric properties of E. coli revealed by dielectric spectroscopy

Dielectric spectroscopy of E. coli cell before and after exposure to heavy metals Cd^2＋ , Cu^2＋ , Zn^2＋ and Ca^2＋ was investigated. The results indicate that changes in dielectric spectra reflect effects of heavy metal on the structure and function of E. coli cells. Heavy metal can change membrane capacitance as well as pennittivity and conductivity of the cytoplasm. Changes in volume fraction suggested that dielectric measurement could monitor the growth of E. coli cells. These results demonstrated that dielectric spectroscopy was a potential effective technique for studying electric properties of biological cells.     

重组人甲状旁腺素(rhPTH(1-84))的原核表达及发酵条件初步优化

 甲状旁腺激素(Parathyroid Hormone,PTH)是治疗骨质疏松症的药物之一.将人工合成全长人PTH(hPTH(1-84))的核苷酸序列插入pThioHis A载体中,然后转化大肠杆菌(Escherichia coli.),在IPTG的诱导下,成功实现了rhPTH(1-84)的原核表达.通过发酵条件的优化,初步确定1:40接种LB+30%M9盐溶液的发酵培养基,37℃培养至OD600 nm=0.8时,加入终浓度为0.6 mmol/L的IPTG,诱导8 h的较优发酵程序.     

人胰岛素原基因在大肠杆菌中的表达和纯化

将人胰岛素原基因序列(human proinsulin, PI)经密码子优化后与TrxA蛋白融合表达,构建原核表达载体TrxA-PI转入不同大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)、TransB(DE3)和Rosetta-gami(DE3)中。SDS-PAGE显示融合蛋白在3种表达菌株中均有表达,在Rosetta-gami(DE3)中表达量最高,是普通大肠杆菌BL21(DE3)表达量的10倍。通过优化诱导温度等发酵条件,可溶性重组融合蛋白TrxA-PI在Rosetta-gami(DE3)菌株中表达量为3.5 g/L,比未优化时提高约10倍。TrxA-PI用肠激酶酶切后,利用HisTrap FF柱分离纯化PI,经Western-blot检测重组PI具有免疫原性。     

米根霉L-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

文章以米根霉基因组DNA为模板,根据已公布的米根酶L-乳酸脱氢酶基因(ldnL)序列设计引物,PCR扩增得到含有ldnL的DNA片段;PCR产物T/A克隆后再双酶切,将ldnL片段连接到大肠杆菌表达载体pET17b,得到重组表达质粒pET17b-ldnL;pET17b-ldnL转化大肠杆菌BL21(DE3),摇瓶培养诱导表达后的菌体经SDS-PAGE电泳分析,结果表明克隆的ldnL基因在大肠杆菌中实现表达。     

用大肠杆菌游离细胞酶法合成核苷药物

研究了采用大肠杆菌游离细胞核苷磷酸化酶合成核苷药物过程中反应平衡常数和底物转化率的计算方法及其变化规律，阐明了游离细胞内核苷磷酸化酶的活力与细胞的培养、菌体的预处理方式密切相关。实验结果表明，大肠杆菌湿菌体经４℃干燥处理２￣３ｄ后，胞内核苷磷酸化酶不易失活，并能有效地降低胞内抑制物对酶反应的抑制作用。与湿菌体相比，干燥菌体用于酶反应时底物的转化率可提高３３．５％。     

人白细胞介素-15表达菌株的构建

从健康人外周血分离单核细胞,并提取总RNA,利用RT-PCR扩增出白细胞介素15(IL-15)基因.构建了重组表达菌株BL21(DE3)(pET28c(+)-IL-15).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒(pET28c(+)-IL-15)含有IL-15基因.经Western blot鉴定证实为IL-15,并实现了在大肠杆菌中的高效表达.表达产物占菌体总蛋白的32%,从而为进一步研究IL-15的生物学功能和临床应用奠定了基础.     

氯和二氧化氯联合消毒灭菌作用的研究

以配置的水样为研究对象考察了氯与二氧化氯单独及联合灭活大肠杆菌和细菌总数的效果,用Berenbaum公式判断了两种消毒剂联合作用的性质.结果表明,氯2.00mg/L作用30 min可灭活试验水样中大肠杆菌6.18个数量级,二氧化氯0.30 mg/L作用15min、1.50mg/L氯和0.20 mg/L二氧化氯联合作用10 min可以灭活试验水样中大肠杆菌7.18个数量级(100%灭活);2.00 mg/L氯单独作用30 min、0.30 mg/L二氧化氯单独作用15 min、1.50 mg/L氯和0.20 mg/L二氧化氯联合作用10min可将水样中的细菌100%灭活.用Berenbaum公式计算得出氯与二氧化氯联合消毒灭活水样中大肠杆菌时质量浓度比为0.39,灭活水样中细菌总数时的质量浓度比为0.85,因此氯与二氧化氯联合消毒对大肠杆菌和细菌总数具有协同灭活作用.     

微量量热法研究大肠杆菌对黄柏中活性成分和泰乐霉素的耐药性

应用微量量热法测定了不同浓度的黄柏总生物碱、小蘖碱、泰乐霉素对大肠杆菌代谢作用的热功率一时间曲线,建立了生长速率常数与药物浓度的关系．进而确定了最小抑菌浓度．在亚抑菌浓度下培养耐药菌,得到了生长速率常数与传代次数之间的关系,进而得出了大肠杆菌对三种药物耐药性的规律．同时利用该方法测出了药物间的交叉耐药性、同时用药耐药性规律及间隔用药的耐药性规律,并做了比较．结果发现。大肠杆菌对小蘖碱、黄柏总生物碱、泰乐霉索均有耐药性,但对小蘖碱、黄柏总生物碱的耐药性产生慢且容易消失;小蘖碱、黄柏总生物碱与泰乐霉索之间无交叉耐药;且与泰乐霉索间隔使用或同时使用可以减缓泰乐霉索耐药性的产生。     

南水北调中线焦作典型区浅层地下水污染特征

南水北调中线焦作典型区浅层地下水污染的研究对确保南水北调工程供水水质安全具有重大的意义.通过现场调查以及水质分析,结果表明:研究区浅层地下水六价铬、硝酸盐、硫酸盐、硬度、溶解性总固体(TDS)以及大肠杆菌污染严重.研究区浅层地下水铬污染的污染源是焦作某电厂的灰场,该灰场粉煤灰中含有大量的重金属铬.工矿业污水灌溉农田是浅层地下水硝酸盐、硫酸盐、硬度、TDS以及大肠杆菌污染的主要影响因素.