以潮霉素B磷酸转移酶基因为遗传标记的启动子探针型载体的构建

用来自大肠杆菌的潮霉素Ｂ磷酸转移酶基因（ｈｙｇｒ）作为遗传标记构建了启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ８,该基因的转录和翻译起始区以及５’－端编码区两个密码子均被除去,载体骨架为大肠杆菌质粒ｐＵＧＶ２,该标记基因的终止子来自Ｐｈａｎｅｒｃｈａｅｔｅｃｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ的ＬＩＰ６基因     

大肠杆菌新菌毛抗原的研究V．用标记抗体技术检验菌毛抗原

应用荧光抗体染色、免疫酶染色及斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）对大肠杆菌Ｆ１９８７新菌毛抗原进行了检验，经可行性、特异性及对粪便标本检验等试验，表明这些方法均可用于对Ｆ１９８７新菌毛抗原的检出。三种方法除均表现特异、准确外，又分别具有各自的特点。荧光抗体染色结果易分辨，但需具备荧光显微镜；免疫酶染色只需普通显微镜；Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ可用眼观判定结果，但对病料标本需做一定的处理后才能进行检验。本次试验均采用了间接染色法，同时试验建立了三种方法对Ｆ１９８７新菌毛抗原的具体操作程序。     

鸡大肠杆菌病的流行病学研究

对来源于河南省32个县市的93株鸡致病性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定、16种抗生素药物的耐药性试验和耐药性质粒的检测分析.结果表明:河南省鸡致病性大肠杆菌的血清型种类众多,以O78、O1、O2为优势血清型,分别占定型菌株的35.14%、18.92%、13.51%;耐药图谱复杂,可以分为58种耐药类型,菌株耐药种类3~14种;质粒图谱复杂,可分为49种质粒图谱,质粒条带1~6条.     

大肠杆菌新菌毛抗原的研究Ⅳ．菌株的致病作用检验

应用消化道接种途径，测定了产生Ｆ１９８７新菌毛抗原大肠杆菌菌株对貂、兔、犬、猪、貉子的致病作用，同时对貉子进行了静脉、肌肉接种的感染试验。结果初步表明：供试菌株仅引起了貉子明显发病，经消化道接种能引起腹泻并随粪便向外界排菌，剖检可见出现眼观、组织学及超微结构的病变，且在肠道内容物中能回收到原感染菌。     

人USP14蛋白在大肠杆菌中表达纯化的初步研究

采用PCR技术从人胎脑cDNA文库中克隆了usp14(ubiquitin-specific peptidase 14)基因编码区全长序列。序列分析表明人usp14基因含有peptidase蛋白酶C19A保守区,将usp14基因与pET-28b(+)载体相连,构建表达载体pET28b/usp14;把该表达载体转入大肠杆菌Rosetta(DE3)pLyS,以Isopropyl-D-thiogalactopyranoside(IPTG)诱导25°C 6小时,USP14蛋白获得高效表达。对表达产物进行Western blotting检测,并用Ni-NTA亲和层析技术获得了纯化的人USP14蛋白,表达的目的蛋白大小约为56kDa。     

大肠杆菌DH5α感受态细胞转化率的改进

针对实验材料E．coli DH5α,对该菌株在不同生长时期的转化效率进行测定,确立了一个能制备高转化率感受态细胞的实验方案．结果表明：在细菌的生长繁殖过程中,其转化率有很大变化;得到了E．coli DH5α菌株制备感受态细胞的最佳条件．     

应用多重PCR法鉴定产志贺样毒素大肠杆菌毒力基因

目的：从各种来源的标本中快速鉴定STEC毒力基因，并了解其在菌株中的分布情况．方法：采用多重PCR的方法鉴定STEC的特征性毒力因子stx1，six2，eaeA和hlyA．结果：各种标本中鉴定出产志贺毒素的大肠杆菌共46株，38株(82．6％)携带stx1基因，30株(65．2％)具有six2基因，22株(47．8％)同时检测到2种基因．36株(78．3％)检测到hlyA基因，24株(52．2％)有eaeA基因．4种毒力基因即six1 stx2 eaeA hlyA的有19株(41．3％)，而且血清型均为O157．结论：产志贺样毒素大肠埃希菌毒力基因图谱是一个重要的分子流行病学标志，应用多重PCR可简便、快速、敏感、特异性地鉴定出STEC的特征性毒力基因，并依照毒力基因存在情况判定其致病性能．     

抑制大肠杆菌粘多糖荚膜合成的相关基因的筛选

大肠杆菌(Escherichia coli)通过二信号传导体系RcsC-RcsB能够激活cps(capsule polysaccharide synthesis)基因群,在细胞表面形成一层粘性的保护性荚膜,使大肠杆菌具有较强的致病性。本文通过将基因组文库导入大肠杆菌,筛选到了名为acnA的基因,它编码合成乌头酸酶,在细胞内三羧酸循环和乙醛酸循环代谢中起关键作用,多拷贝的acnA能有效地抑制cps基因群的表达。     

河北省仔猪黄白痢流行病学调查及致病菌的分离与鉴定

仔猪黄白痢是危害养猪业的一种常见疾病.通过对河北省不同地区17家猪场的走访调查,探讨仔猪黄白痢大规模爆发的原因和防治对策,并从某猪场发病仔猪的排泄物中分离得到1株菌,经形态学、生物化学和分子生物学实验鉴定,该分离株为革兰氏阴性菌,克氏三糖铁培养产酸产气,LTB与M17873核苷酸序列同源性为100 %,该菌株确定为产肠毒素型大肠杆菌.     

通过扩大非甲羟戊酸途径以实现S-柠檬烯在E.coli中的生物合成

单萜烯系香叶基焦磷酸(GPP)环化后的产物.其在食品化工医药能源等领域具有广泛的应用.目前,单萜烯主要从植物精油中纯化获得,因而产量受到限制.代谢工程是近来的新兴生物工程技术.通过改造代谢通路,可以实现在微生物中生产各类重要的产物.要实现单萜烯的微生物生产,除了要引入相应的萜烯合成酶外,还需要提高其上游产物,即异戊二烯焦磷酸(IPP)和GPP的供给.在本项工作中,我们首次通过放大E.coli的非甲羟戊酸途径,增加了IPP前体的合成,再结合引入GPP合酶及S-柠檬烯合成酶,实现了在细菌内生物合成S-柠檬烯.本研究为未来通过微生物发酵方法生产各类单萜烯产物提供了基础.