30种植物提取物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌抑制作用研究

利用索氏抽提乙醇回流法获得30种植物的乙醇提取物,用滤纸圆片法分析各种植物提取物对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌两种细菌的抑制活性.结果表明,在30种植物提取物中,有14种对大肠杆菌的生长有抑制作用,有21种植物提取物对枯草芽孢杆菌的生长有抑制作用.其中,泽漆提取物对大肠杆菌的抑制作用最强,黄花蒿次之,且提取物抑制作用随浓度的...     

外源基因在大肠杆菌中表达的优化

大肠杆菌已经被广泛地应用于表达各种外源基因,但基因的表达受多种因素的影响,现就各种影响因素综述了外源基因表达的优化策略,这将有助于采取有效方法提高外源基因在大肠杆菌中的表达效率.     

香石竹斑驳病毒（CarMVsh）外壳蛋白基因克隆及原核表达

香石竹斑驳病毒上海分离株是从上海地区栽培的香石竹上分离并鉴定的,以提纯的病毒为材料,ＳＤＳ－酚法纯化的基因组ＲＮＡ作为模板,ＲＴ－ＰＣＲ合成并扩增外壳蛋白基因ｃＤＮＡ,ｃＤＮＡ克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ,转化为Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９。阳笥克隆ｐＴＣａＣＰ经序列分析,证明带有全长ＣＰ基因。     

黑曲霉葡萄糖淀粉酶cDNA的克隆和序列分析及其在大肠杆菌中的表达(英文)

以poly(A)~ mRNA为模板,噬菌体λgt 10 DNA为载体构建了黑曲霉3758的cDNA的文库。用编码黑曲霉葡萄糖淀粉酶329—418位氨基酸的DNA顺序(456bp)作探针从该文库中筛选葡萄糖淀粉酶cDNA。采用原位噬菌斑杂交法获得11个阳性噬菌斑,从其中6个噬菌体中提取DNA进行限制酶切分析和印迹法转移杂交试验,发现这些阳性噬菌体DNA含有不同大小的插入片段,它们都能与DNA探针杂交,表明已克隆了葡萄糖淀粉酶的cDNA。采用单酶切及交叉双酶切法制定了2.1kbcDNA的物理图并对2.1kb片段作了全序列分析。序列分析结果显示,克隆的2.1kb片段含5＇端非编码区,编码葡萄糖淀粉酶的结构基因及3＇端非编码区。克隆的cDNA片段转移至表达载体λgt11,感染大肠杆菌后,产生的噬菌斑转移硝酸纤维素滤膜后与~(125)I标记的抗葡萄糖淀粉酶抗体进行免疫反应,结果证明含2.1kbcDNA的λgt11表现葡萄糖淀粉酶阳性.2.1kb片段也曾转至质粒pPL2,转化大肠杆菌JF1125。细胞裂解物在SDS-PAGE电泳中可看到新的蛋白带。这些结果表明,克隆的黑曲霉葡萄糖淀粉酶cDNA可以在大肠杆菌中表达。     

改进法制备大肠杆菌膜囊及其电镜观察

使用改进方法成功地制得大肠杆菌膜囊。该膜囊为一封闭的、不合任何细胞质组织的、仅由细胞膜构成的囊状结构。少数膜囊外仍保留部分外膜成份。     

枯草芽孢杆菌B10木聚糖酶基因的分子生物学

从腐烂苎麻周围土壤中经过初筛和复筛得到具有脱胶能力的枯草芽孢杆菌菌株B10。采用PCR方法对B10的木聚糖酶基因进行克隆．在木聚糖选择平板上用刚果红染色法筛选出阳性克隆,对阳性克隆的重组质粒进行鉴定和测序．结果表明,该木聚糖酶基因全长642个碱基,编码214个氨基酸。与已报道的来自枯草芽孢杆菌木聚糖酶的基因只有2个碱基的差别．该基因在大肠杆菌中表达。过夜培养物中胞外、胞内和胞质间的酶活分布分别为22．7％,28．2％和49．1％．该木聚糖酶的最适作用pH值为6,最适作用温度为50℃。具有较宽pH范围和较好热稳定性。     

抑制大肠杆菌粘多糖荚膜合成的相关基因的筛选

大肠杆菌(Escherichia coli)通过二信号传导体系RcsC-RcsB能够激活cps(capsule polysaccharide synthesis)基因群,在细胞表面形成一层粘性的保护性荚膜,使大肠杆菌具有较强的致病性。本文通过将基因组文库导入大肠杆菌,筛选到了名为acnA的基因,它编码合成乌头酸酶,在细胞内三羧酸循环和乙醛酸循环代谢中起关键作用,多拷贝的acnA能有效地抑制cps基因群的表达。     

河北省仔猪黄白痢流行病学调查及致病菌的分离与鉴定

仔猪黄白痢是危害养猪业的一种常见疾病.通过对河北省不同地区17家猪场的走访调查,探讨仔猪黄白痢大规模爆发的原因和防治对策,并从某猪场发病仔猪的排泄物中分离得到1株菌,经形态学、生物化学和分子生物学实验鉴定,该分离株为革兰氏阴性菌,克氏三糖铁培养产酸产气,LTB与M17873核苷酸序列同源性为100 %,该菌株确定为产肠毒素型大肠杆菌.     

微量量热法研究大肠杆菌对黄柏中活性成分和泰乐霉素的耐药性

应用微量量热法测定了不同浓度的黄柏总生物碱、小蘖碱、泰乐霉素对大肠杆菌代谢作用的热功率一时间曲线,建立了生长速率常数与药物浓度的关系．进而确定了最小抑菌浓度．在亚抑菌浓度下培养耐药菌,得到了生长速率常数与传代次数之间的关系,进而得出了大肠杆菌对三种药物耐药性的规律．同时利用该方法测出了药物间的交叉耐药性、同时用药耐药性规律及间隔用药的耐药性规律,并做了比较．结果发现。大肠杆菌对小蘖碱、黄柏总生物碱、泰乐霉索均有耐药性,但对小蘖碱、黄柏总生物碱的耐药性产生慢且容易消失;小蘖碱、黄柏总生物碱与泰乐霉索之间无交叉耐药;且与泰乐霉索间隔使用或同时使用可以减缓泰乐霉索耐药性的产生。     

重组大肠杆菌高密度发酵表达胰高血糖素样肽-1衍生物(GP62)的培养基优化

对重组E.coli BL21 (DE3)高密度表达胰高血糖素样肽-1衍生物(GP62)的发酵培养基进行了优化.通过单因素实验与正交实验相结合的方法,依次对基础培养基,发酵培养基中碳源、氮源、无机盐等成份进行优化.在2YT培养基基础上,获得优化的发酵培养基2YT-GP62.在5L全自动发酵罐中利用终浓度0.5 mmol/...