米曲霉自溶作用的研究Ⅱ自溶过程中细胞物质及酶活的变化

在米曲霉最佳的自溶条件下，对其自溶过程中重要的细胞物质及酶进行了测定，结果自溶液中测出１７种氨基酸酸，总氨基酸释放率为６８．７９％，核酸释放率为５０．００％，糖的释放率为２４．５８％，酸性蛋白酶活性高，而５’－磷酸二酯酶活性较低。     

Molecular forms of dopamine beta-hydroxylase in rat superior cervical ganglion and adrenal gland

Summary Dopamine beta-hydroxylase (DBH) enzyme activity was associated in rat superior cervical ganglion with tetrameric DBH-A (294,000 D) and dimeric DBH-B (147,000 D) and in rat adrenal gland with DBH-A and a novel molecular form of DBH, defined as DBH-C, with a molecular weight of 125,000 D. Pretreatment of the rats with cycloheximide markedly reduced DBH activity without altering the molecular heterogeneity.     

Elucidation of the relationship between enzyme activity and internal motion using a lysozyme stabilized by cavity-filling mutations

We investigated the activity and the internal motions of a stabilized mutant hen lysozyme (HEL) in which the residues M12 and L56 were mutated to L and F, respectively (LF mutant HEL). The result of the activity measurements against glycol chitin at various temperatures suggested that the temperature dependence of the activity of LF mutant HEL shifted to the high-temperature side compared with that of wild-type HEL. The detailed internal motions of LF mutant HEL in the absence and presence of a substrate analogue, (NAG)₃, were examined by model-free analysis at 35°C. The results showed that the internal motions of LF mutant HEL in the presence of (NAG)₃ were drastically restricted compared with those in wild-type HEL. Our findings thus suggested that the mutation to the stabilized lysozyme restricted internal motions required for the enzymatic reaction.Received 8 February 2005; accepted 10 March 2005Y. Yoshida and T. Ohkuri contributed equally to this work.     

干旱胁迫下铁皮石斛愈伤组织生理特性研究

以铁皮石斛愈伤组织为材料,采用PEG-6000模拟干旱胁迫处理铁皮石斛愈伤组织,检测愈伤组织可溶性蛋白含量及SOD、POD和APX活性的变化动态。结果表明,不同浓度PEG胁迫下,铁皮石斛愈伤组织可溶性蛋白均高于对照;各浓度PEG胁迫1d后,SOD活性均高于对照,当PEG浓度为30%时,胁迫2d、3d后却低于对照;POD活性随着PEG浓度的增强先上升后下降,在25%PEG胁迫下达到峰值;当PEG浓度为30%时,APX活性随着时间的延长而降低,当PEG浓度低于30%时,APX活性呈上升趋势。铁皮石斛愈伤组织可通过可溶性蛋白含量的增加和保护酶的变化来适应一定程度的干旱胁迫。     

溶氧对谷氨酸棒杆菌发酵产谷氨酸代谢的影响

分别控制0、5%、30%3种溶氧水平进行谷氨酸分批发酵,考察了3种溶氧水平下谷氨酸棒杆菌发酵的代谢响应。结果表明,随着溶氧降低,发酵液中柠檬酸和α-酮戊二酸的含量降低,三羧酸(TCA)循环还原臂途径中的有机酸含量增加,丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸含量也有所增加,在溶氧为0时,乳酸和乙酸大量积累。通过分析不同溶氧水平下的相关酶活和胞内氧化还原状态,发现随着溶氧降低,谷氨酸脱氢酶酶活降低,乳酸脱氢酶酶活升高,胞内氧化还原电势升高,它们的共同作用使氧限制条件下发酵的代谢流流向TCA循环的还原臂途径和乳酸合成途径,导致谷氨酸产量下降。     

金属离子协同复合酶制剂对木薯发酵产乙醇的影响研究

某些金属离子对木薯发酵产乙醇用复合酶制剂具有激活作用,从而提高原料的降解率,最终提高出酒率。实验选取Mg~（2＋）、Fe~（2＋）、Mn~（2＋）、Co~（2＋）四种金属离子进行单因素实验研究,均具有显著效果,出酒率能提高1～4个百分点,其中Co~（2＋）效果最好。实验结果如下：对照组出酒率34．50％,Mg~（2＋）添加量为1．4mg／g（发酵醪液）时出酒率为37．30％,0．6mg／gFe~（2）＋出酒率35．40％,0．2mg／gMn~（2＋）出酒率36．7％,0．4mg／gCo~（2＋）出酒率38．00％．     

杂粕溢多酶在肥育猪生产中的应用

试验选用健康,体重40 kg左右的杜×长×大三元杂交猪64头随机分成8组,每组8头。日粮中杂粕含量为12.5％和20.5％,杂粕溢多酶的添加量分别为0％.0.05％,0.10％和0.15％。试验结果表明:日粮中杂粕含量越高,肥育猪的生长速度越慢,饲料转化效率越低;在相同杂粕含量的日粮中,日增重、饲料转化效率随着杂粕溢多酶添加量的增加而提高;在不同杂粕含量的日粮中添加相同量的杂粕溢多酶,杂粕含量少的日增重和饲料转化效率提高。杂粕型日粮中添加杂粕溢多酶能提高肥育猪的生长速度,提高饲料转化率,缩短饲养时间。     

冷活性琥珀酸脱氢酶的特性

用常规酶学方法从嗜冷酵母(Y18)中分离纯化有催化活性的琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase, SDH).该酶的最适反应温度为20℃,0℃仍然保持酶活性的20%,40℃处理30min酶活性损失90.4%,不同温度处理后酶在280nm的紫外吸收明显改变,随温度升高在280nm紫外吸收值增大.这些结果表明所分离到的SDH是对温度敏感的冷活性酶.纯化的SDH经PAGE电泳分析显示单一条带,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测出相对分子质量为60×103和32×103的2条带,分别为黄素蛋白(flavoprotein, FP)大亚基和铁蛋白(iron-protein, IP)小亚基.通过对FP的1491个碱基的DNA序列分析表明(酿酒酵母FP基因全序列由1923个碱基组成),菌株Y18与酿酒酵母具有很高的DNA序列同源性;Y18与酿酒酵母FP一级结构包括酶的活性中心基本一致,但Y18的FP中3个位置的氨基酸变为R基较小的氨基酸,并有3个位置的氨基酸被在β-转角处出现频率较高的氨基酸所取代(丝氨酸、天冬氨酸和苏氨酸).这些结构特性可能使Y18 SDH的空间结构更具柔韧性(flexibility),有利于在低温条件下发挥催化功能.     

单环刺螠不同部位中纤溶酶的分离纯化及其活性差异

对单环刺螠不同部位中的纤溶酶(UFE)进行分离纯化,并比较其活性差异.选择单环刺螠体壁肌、内脏、体腔液作为UFE的提取来源,通过离心分离、SephacrylS 100凝胶柱层析、Q-Sepharose fast flow阴离子交换层析等工艺获得UFE单一组分,采用Folin-酚试剂法测定其酶活性,并研究UFE对AT-Ⅲ,HC-Ⅱ,凝血因子和钙离子的影响,验证不同部位UFE的活性差异.结果表明:从秋季单环刺螠体腔液中提取的总蛋白质量为39.8 mg,UFE的比活力为4 695.94 mkat·g^-1,纯化倍数为13.8,明显优于内脏和体壁肌的提取所得;在抗凝作用实验中,加入体腔液中所得UFE后,标准血浆、乏AT-Ⅲ血浆和乏HC-Ⅱ血浆凝血酶原时间、凝血酶时间均极显著延长,加入不同浓度氯化钙后,能显著延长凝血时间,同时,能够极显著降低凝血因子Ⅴ,Ⅶ,Ⅷ,Ⅸ,Ⅹ,Ⅻ的活性及大鼠血液中的钙离子浓度;不同部位来源的UFE活性有较大差异,与内脏及体壁肌相比,体腔液为UFE更优提取部位.     

胞嘧啶脱氨基酶APOBEC1研究进展

为全面理解载脂蛋白B mRNA(ApoB mRNA)编辑酶催化多肽-1(APOBEC1)的作用机制,介绍了APOBEC1和ApoB mRNA的蛋白及核酸序列,总结并绘制了APOBEC1与不同的辅助蛋白的结合模型,阐述了APOBEC1催化ApoB mRNA第6 666位的胞嘧啶(C_(6666))脱氨基化分子机制.列举了啮齿动物APOBEC1抑制多种逆转录病毒的研究报道,介绍了兔源APOBEC1结合人类免疫缺陷病毒1(HIV-1)的病毒粒子并编辑病毒基因组的机理.同时介绍了APOBEC1通过编辑胞嘧啶或与AU富集元件(ARE)结合来调控癌症等疾病相关的细胞因子表达.