突变人GM-CSF基因在大肠杆菌中的表达及纯化

目的构建重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的高效表达质粒,将其表达产物用于分离纯化的研究。方法用人外周血单核细胞获得总RNA作为模板和修饰的5′端密码子的引物经RT-PCR反应扩增到人GM-CSF基因,插入温控表达载体pDH构建了突变的hGM-CSF表达质粒,并将在E.coli中获得表达的突变rhGM-CSF包含体8 mol/L脲提取液进一步用离子交换色谱柱分离纯化。结果rhGM-CSF在大肠杆菌表达占菌体总蛋白量的22%,用弱阴离子交换色谱对rhGM-CSF的工程菌表达产物8 mol/L脲提取液直接经35 m in分离纯化,所得产物纯度可达95%,质量回收率可达到60%。结论这表明用离子交换色谱可进行rhGM-CSF的复性与同时纯化。     

豆角皂苷的纯化工艺研究

以豆角为原料,采用超声辅助提取法,用D101型大孔吸附树脂对豆角皂苷粗提物进行纯化.纯化的最佳工艺条件为上样pH值为8,上样量为8倍树脂体积,吸附70 min,依次用蒸馏水、20％乙醇溶液、8倍树脂量的70％乙醇溶液进行洗脱,解析时间为60 min,收集70％乙醇的洗脱液,减压浓缩真空干燥后得到豆角皂苷纯品,质量分数可...     

气相色谱法测定保泰松的含量

保泰松属于消炎镇痛类药物,临床上主要用于治疗风湿性关节炎.在使用过程中,如果剂量过大或用法不当,能引起中毒.介绍了用气相色谱法测定生物试样(如尿液、血浆等)中保泰松含量的方法,着重阐述用气相色谱法测定保泰松含量的原理,详述实施本方法测定保泰松含量的操作步骤,给出了计算结果.     

苯酚和苯甲酸及其衍生物在反胶束毛细管电动色谱中的分离及电泳行为

提出了以十二烷基硫酸钠/氯代正丁烷/正丁醇/水组成的反胶束体系作为分离介质,研究了17种苯酚和苯甲酸衍生物在反胶束缓冲体系中的电泳行为.结果表明:11种酚类化合物的表观电泳淌度及其离解常数存在良好的线性关系,线性方程为μapp=-23.319pK1 36.183(R=0.955 6);利用启发式算法得出的17种苯酚和苯甲酸衍生物定量结构-表观电泳淌度的关系模型能够直观地得到影响分析物表观电泳淌度的参数,预测结果和实验结果具有良好的一致性.     

Characterization of impurities in the bulk drug lisinopril by liquid chromatography/ion trap spectrometry

Two trace impurities in the bulk drug lisinopril were detected by means of high-performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry （HPLC/MS） with a simple and sensitive method suitable for HPLC/MSn analysis. The fragmentation behavior of lisinopfil and the impurities was investigated, and two unknown impurities were elucidated as 2-（6-amino- l-（l-carboxyethylamino）- l-oxohexan-2-ylamino）-4-phenylbutanoic acid and 6-amino-2-（l-carboxy-3-phenylpropylamino）-hexanoic acid on the basis of the multi-stage mass spectrometry and exact mass evidence, The proposed structures of the two unknown impurities were further confirmed by nuclear magnetic resonance （NMR） experiments after preparative isolation.     

气相色谱法测定野生植物种子中的脂肪酸

为探索新的油料资源，对野生植物种子的脂肪酸组成进行了研究。以正己烷／乙醚（Ｖ／Ｖ＝４／３）作提取剂，０．４ｍｏｌ／Ｌ的氢氧化钾－甲醇溶液作甲酯化试剂，采用室温下快速酯交换法制备脂肪酸甲酯，气相色谱法测定了６种野生植物种子中的脂肪酸组成及含量。样品所含主要脂肪酸为棕榈酸、油酸、亚油酸。其中５种野生植物种子的亚油酸含量为６０．４５％～７９．９６％。与几种常见植物油的脂肪酸组成进行了对比，结果表明，被测样品的脂肪酸组成与常见植物油是类似的，但其亚油酸含量普遍高于植物油。同时还分析了几种水果子的脂肪酸含量。     

淤泥中重金属铜的植物去除

利用花卉植物瓜叶菊,对排施于淤泥中的重金属铜离子的实验室内静态净化实验研究表明,瓜叶菊对淤泥中的Cu2+具有明显的吸收去除效果,富集强弱为根>茎>叶,最大富集能力分别为76.2%、64.7%、60%,说明瓜叶菊能明显改善铜污染状况.并通过丙二醛含量、过氧化氢酶含量和质膜透性的变化,探讨了其生理机制.     

高聚物反相填料在分离纯化莱菔硫烷中的应用

采用高聚物反相填料装填的半制备柱(PST, 30μm, 300mm×10mm ID)对莱菔硫烷进行分离纯化,优化了色谱分离参数,确定最佳流动相为30%乙腈-水溶液,流速为2mL/min等度洗脱,检测波长254nm,进样量不超过20mg时,收率在61%以上,纯度可达90%。采用中心切割的方式收集,获得的产品纯度可达90%以上。     

不同来源胡敏酸的酒精分级

从草炭、褐煤、风化煤3种腐殖化程度不同的物料中提取了3种不同的胡敏酸，分别对其进行酒精分级，并对各级分的碳、氮含量进行了测定．结果表明．在3种胡敏酸中．草炭胡敏酸的脂肪性最强，芳构化度最低．分子量最小；风化煤胡敏酸的脂肪性最弱，芳构化度最强，分子量最大；褐煤胡敏酸则居中。     

人类PIF1蛋白质N-末端多肽的表达纯化和生物学活性研究

解螺旋酶参与几乎体内所有的DNA代谢,具有重要的生理功能。为了从分子水平阐述人类PIF1解螺旋酶的生理功能,我们以HeLa细胞的cDNA文库为模版,PCR扩增得到PIF1基因5’端含有1～534核苷酸的cDNA序列一PIFAC。在PIF△C的5’端引入六组氨酸标签后插入pET15b表达载体,得到重组质粒pET15-PIF△C。以此重组质粒转化Rosetta TM2（DE3）感受态细胞,使PIFAC蛋白质在大肠杆菌中得到表达。在4℃通过快速液相色谱纯化系统,通过一系列色谱层析柱纯化了PIFAC蛋白质。以纯化的PIFAC蛋白质免疫家兔制备了抗血清,并检测了纯化的PIFAC的生物化学活性。结果显示不含解旋酶模序的人类PIF1蛋白质的N-末端,具有使单链DNA复性的特性。PIF1解螺旋酶具有解开DNA双链和使双链DNA复性这一矛盾的特性,暗示了人类PIF1解螺旋酶可能参与损伤DNA的修复,包括断裂的双链DNA的修复。