重组F3肽-铜绿假单胞菌外毒素A抑制肿瘤生长

 为检测重组的F3 肽-铜绿假单胞菌外毒素A（F3-PE39KDEL）的抗肿瘤作用,采用MTT 法检测F3-PE39KDEL 对人乳腺癌细胞MCF-7、人肺癌细胞A549、人卵巢癌细胞SKOV3 和人肝癌细胞HepG2 的生长抑制活性。采用半数致死剂量法观察F3-PE39KDEL 对小鼠的毒性反应。以接种人肺癌细胞的裸鼠为模型,观察F3-PE39KDEL 的抗肿瘤作用。结果显示,培养72、120 h时,F3-PE39KDEL对于人肺癌细胞A549和人乳腺癌细胞MCF-7具有显著的抑制活性,IC₅₀分别为0.41、0.42 μg/mL,4.95、2.53 μg/mL。毒性试验结果显示,静脉注射给予F3-PE39KDEL 后小鼠的半数致死量为1.1782 mg/kg,动物出现自发运动减少,死亡集中在给药后1 d 内,死亡动物及实验结束存活动物剖检未见异常。F3-PE39KDEL 对荷瘤裸鼠具有较强的抗肿瘤活性,剂量分别为0.1、0.2、0.4 mg/kg,其抑制率分别达到37.0%、43.2%、53.1%,显示出良好的量效关系。F3-PE39KDEL 在靶向治疗肿瘤方面具有较好的应用前景。     

环肽合成研究

环肽由于其稳定的结构特性在生物模拟,药物设计,纳米与分子器件,生物传感器以及催化剂等方面起着越来越重要的作用,本文介绍了近年来环肽化合物的合成及其应用的一些进展。     

蛋白质分子α螺旋结构的发现

笔者具体介绍了蛋白质分子α螺旋结构的发现过程。鲍林是怎样在了解蛋白质组成和X射线研究的实验成果的基础上,从结构化学的角度认识到在蛋白质中氢键的性质和作用,揭示了肽基的刚性平面性质,从而发现了蛋白质分子的α螺旋结构的。     

海参内脏酶解制备海参肽工艺

以蛋白水解度和酶解液中海参肽相对分子质量的分布作为指标,考察不同蛋白酶的酶解效果,筛选水解海参内脏的最适合蛋白酶,并通过单因素实验和正交实验优化酶解工艺.实验结果表明:胰蛋白酶的水解效果最佳,可用于水解海参内脏制备海参肽;在底物质量分数为1.0%,加酶量为0.375 1 mkat·g^-1,pH值为8.0,酶解温度为37 ℃,水解时间为5 h的最优酶解条件下,海参内脏的水解度可达到48.90%,酶解液中的多肽(2 000~5 000 u)质量分数为52.68%,寡肽(含氨基酸)(≤2 000 u)质量分数为47.25%.     

猪血中抗菌肽类物质的分离纯化和抗菌活性研究

利用酶解、脱色等技术,从新鲜猪血中分离提取抗菌肽,再经SephadexG-100凝胶层析纯化,收集各组分并检测其抗菌活性。采用琼脂糖弥散法检测猪血抗菌肽对大肠杆菌O88、金黄色葡萄球菌ACTT25923株、绿脓杆菌ACTT27853株、鸡巴氏杆菌、鸡致病性沙门氏菌自然分离株等5种细菌的作用;同时,采用扫描电镜观察了猪血抗菌肽与上述金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌共同培养20min后细菌形态结构的改变。结果表明,猪血抗菌肽对以上各种细菌均有不同程度的抑杀作用;扫描电镜观察发现,经抗菌肽作用20min后,这两种细菌的形态结构均发生了明显的改变,表现为细菌干瘪、皱缩、表面粗糙不平、分裂繁殖停止。这表明猪血抗菌肽不仅对供试细菌的形态结构有明显的损伤作用,同时还影响细菌的生长繁殖。     

降钙素基因相关肽在受损SD大鼠面神经运动神经元中的表达与定位

目的：研究降钙素基因相关肽（calcitonin gene—related peptide。CGRV）在面神经损伤后再生过程中面神经运动神经元中的表达变化．方法：健康SD大鼠分别行左侧面神经茎乳孔压榨术,术后饲养3、7、14、21、28、35d,取出脑干含面神经核团部分,用免疫组化及图像分析技术,观察面神经核中的CGRP在面神经再生中的变化．结果：CGRP分布于正常SD大鼠面神经各亚核。面神经损伤后3d。损伤侧的面神经核中CGRP比对照侧增强．图像分析CGRP灰度值与对照侧比较,差异显著（P〈0．05）;损伤后7d达最高峰（P〈0．05）,以后尽管显著表达但渐减．结论：损伤导致CGRP在面神经运动神经元中的表达增加,提示CGRP在面神经再生修复过程中发挥调理作用．     

针刺对焦虑障碍大鼠作用的部分机制研究

目的：分析针刺对焦虑障碍大鼠肾上腺心房利钠肽、C型利钠肽水平和血浆皮质酮含量的影响,探讨针刺治疗焦虑障碍的部分机制.方法选取SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、针刺组.模型组、针刺组大鼠建立慢性情绪应激刺激焦虑模型,针刺组同时针刺“内关”、“神门”,每2 d针刺1次,45 min/次,共15 d.空白对照组和模型组用相同方法固定,不做任何干预.使用高架十字迷宫观察大鼠行为学变化,计算进入开臂次数( OE)和停留时间( OT)分别占进入总次数和停留时间的百分比;ELISA法检测大鼠血浆皮质酮水平;免疫组化S-P法检测大鼠肾上腺心房利钠肽、C型利钠肽水平.结果针刺组大鼠OT值明显高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05),与空白对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);3组大鼠OE值之间差异均无统计学意义(P>0.05).模型组大鼠浆皮质酮含量明显高于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);针刺组大鼠浆皮质酮含量明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);针刺组与空白对照组之间差异无统计学意义(P>0.05).模型组大鼠肾上腺皮质和髓质中的心房利钠肽水平均低于空白对照组,C型利钠肽水平均高于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);针刺组大鼠肾上腺皮髓质心房利钠肽明显高于模型组,C型利钠肽明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);针刺组肾上腺髓质心房利钠肽、C型利钠肽与模型组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论针刺可通过调节外周肾上腺髓质心房利钠肽、C型利钠肽水平,进而影响血浆皮质酮释放,抑制HPA轴活性,发挥抗焦虑作用.     

超滤分离对马氏珍珠贝肉蛋白酶解液特性的影响

研究了马氏珍珠贝肉蛋白酶解液在超滤过程中膜通量的变化及超滤前后感官评价、肽分子量分布以及氨基酸的变化,对超滤膜的选择性及分离效果进行了评价和分析.实验结果表明,马氏珍珠贝肉蛋白酶解液在超滤过程中,随着超滤时间的延长,膜通量不断减小,透过液的鲜味明显提高,腥味和苦味基本消失,透过液中含有分子量大于截留分子量（5000 Da）的多肽,超滤膜实际有效截留分子量约为7000 Da~8000 Da,分子量小于4500 Da左右的多肽在透过液中得到有效富集.超滤处理后,同一氨基酸在总氨基酸和游离氨基酸中含量的变化均不一致,透过液肽态氨基酸中鲜味氨基酸占总氨基酸比例高于原酶解液,而苦味氨基酸和疏水性氨基酸占总氨基酸的比例均低于原酶解液.     

重组降血压肽多肽序列的设计及表达系统构建

通过分析降血压肽结构与功能的关系,设计并合成5条降血压肽序列,通过活性测定以及体外消化试验,确定P3（六肽）为理想降血压肽,为实现该小肽在大肠杆菌中的表达,经特定酶切位点将其串联为6拷贝的融合多肽,将相应的基因序列克隆至表达载体pGEX-4T-2并转化至宿主茵Escherichia coli BL21中,双酶切、PCR以及测序结果均表明成功构建了重组质粒pGEX-4T-2-ACEIP。