海藻糖对冻干胸腺肽生物活性保护作用的研究

将胸腺肽原液与不同浓度的海藻糖（Trehalose)同时冻干后分别在4,22和37℃下保存0-24个月,并于不同时间进行E-玫瑰花环结合率实验检测其稳定性。结果显示海藻糖对胸腺肽活性具有明显的保护作用,随着海藻糖浓度升高（5%-15%）,其保护性能逐渐加强。15%海藻糖在实验组中对胸腺肽自学成才性保护性最强,在各保存温度尤其在低温条件下（2-8℃）。海藻糖可极显著增强胸腺肽活性,延长有效活性保存时间。     

胰高血糖素样肽1受体N端片段与exendin-4的亲和位点分析

通过易错PCR(epPCR)方法建立了一个鼠肺的胰高血糖素样肽1受体(GLP-1R)N端片段的噬菌体随机突变展示肽库.根据筛选出的突变体来分析突变后胰高血糖素样肽1受体N端片段(nGLP-1R)与exendin-4结合活性.实验结果显示:保守的半胱氨酸C26发生突变后并未引起nGLP-1R与其配体exendin-4结合能力的改变,第101位和108位氨基酸是nGLP-1R与exendin-4结合的潜在位点.     

不同拷贝数及间隔肽序列对毕赤酵母分泌表达EXA的影响

通过多拷贝串联表达,以及在分泌信号序列和目的蛋白N端之间插入几个氨基酸的间隔短肽,以提高exendin-4类似物串联体EXA在重组毕赤酵母中的分泌表达水平.实验结果表明:2～5个EXA串联插入均比单个EXA插入有利于提高表达水平,而4拷贝EXA串联体的表达产物较多滞留在胞内.在EXA的N端增加间隔肽可促进蛋白分泌,与不含间隔肽序列的4拷贝EXA串联表达载体相比,含有糖基化位点(NTTEEGEPK)和肠激酶识别位点(DDDDK)间隔肽的插入,使蛋白表达水平分别提高了4倍和9倍.     

美洲大蠊多肽和顺铂联用对HepG2细胞凋亡及自噬的影响

采用MTT法检测美洲大蠊多肽（PAP-3）与不同浓度的顺铂（DDP）单用或联合使用对人肝癌HepG2细胞增殖的影响；采用流式细胞术检测PAP-3、DDP单独或联合给药干预对HepG2细胞凋亡的影响；Western Blot检测PAP-3、DDP单独或联合给药后HepG2细胞内自噬相关蛋白p62、LC3、Beclin-1、Atg5及PI3K的表达。实验结果显示，与DDP单独给药相比，PAP-3与DDP联合给药对HepG2的细胞的抑制作用更强；PAP-3与DDP联合给药组中细胞的凋亡率与DDP和PAP-3单独给药组相比均有升高（P ＜ 0.05)。与对照组相比，DDP组中，p62蛋白水平降低，LC3II蛋白水平升高，LC3II/I的比例也升高，表现出细胞自噬流的活化；与DDP组相比，联合给药组中p62蛋白水平回升，LC3II蛋白水平和LC3II/I的比例均有回落。且联合给药组中PI3K、Atg5、Beclin-1等自噬相关蛋白的量均较DDP组减少，而凋亡相关的Caspase-3蛋白的表达量则较DDP组增加。据此推测，PAP-3和DDP的联用可以通过抑制HepG2细胞自噬相关蛋白的表达水平，抑制DDP带来的细胞自噬水平的升高，增加细胞对DDP的敏感性，从而诱导HepG2细胞凋亡。     

α-螺旋抗菌肽YHX-1的从头设计及抑菌活性研究

抗菌肽因其高效的抗菌活性和独特的抗菌机制,不仅可作为生物防腐剂预防食品加工贮藏中的微生物腐败,还有望缓解抗生素滥用引起的耐药性问题。为得到一种高效安全的新型抗菌肽,以现有抗菌肽数据库为基础,确定优化了新型抗菌肽的序列长度、电荷数、氨基酸组成,并结合生物信息学预测及分析工具,从头设计得到了序列为GKLLSKLLKKLLK的新型抗菌肽YHX-1；通过琼脂扩散法、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度及杀菌动力学曲线评价了其对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抑菌活性,并进一步测定了YHX-1在盐离子、血浆和微酸性环境中的稳定性、二级结构、溶血活性及细胞毒性。结果表明:YHX-1对6株指示菌均有良好抑菌活性,其中对单增李斯特菌和鼠伤寒沙门氏菌的MIC为4μg/mL,在2h内对单增李斯特菌的致死率为99.99%。YHX-1在盐离子(200mmol/L Na⁺、2mmol/L Ca²⁺)和10%~25%血浆环境中均表现出一定的敏感性,MIC增至原来的2~8倍,而微酸性环境(pH值5.4~7.4)对YHX-1的MIC不会产生显著影响。圆二色光谱表明,YHX-1在细胞膜模拟环境中呈现典型的α-螺旋构象。溶血活性和细胞毒性实验表明,YHX-1具有较好的细胞选择性。YHX-1不仅抑菌谱广、抑菌活性明显,而且具有良好的安全性,有望作为新型抗菌剂应用于食品防腐保鲜,其从头设计策略旨在为新型抗菌肽的发掘提供参考。     

复方木香保健酒对脾虚大鼠的影响

为探究复方木香保健酒对脾虚大鼠(Rattus norvegicus)的影响，选取SPF级SD大鼠，采用皮下注射利血平结合不规则喂养构建大鼠脾虚模型，并在造模成功后设置6个处理组，每组含10只大鼠，雌雄各半，其中：正常组(N组)保持正常喂养方式，模型组(T0组)保持脾虚状态，且均不予以药物治疗；莫沙必利组(TM组)予以每1 kg体质量0.01 g的枸橼酸莫沙必利，低、中、高剂量组(T1、T2和T3组)的给药量分别为每1 kg体质量给予10.0、5.0和2.5 mL的复方木香药液(其中药物含量相当于3.00 g·mL -1的生药材)。连续给药14 d后，采集大鼠血样并进行有关血液指标的测定。结果显示：1) T0组大鼠精神萎靡、扎堆、拱背、皮毛枯槁、嗜睡等症状依然明显；T1、T2、T3和TM组大鼠的脾虚症状均有所减轻，与T0组相比体质量增长率和食物利用率有所提高。2) 经过药物治疗，脾虚大鼠血液中的血小板计数得到提升，白细胞计数和总蛋白质量浓度与正常大鼠无明显差异；但血红蛋白质量浓度与红细胞计数未恢复。3) N组与T0组相比血清D-木糖质量浓度有统计学意义上的升高(p<0.05)，T3组与N组的该指标差异无统计学意义，但与T0组的该指标差异有统计学意义(p<0.05)。N组与T0组相比血清免疫球蛋白G质量浓度有统计学意义上的升高(p<0.05)，但4个药物治疗组与N组的该指标差异无统计学意义。N、T3组与T0组相比血清胃动素均有统计学意义上的升高(p<0.01)，N、T3组雄性个体间的该指标差异无统计学意义但雌性个体间的该指标差异具有统计学意义(p<0.05)；N组与其他5组相比血清胃泌素质量浓度均有统计学意义上的升高(p<0.05)，TM、T3组与T0组相比该指标也有统计学意义上的升高(p<0.05)。N组与T0组的血清血管活性肠肽质量浓度差异具有统计学意义(p<0.01)；在雄性个体间，TM、T3组与T0组相比血清血管活性肠肽质量浓度均有统计学意义上的升高(p<0.05)，但与N组相比该指标没有统计学意义上的差异；在雌性个体间，T3组与T0、N组相比血清血管活性肠肽质量浓度分别有统计学意义上的升高 (p<0.01)和降低(p<0.05)。N、T0组雌性大鼠的淀粉酶浓度差异具有统计学意义(p<0.05)，N、T0组雄性大鼠的该指标差异无统计学意义，T2、T3和TM组与N、T0组相比该指标的差异均无统计学意义。由上述结果可知，复方木香保健酒能提升脾虚大鼠的肠胃运动能力，促进脾虚大鼠消化吸收，增强脾虚大鼠免疫力，最终促进脾虚大鼠的康复。