Vacuolar H+-ATPase: From mammals to yeast and back

Vacuolar H⁺-adenosine triphosphatase (V-ATPase) is composed of distinct catalytic (V₁) and membrane (V₀) sectors containing several subunits. The biochemistry of the enzyme was mainly studied in organelles from mammalian cells such as chromaffin granules and clathrin-coated vesicles. Subsequently, mammalian cDNAs and yeast genes encoding subunits of V-ATPase were cloned and sequenced. The sequence information revealed the relation between V- and F-ATPases that evolved from a common ancestor. The isolation of yeast genes encoding subunits of V-ATPase opened an avenue for molecular biology studies of the enzyme. Because V-ATPase is present in every known eukaryotic cell and provides energy for vital transport systems, it was anticipated that disruption of genes encoding V-ATPase subunits would be lethal. Fortunately, yeast cells can survive the absence of V-ATPase by drinking the acidic medium. So far only yeast cells have been shown to be viable without an active V-ATPase. In contrast to yeast, mammalian cells may have more than one gene encoding each of the subunits of the enzyme. Some of these genes encode tissue- and/or organelle-specific subunits. Expression of these specific cDNAs in yeast cells may reveal their unique functions in mammalian cells. Following the route from mammals to yeast and back may prove useful in the study of many other complicated processes.     

酵母菌处理味精废水的研究

对酵母菌处理味精废水的工艺条件进行了研究．结果表明，其最佳工艺条件为：pH4．0、温度32℃、发酵时间22h、接种量15％．该技术作为前处理工艺可使废水化学耗氧量(COD)的去除率达60％以上，为后处理的达标排放提供了基础，并可回收一定的酵母蛋白，具有一定的经济效益。     

铬酵母制备及在酸奶中的添加

利用生物合成法制备了有机铬含量较高的新型添加剂——铬酵母，并将其添加到酸奶中．用分光光度法对铬酵母及添加了铬酵母的酸奶进行了总铬和有机铬含量的测定，考察了样品处理方法，并从酸奶的感官鉴评、酸度及有机铬含量方面考察铬酵母的添加对酸奶品质的影响．结果表明，铬酵母的添加对酸奶品质无任何不良影响，而有机化程度在发酵前后也无明显的变化．     

糖蜜发酵培养高铁营养酵母

采用生长周期短，易于工业化生产的酵母为菌株，以糖蜜为主要培养基，通过现代发酵工程技术，在3m^3发酵罐上进行中间试验，在12m^3发酵罐上试生产高铁营养酵母．其发酵产品高铁营养酵母铁的含量为1061mg／kg，高铁营养酵母的产率为2．54％，蛋白质的含量(质量分数)为51.90％.     

酵母细胞流加培养过程的建模与预估控制

建立了包括菌体浓度 X、底物浓度 S、培养液体积 V为状态变量的酵母流加发酵过程的非结构动力学模型 ;基于该模型 ,提出了一种克服被估变量的累积误差的一步预估方法 ,用以估计难以可在线测量的菌体浓度、底物浓度等生化状态变量 ,并根据预估结果 ,进行流加操作。该方法应用于酵母流加培养 ,酵母对糖得率由 35 .1%提高到 40 .2 %。     

酵母海藻糖提取及精制工艺的研究

对酵母海藻糖的提取与纯化工艺进行了研究。在温度80℃、酵母质量浓度70g/L条件下用50%乙醇溶液提取60min,海藻糖提取率可达98.81%;采用大孔阴阳离子交换树脂混合柱纯化提取液,适宜条件为,流速(3～6)mL/min,温度40℃,经浓缩、结晶,海藻糖纯度可达98%以上。     

不同浓度的硫离子处理酵母菌的生物学效应

将不同浓度的Na2S加入培养基中处理酵母菌,结果发现,随着处理培养基中Na2S浓度的升高,酵母菌的菌落数、细胞的直径、细胞内多种内含物（核酸、蛋白质、可溶性糖等）的含量都有所降低.     

新型抗菌肽基因设计、合成及在酵母中的表达(Ⅱ)——抗菌肽 AD 基因在酵母中的表达

将抗菌肽ＡＤ基因定向克隆到大肠杆菌－酵母穿梭质粒ｐＣＬＷＡ２的ＢａｍＨＩ和ＳａｌＩ位点上,构建成含抗菌肽ＡＤ基因的重组质粒ｐＣＡＤ,转化酵母宿主菌ＡＢ１０３,转化子在缺乏亮氨酸的ＳＤ选择培养中３０℃培养４８ｈ,培养液经简单纯化后,活性蛋白ＰＡＧＥ和琼脂孔穴扩散法测定抑菌活性表明,抗菌肽ＡＤ基因在酵母中获得表达．     

酿酒酵母中一种新的反义snoRNA分子的鉴定

核仁小分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）是一类在真核生物核糖体生物合成过程中起重要作用的小分子ＲＮＡ．通过计算机直接分析国际分子生物学数据库及ＲＮＡ杂交分析、ｃＤＮＡ序列测定等方法,在酿酒酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）中发现和鉴定了１个新的ｓｎｏＲＮＡ－Ｚ６ｓｎｏＲＮＡ．该ｓｎｏＲＮＡ长１０９个核苷酸,由位于酿酒酵母第１３号染色体上的１个独立基因编码．Ｚ６ｓｎｏＲＮＡ含有ｂｏｘＣ（ＵＧＡＵＧＡ）、ｂｏｘＤ（ＣＵＧＡ）等保守的结构元素,属于反义ｓｎｏＲＮＡ家族,即分子中有１段１１个核苷酸的片段与２５ＳｒＲＮＡ中１段保守核心序列互补,该ｓｎｏＲＮＡ片段连同其下游的ｂｏｘＤ共同指导与其互补的ｒＲＮＡ序列第２１９５位胞苷酸的２’－氧－核糖的甲基化．     

甲醇酵母表达系统pMIRH型载体研究

在为甲醇酵母（Ｈａｎｓｅｎｕｌａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）表达系统成功构建高拷贝整合型表达载体ｐＭＩＲＨ－１的基础上,构建了更能满足外源基因表达需要的、大小仅为７３００ｂｐ的高拷贝整合型表达载体ｐＭＩＲＨ－２．有关转化、筛选及传代稳定性试验结果表明,ｐＭＩＲＨ－２亦具有与ｐＭＩＲＨ－１相似的转化和筛选特性及高拷贝整合能力,且二者均可在非选择条件下稳定传代６０代以上．