MST1的酵母双杂交及与Salvador体外结合的研究

利用酵母双杂交系统,以鼠M ST 1(M amm alian STE 20-1 ike 1)为诱饵蛋白,在鼠胚胎库中筛选到22个Salvador的片段。通过E.coli表达系统纯化了6个组氨酸(6H is)融合的M ST 1和谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合的Salvador,并做体外蛋白质结合实验,进一步证实了两蛋白质相互结合。通过体外激酶活性分析,发现M ST 1并不直接磷酸化Salvador,但是Salvador能够较强地抑制M ST 1对M BP(磷酸丁酯)的磷酸化,提示有可能Salvador通过影响M ST 1的激酶活性来参与了M ST 1介导的细胞凋亡途径。     

耐酸酵母的分离鉴定及在丢糟发酵中的应用

从白酒丢糟及酒醅中分离得到2株酵母菌YP2、YZ13,两株菌均能在pH 3.0条件下正常生长,经鉴定YP2为Candida属,与Candida pseudolambica(KM384061.1)相似度98%;YZ13为Pichia属,与Pichia kudriavzevii(LC014798.1)相似度100%.2株酵母(种子液体积比1∶1)应用于丢糟发酵中,接种量100 mL/kg,在鲜丢糟870 g/kg、麸皮100 g/kg、硫酸铵15 g/kg、生石灰15 g/kg,28 ℃混合固态发酵60 h,丢糟(干样)的真蛋白含量达172.30 g/kg,比发酵前丢糟(干样)提高了28.29%,丰富了丢糟饲料蛋白,为丢糟发酵和高效饲料提供了依据.     

酵母添加方式对酒精发酵过程的影响

研究了酒精发酵过程中,酵母在不同添加量、方式对还原糖含量、酵母数量影响的规律。结果表明,发酵不同时期分批添加酵母,可以降低还原糖含量,提高成熟发酵醪酒精浓度。实验条件按工厂工艺进行,成熟发酵醪酒精达到17%以上。     

甲醇营养型酵母表达系统及其应用进展

甲醇酵母表达系统是一种广泛使用的真核表达系统,它具有表达量高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等优点。本文综述了甲醇酵母表达系统的特点、提高重组蛋白表达量的方法及近年来甲醇酵母表达系统在病原微生物及抗体工程中的一些研究应用状况。     

固定化酵母菌与游离酵母菌产酒精作用的比较研究

本文进行了固定化酵母与游离酵母产酒精发酵的比较实验。通过对其酒精度、酸度、糖度进行对照比较,分析固定化酵母与游离酵母在产酒精等方面的差异。结果表明：活性干酵母细胞固定化后与游离酵母细胞相比,在酒度、酸度、糖度方面。固定化酵母细胞具有很大的优势。     

微量元素硒载体酵母发酵的研究

以啤酒酵母为硒载体酵母生产菌株,通过5L全自动发酵罐实验,对硒酵母的生产工艺进行了研究.确定了硒酵母发酵生产的适宜控制参数和加硒条件:在发酵开始后第2～11h内流加亚硒酸钠,总加入量为8 4×10-4mol/L,经过12h发酵可得硒酵母干粉的生物量为100mL2 1g,酵母中硒的质量分数为1800μg/g以上,酵母细胞对硒离子的利用效率是50%以上.     

酵母(Saccharomyces cerevisiae )蛋白激酶SCH9激活环磷酸化调控胁迫应答

通过比较野生型、△sch9和△sch9(SCH9-3HA)三种酵母茵种在葡萄糖、半乳糖、蔗糖和麦芽糖作碳源培养基上的生长表型研究SCH9是否参与酵母不同碳源代谢利用调控.结果显示,△sch9细胞茵落大小较野生型细胞小且有明显的生长缺陷,但这种生长缺陷在重新获得sch-3HA基因后得到恢复.通过比较野生型、△sch9和△sch9(SCH9-3HA)三种酵母茵种在渗透压胁迫和热胁迫条件下的生长表型发现sch9可能参与了酵母胁迫应答.利用抗SCH9570位磷酸化苏氨酸特异性抗体(anti-T570-P),通过变性免疫沉淀和免疫印迹方法,研究了生理条件下的△sch9(SCH9-3HA)细胞裂解液中SCH9激活环的磷酸化状态.结果显示,在生理条件下SCH9激活环T570位点发生了明显磷酸化.进一步研究了渗透压胁迫条件下SCH9激活环T570位点的磷酸化水平.结果表明,渗透压胁迫条件下SCH9激活环T570位点磷酸化水平较生理条件下显著增强.结果显示SCH9可能通过增强激活环磷酸化水平来参与调控酵母不同碳源代谢和胁迫应答.     

核桃V-ATPase c亚基基因(JrVHAc4)的克隆和抗旱功能分析

【目的】V-ATPase是植物逆境响应的重要酶,有必要了解V-ATPase相关亚基参与核桃响应逆境胁迫的功能机制。【方法】从‘香玲’核桃转录组中克隆获得1条V-ATPase c 亚基基因(命名为JrVHAc4),通过分析启动子预测其逆境响应功能。对JrVHAc4基因进行干旱胁迫下的表达分析,同时构建JrVHAc4酵母表达载体转入酵母表达系统研究其抗旱功能。【结果】JrVHAc4基因开放读码框(ORF)全长495 bp,拟推导的蛋白分子量为16 527.61 u,包含164个氨基酸,理论等电点为8.62; 其上游1 047 bp启动子包含MYC、DOF、MYB等与干旱响应相关的顺式作用元件。干旱胁迫下,JrVHAc4基因在核桃叶和根中均被显著诱导,并存在差异。对JrVHAc4转基因酵母进行不同浓度甘露醇胁迫,与对照酵母相比,发现JrVHAc4基因的表达能显著提高转基因酵母的生长活性。【结论】JrVHAc4基因能响应干旱胁迫,并能提高酵母的抗旱能力,JrVHAc4可作为核桃抗逆重要候选基因。     

高效降解苯酚的酵母菌筛选及其降解特性研究

为了更有效处理含酚废水 ,用生物流化床驯化活性污泥 ,富集、筛选高效的苯酚降解菌 ,最后分离得到一株酵母菌 ,经鉴定为瓶形酵母属 (Pityrosporumsp .) .这株酵母菌可降解10 0 0mg/L的高浓度苯酚 ;降解苯酚的最适环境条件为温度 30℃ ,pH 6～ 7,振荡速率大于 15 0r/min ,在培养基中补加适量的氮、磷对提高苯酚的降解速率非常重要 .酵母菌降解苯酚能力强 ,菌体体积较大 (10 .9～ 19.8μm× 10 .9～ 31.7μm) ,沉降性能好 ,不仅能有效地处理含酚废水 ,而且能生产单细胞蛋白     

SGK and 14-3-3 protein are involved in the serine/ threonine phosphorylation mechanism for TPO/MPL signal transduction

Thrombopioetin (TPO), the critical regulator of platelet production, acts by binding to its cell surface receptor, c-Mpl. Yeast two-hybrid screening was performed to isolate the proteins interacting with the cytoplasmic domain of c-Mpl. 48 positive clones were isolated from 5 × 10⁶ independent transformants. The results of sequence analysis demonstrate that they represent 13 different protein encoding sequences. Among them there are a partial coding sequence of serine/threonine protein kinase SGK (serum and glucocorticoid-inducible kinase) and 14-3-3 theta protein partial coding sequence. GST-pull-down assay and co-immunoprecipitation in mammal cells have confirmed the interaction between these two proteins and c-Mpl. By constructing a series of deleted c-Mpl cytoplasmic domain, the interaction region in c-Mpl cytoplasmic tail was localized in amino acids 523–554. At the same time, the directed interaction between SGK and 14-3-3 proteins also has been verified by yeast two-hybrid assay. The present note is the first time to report that two proteins act with c-Mpl at the same time and put forward that SGK and 14-3-3 protein may be involved in the serine/threonine phosphorylation mechanism for signal transduction.