视网膜母细胞瘤结合蛋白4基因酵母双杂交诱饵载体的构建

视网膜母细胞瘤结合蛋白4(RBBP4)是WD-40蛋白家族的成员之一,其在组蛋白乙酰化、细胞周期进展及肿瘤干细胞的分化等方面具有重要功能,研究与RBBP4互作的新蛋白质和认识RBBP4在疾病包括肿瘤的发生发展过程中的分子机制有重要意义。通过RT-PCR扩增获得了RBBP4基因的CDS序列,经双酶切后与pGBKT7酵母诱饵载体连接构建了pGBKT7-RBBP4载体,再通过双酶切鉴定和测序验证,结果表明此酵母双杂交诱饵载体被成功构建,为后续利用酵母双杂交技术筛选与RBBP4蛋白相互作用的新蛋白提供了参考。     

酿酒酵母蛋白激酶Sch9的PDK1位点调控C末端磷酸化状态

利用酿酒酵母蛋白激酶Sch9(哺乳动物p70S6k1的同源物)PDK1和PDK2位点点突变的两种突变体,分别进行生长、寿命表型检测及免疫印迹分析实验,发现PDK1位点的磷酸化水平对于Sch9活性起着主导性作用,并且PDK1位点发生去磷酸化会促进C末端高度磷酸化,而PDK1发生磷酸化会抑制C末端的磷酸化.由此说明Sch9上PDK1和PDK2位点是否发生磷酸化除了受到各自上游激酶的调节外,两者之间还存在着一种负调控机制.     

甘蔗糖蜜发酵高麦角固醇酵母

采用麦角固醇产量高、生长周期短、有应用潜力的酵母为菌株,以甘蔗糖蜜为培养基,通过正交实验优化发酵条件,并在500 L发酵罐进行中试放大试验.结果表明,培养48 h,麦角固醇含量可达2.39 g/1OOg菌体干重,生物量为1.79 g/lOOmL发酵液.     

酵母双杂交筛选与脱落酸受体相互作用的蛋白质及其重转酵母的验证

脱落酸（abscisic acid,ABA）是一种重要的植物激素,它能使植物适应逆境胁迫,从而调节植物的生长发育状况.现今ABA受体已被公认为RCARs/PYR/PYLs家族蛋白.本实验通过拟南芥为模式植物,利用酵母双杂交系统共转化方法从拟南芥cDNA文库中筛选与RCAR3相互作用的蛋白质,获得多个阳性克隆,从中选取一个与生长素调节相关的基因NIT1的全长cDNA重新转化酵母验证,发现与RCAR3仍然有相互作用,排除了假阳性的可能.从而为下一步研究该基因与RCAR3的相互关系做好了准备.     

一株耐盐苯酚降解菌的分离、鉴定及特性研究

从污水处理厂活性污泥中筛选到一株高效的耐盐苯酚降解菌,经形态观察及26SrRNA序列分析鉴定为假丝酵母菌Candida sp.,命名为W3.该菌株可以在1%～10%NaCl环境中生长,并可以利用苯酚为唯一碳源和能源.苯酚降解的最优条件为pH=7.0,温度30℃,NaCl质量分数5%.在NaCl质量分数为5%.苯酚浓度为...     

一株耐盐性酵母的原生质体化及再生条件的优化研究

对一株耐盐性酵母Zygosaccharomyces rouxii的原生质体化及再生条件进行了实验研究.结果表明:用0.5 mg/mL(10 unit/mL)细胞壁溶解酶zymolyase20T在1.0~1.5 mol/L山梨糖醇渗透压调节剂的浓度范围内,原生质体化率可达99%以上,再生率在2%~11%之间,而且用磷酸钾缓冲液比用Tris-HCl缓冲液再生率高.在山梨糖醇浓度1.5 mol/L,zymolyase20T浓度0.5 mg/mL,磷酸钾缓冲液0.1 mol/L(pH6.0)时,30℃、60 min,再生率达30%以上.     

利用大孔树脂从啤酒废酵母中分离谷胱甘肽

利用大孔树脂D001分离纯化还原型谷胱甘肽,其最佳试验条件为：pH值4.5、浓度为0.02 mol/L的磷酸缓冲液平衡,pH值7.5、浓度为0.02 mol/L的磷酸缓冲液洗脱,洗脱流速为2.0 mL/min.此法所得到的粗品颜色为白色,经高效液相色谱分析,其GSH质量分数为28.47%,平均收率为71.6%.     

Hydroxylation of demethoxy-Q6 constitutes a control point in yeast coenzyme Q6 biosynthesis

Coenzyme Q is a lipid molecule required for respiration and antioxidant protection. Q biosynthesis in Saccharomyces cerevisiae requires nine proteins (Coq1p–Coq9p). We demonstrate in this study that Q levels are modulated during growth by its conversion from demethoxy-Q (DMQ), a late intermediate. Similar conversion was produced when cells were subjected to oxidative stress conditions. Changes in Q₆/DMQ₆ ratio were accompanied by changes in COQ7 gene mRNA levels encoding the protein responsible for the DMQ hydroxylation, the penultimate step in Q biosynthesis pathway. Yeast coq null mutant failed to accumulate any Q late biosynthetic intermediate. However, in coq7 mutants the addition of exogenous Q produces the DMQ synthesis. Similar effect was produced by over-expressing ABC1/COQ8. These results support the existence of a biosynthetic complex that allows the DMQ₆ accumulation and suggest that Coq7p is a control point for the Q biosynthesis regulation in yeast. Electronic supplementary material  The online version of this article (doi:) contains supplementary material, which is available to authorized users. Received 04 September 2008; received after revision 22 October 2008; accepted 23 October 2008     

用微生物方法将木糖转化为酒精的研究

用酶异构和酵母发酵法从木糖生产酒精,是阔叶木和草类纤维原料半纤维素利用的一条可行途径。木糖溶液在异构酶的作用下,部分转化为木酮糖。JⅠ和JⅡ这两个酵母菌种利用木酮糖生产酒精较有前途,其中JⅡ的酒精产率可达理论产率的85%以上。甘蔗渣预水解液通过净化、酶异构之后,用JⅠ、JⅡ、Rasse XⅡ和古巴Ⅱ酵母进行发酵,四个菌种都能产生酒精,JⅠ和JⅡ的酒精产量比Rasse XⅡ和古巴Ⅱ高一倍左右。     

啤酒酵母水解提取混合氨基酸及稀土氨基酸配合物的制备

用酸解法(盐酸和硫酸)在有回流装置的反应器置恒温甘油浴装置的条件下水解啤酒酵母,制取混合氨基酸,与稀土化合物反应后,得到稀土氨基酸配合物,盐酸酸解法的特点是向水解液中加入稀土氧化物,中和大部分酸并用赶酸法除去余酸,硫酸酸解法的特点是直接用石灰乳中和水解液中的酸.