慢病毒载体及其介导的RNA干扰在基因治疗中的应用研究

主要就慢病毒载体及其介导的RNA干扰技术在基因治疗中的应用研究进行了综述,并对其在该领域具有的广阔前景进行了展望.慢病毒载体作为一种新型的载体,可有效地将携带的目的基因导入宿主细胞,并将其整合到宿主细胞基因组中,从而使目的基因得以持久稳定地表达.该载体因具有高感染性、高表达效率及不易诱发宿主免疫反应等优点,已成为基因治疗研究中的一个重要工具.RNA干扰技术可以特异性抑制或关闭特定基因的表达,因此该技术可广泛应用在基因功能探究和恶性肿瘤治疗等领域.由慢病毒载体介导的RNA干扰技术能持久、稳定、特异性地抑制各类细胞中特定基因的表达,在病毒感染、肿瘤等疾病的基因治疗中被广泛应用,成为生物医学领域的新热点.     

儿童闭塞性细支气管炎诊治及预后

儿童闭塞性细支气管炎是由于各种原因所致的气道细支气管炎症损伤后,气道进行不正当修复引所起的肺细支气管闭塞性疾病。论述了该病的发病原因、发病机制和临床表现,从抗炎治疗、对症支持治疗等方面阐述了治疗方法,并结合年龄、性别、病因、治疗、配合程度、种族差异等分析了儿童闭塞性细支气管炎的影响因素。     

乳腺癌Jab1蛋白调控Nov基因的表达受甲基化水平影响

为探讨癌基因Jab1在乳腺癌发生发展中的功能,首先在乳腺癌细胞MDA231中建立了慢病毒介导的Jab1基因的表达干扰系统,并通过人基因表达谱芯片分析结果以及实时定量PCR实验筛选出受Jab1调控的下游基因;此外,通过实时定量PCR以及Western blot实验证实Jab1干扰表达能降低Nov基因在转录和翻译水平表达,而且Nov启动子区域存在4个高甲基化CpG位点.进一步使用甲基转移酶抑制剂处理Jab1干扰表达细胞,发现与未使用抑制剂处理细胞相比,Nov基因的mRNA和蛋白质表达水平发生明显上调,说明Jab1基因调控Nov表达受甲基化水平的影响,提示Jab1可能是通过表观遗传学水平调控Nov基因的表达.     

非小细胞肺癌细胞A549对紫杉醇耐药机理研究

目的利用非小细胞肺癌细胞对紫杉醇的耐药株A549/taxol,研究其对紫杉醇耐药性的分子机理.方法通过长时间低浓度的紫杉醇处理A549细胞的方法获得其耐药细胞株A549/taxol,提取细胞总RNA并逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR观察其凋亡基因的表达情况,并通过不同siRNA处理细胞进行基因沉默,研究其在不同遗传背景下对紫杉醇的耐受情况.结果发现非小细胞肺癌细胞对紫杉醇的耐药株A549/taxol的基因表达紊乱,表现为ING5的高表达抑制了凋亡基因Bcl-2的表达水平,而Bcl-2是紫杉醇诱导细胞凋亡所必需的.结论以上结果初探了A549对紫杉醇耐药性的机制,为探寻紫杉醇化疗新策略提供了新的思路.     

检测AKT1基因E17K突变的高分辨率熔解曲线法（HRM）的建立及应用

建立并优化HRM方法检测AKT1基因的E17K(49G>A)突变,并在85例非小细胞肺癌中应用该法检测AKT1基因的E17K突变.设计、合成针对AKT1基因的E17K突变的引物、探针,优化不对称PCR条件及高分辨率熔解曲线(HRM)基因突变分析方法.对85例非小细胞肺癌标本提取的基因组DNA,应用HRM基因突变分析方法和直接测序的方法检测了AKT1基因的E17K突变情况.经优化后,设计的引物在不对称PCR反应条件下可扩增出良好的条带.检测探针与野生型模板的扩增产物杂交后,其解链温度要高于与突变型产物杂交的解链温度.野生型和突变型的质粒模板所产生的熔解曲线可见显著差异,相应的Tm值相差约 3.5℃.经HRM基因突变分析方法和直接测序法检测,在85例非小细胞肺癌标本检测到1例AKT1基因的E17K位点为杂合突变型,其余均为野生型.本研究建立的对AKT1 E47K突变检测的HRM方法是一种灵敏、准确、快速的方法.另外,本研究仅在非小细胞肺癌患者中发现频率极低的AKT1 E47K突变.     

鼻咽癌细胞核DNA倍体和颈淋巴结转移与预？…

目的：为加深对影响鼻咽癌（ＮＰＣ）预后因素的认识。方法：采用流式细胞仪（ＦＣＭ）对４４例ＮＰＣ癌细胞核ＤＮＡ进行检测,发现二倍本肿瘤（ＤＴ）１０例,近二倍体肿瘤（ｎＤＴ）１７例,非整倍体肿瘤（ＡＴ）１７例;４４例中,颈淋巴转移３５例,经放疗后３年追踪观察,鼻咽局部复发和（或）远处转移２４例。将不同ＤＮＡ倍体的ＮＰＣ、颈淋巴结转移和预后进行相关性分析。结果：ＮＰＣ ＤＮＡ倍体与转移之颈淋巴结及其大小     

FTIR assessment of the secondary structure of proteins in human breast benign and malignant tissues

The compositions of the secondary structures of protein in the human breast normal, hyperplasia, fibroadenoma and invasive ductal carcinoma tissues have been estimated from the Fourier self deconvolved spectra, the second derivative spectra and the curve-fitting analysis of the amide I bands in their spectra. Some parameters of the secondary structures of proteins in these 4 types of tissues are significantly different and located in separate ranges. Fibroadenoma tissue demonstrates the most remarkable difference in the compositions of α-helical and atypical helical structures. The carcinoma tissue has the highest ratio of the intermolecular β-sheet content and the intramolecular β-sheet content. This noticeable difference in the secondary structure may have important implications for analyzing the properties and types of human breast disease.     

CE与EP方案治疗小细胞肺癌的临床疗效评价

为观察CE与EP方案治疗小细胞肺癌的近期疗效和毒副反应,对52例小细胞肺癌患者按住院先后顺序,随机分为CE组(卡铂+足叶乙甙)和EP组(顺铂+足叶乙甙),化疗2周期后评价疗效。结果近期疗效方面,CE组CR6例,PR14例,总有效20例(76.9%);EP组CR5例,PR13例,总有效18例(69.2%),两组比较无差别(P>0.05)。在毒副反应方面,CE与EP两组发生Ⅱ度以上的胃肠道反应及骨髓抑制无差别,患者均能耐受。说明CE与EP方案治疗小细胞肺癌均有效,且近期疗效无差别,毒副反应均能耐受,均可作为小细胞肺癌一线化疗方案。     

RNA干扰在肿瘤转移研究中的应用

RNA干扰是与特定基因同源互补的双链RNA在体内以序列特异的方式引发靶基因的mRNA降解,从而导致转录后基因沉默的过程。由于其在基因沉默中的高度特异性和有效性,在基因功能和基因药物的研究中有很大潜力。综述了RNA干扰可能的分子机制、分子生物特性和其在肿瘤特别是肿瘤转移中的应用。     

肿瘤相关性胰蛋白酶原-2在胰腺癌初筛中的意义

摘要: 目的 研究胰腺癌患者血清肿瘤相关胰蛋白酶原-2在胰腺癌初筛中的意义。方法 收集北京军区总医院23例胰腺癌住院患者的治疗前血清标本和35 例正常对照者（健康体检者）血清标本。采用酶联免疫吸附法检测血清胰蛋白酶原-2含量。结果 血清胰蛋白酶原-2含量在正常对照组中位数为0.8ug/L,四分位间距0.6～1.2μg /L; 胰腺癌患者中位数为13.8μg /L,四分位间距2.3～60.7μg/L。胰腺癌组和正常对照组血清胰蛋白酶原-2水平有统计学差异( P＜0.01) 。以1.85ug /L为临界值作为诊断胰腺癌界定值的敏感度为91.4%,特异度为95.7%。结论 血清胰蛋白酶原-2检测可作为胰腺癌的一种初筛试验。