运用绿色荧光蛋白探讨肉葡萄球菌双精氨酸分泌途径

根据肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)TM300的基因组序列设计引物,经PCR扩增得到其tufA基因的启动子Peftu片段与大肠杆菌–葡萄球菌穿梭载体pBT2-Tat-GFP连接,构建了穿梭质粒pBT2-ETG.结果表明,穿梭质粒pBT2-ETG成功地转入大肠杆菌与肉葡萄球菌宿主中稳定表达具有活性的绿色荧光蛋白GFP,并被转运到肉葡萄球菌宿主的细胞壁,为进一步研究肉葡萄球菌双精氨酸(Tat)转运系统正确分泌其他外源蛋白奠定了实验基础.     

云南栘［木衣］叶提取物片段抗氧化活性及成分分析

目的:评价云南栘[木衣]叶萃取物的抗氧化活性,为云南栘[木衣]抗氧化功能食品、营养补充剂等的开发提供理论依据.方法:用系统溶剂萃取法将云南栘[木衣]叶的萃取物再分成石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水相4部分.用DPPH·法和总还原力法评价云南栘[木衣]叶4个不同萃取物的抗氧化活性.用DPPH·-HPLC-PDA和总还原力-HPLC-PDA柱前衍生法对云南栘[木衣]叶中的抗氧化成分进行了筛选.结果:云南栘[木衣]叶提取物不同极性分离物都具有良好的抗氧化活性,其中乙酸乙酯萃取物的萃取得率高达67.87%,DPPH·半清除体积质量分数为0.079mg/mL,总还原力的芦丁质量分数为(0.199 70±0.000 31)g/g,是云南栘[木衣]叶抗氧化活性的主要来源.云南栘[木衣]叶提取物中主要有9个抗氧化成分,主要集中于乙酸乙酯萃取物,其中4个为黄酮类化合物.结论:云南栘[木衣]叶是良好的天然抗氧化剂来源,具有抗氧化营养补充剂、功能食品的开发潜力,抗氧化成分筛选结果为云南栘[木衣]抗氧化功能的开发提供了方向.     

海洋放线菌S.areniocola CNS-205腺苷化结构域基因的克隆、表达和纯化

海洋放线菌S.arenicola CNS-205是首次报道的专属海洋性放线菌属Salinispora的代表菌株之一.选取海洋放线菌S.arenicola CNS-205非核糖体多肽合成酶氨基酸腺苷化结构域基因sare 0357,对其进行生物信息学分析后进行原核重组质粒的构建和表达及蛋白纯化.分别构建了pET-28a-sare 0357和pGEX-KG-sare 0357重组质粒,并转化E.coli BL21(DE3)进行不同诱导条件的诱导表达,sare 0357基因均以包涵体的形式表达.收集Sare0357重组蛋白包涵体,选取6mol/L的盐酸胍对其进行变性并将变性后的重组蛋白进行镍柱纯化.得到了可溶性的Sare0357融合蛋白.     

大薸对不同质量浓度畜禽废水的净化作用及生物学效应

实验以自然湿地中采集的大薸为研究对象,在室内模拟条件下首次研究了大薸在低质量浓度至高质量浓度畜禽废水条件下的净化作用及植物生理变化。并探讨了湿地植物大薸对废水的净化作用与生物学效应之间的相关性。研究结果表明：大薸对畜禽废水的CODcr、氨氮、总磷最高去除率分别达到82.33%、69.21% 和45.88%。大薸在不同质量浓度畜禽废水胁迫8 d后,大薸抗氧化系统酶活性总体呈下降趋势,畜禽废水质量浓度越高,植物损伤情况越明显。大薸叶片中起主要保护作用的酶是POD,变化幅度最明显,对畜禽废水胁迫的敏感性、应激性最强。大薸对畜禽废水的净化作用与大薸的生物学效应相关性较强。     

邻苯二甲酸二丁酯致小鼠卵巢毒性的实验研究

目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯对小鼠卵巢的影响及其机制.方法:320只小鼠分别灌胃不同剂量的邻苯二甲酸二丁酯(DBP)(0,100,250,500 mg/(kg·d))30天,在5 d,10 d,20 d,30 d时用分光光度法检测小鼠卵巢超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)的活性及丙二醛(MDA)的含量,用免疫组织化学法检测卵巢Bax蛋白的表达情况.结果:DBP降低了SOD、CAT、AKP、ACP的活性,增加了MDA的含量和Bax蛋白的表达.双因素方差分析表明,剂量因素对结果的影响大于时间因素.结论:DBP促进了细胞凋亡,抑制了卵巢的抗氧化能力.     

酒石酸亚铁法测定黄瓜中多酚含量

采用浸取法以乙醇为提取剂从黄瓜中提取多酚类物质,利用酒石酸亚铁对多酚的显色反应表征提取物中抗氧化物质的含量,通过正交试验对黄瓜中多酚的提取条件进行优化.结果表明:黄瓜中多酚的最佳提取条件为95%乙醇作溶剂,提取温度50℃,提取时间为90 min,所得黄瓜中多酚类化合物的提取量为15.29mg/g.     

百合花挥发油的提取及抗氧化活性的研究

采用水蒸气蒸馏法提取干百合花挥发油,并测定了挥发油的抗氧化能力。结果显示:百合花挥发油的提取率为0.018 5%,在0.350~7.00mg/m L浓度范围内对·OH的清除能力为3.13%~73.65%;在0.20~1.20mg/m L浓度范围内对DPPH·的清除能力为39.13%~84.06%;通过与VC作为清除剂进行对比,以IC50作为参数,其对·OH的清除能力弱于VC,而对DPPH·的清除能力与VC相当。可见,百合花挥发油具有抗氧化活性,一定的清除自由基能力,可作为一种挥发油提取来源。     

基于DPPH-HPLC技术的马粪海胆抗氧化活性指纹图谱初步研究

采用基于DPPH-HPLC技术的抗氧化活性指纹图谱对海洋中药马粪海胆来源进行鉴别。对具有较好抗氧化活性的马粪海胆水提物中的抗氧化活性成分进行筛选,基于各抗氧化成分的指纹图谱,结合相似度分析对不同来源马粪海胆进行鉴别研究。结果表明,该方法可以对不同来源的马粪海胆样品进行正确区分,有望成为海洋中药真伪鉴别的新方法。     

具有激活RB蛋白生物活性小肽的研究

构建了慢病毒载体表达MP1多肽的RFP融合蛋白(RFP-MP1),并研究了它对人肺腺癌细胞株H1299和人骨髓瘤细胞株U2-OS增殖的影响.U2-OS和H1299细胞中RFPMP1的表达导致了RB在蛋白水平上的积累,使细胞生长受到抑制.此外,细胞流式结果发现RFP-MP1使细胞周期阻滞在G1期.进一步研究表明RFP-MP1能够阻滞RB对E2F活性的抑制.这些结果表明,11肽的MP1能够上调肿瘤细胞中RB蛋白的表达水平并且抑制其生长.     

壳斗科植物种子的多酚类含量及抗氧化能力

【目的】测定青冈栎Cyclobalanopsis glauca(Thunb.)Oerst.、饭甑青冈Cyclobalanopsis fleuryi(Hickel.et A.Camus)Chun ex Q.F.Zheng、大叶栎Quercus griffithii Hook.f.et Thoms ex Miq.、栲Castanopsis fargesii、椆木Lithocarpus thalassica(Hance)Rehd.种子中的多酚含量,评价其提取物的抗氧化能力,并分析多酚含量与抗氧化能力的关系。【方法】采用Folin-酚法测定多酚含量,通过DPPH·和ABTS·自由基清除法评价种子提取物的抗氧化能力。【结果】在选取的5种壳斗科植物种子中,饭甑青冈的多酚含量最高(14.16%),其次为大叶栎(10.89%),栲的含量最低(0.44%);各提取物均表现出良好的抗氧化能力,其中青冈栎的半清除率质量浓度IC50均优于抗坏血酸(Vc),饭甑青冈IC_(50)与Vc相当。【结论】青冈栎与饭甑青冈种子提取物可作为天然抗氧化剂应用于保健品、化妆品乃至药品等行业。