二乙基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化-肝癌动物模型的建立

目的 建立大鼠肝纤维化-肝癌模型并动态观察大鼠肝纤维化-肝癌发生过程中的病理形态特点.方法 用0.01％二乙基亚硝胺（DEN）溶液间断喂养SD大鼠诱发肝癌,对大鼠肝脏在不同诱癌阶段的病理变化进行动态观察.结果 用药第4周后,肝细胞点状坏死及炎性细胞浸润;8周时,肝细胞严重脂肪变性、灶性坏死,门管区出现纤维组织增生;9-12周时,增生的胶原束包绕并分割肝小叶,正常的肝小叶结构被破坏,假小叶形成;15周后存活大鼠均形成肝癌,肝癌细胞排列成条索状或团块状,诱癌组为100％成癌（8/8）.结论 成功建立从肝纤维化发展成肝癌的动物模型,设立间歇期提高了大鼠癌变末期的成活率,该模型是动态研究肝癌发生发展进程的理想动物模型.     

肝癌相关基因MEF2D反义RNA的鉴定及分析

鉴定和分析肝癌细胞中新的天然反义RNA MEF2D-AS根据已建立的双链RNA文库筛选与肝癌相关的反义RNA.通过RT-qPCR验证其反义RNA的存在,采用cDNA末端快速扩增技术获得其全长序列,并检测HepG2细胞经5-Aza-dC处理前后MEF2D基因正反义链表达量的变化.结果显示,成功鉴定出1条全长为1 265bp的新的天然反义RNA,并预测其属于长链非编码RNA(long non-coding RNA,简称为lncRNA),命名为MEF2D-AS.经5-Aza-dC处理后,MEF2D-AS的表达量升高,而MEF2DmRNA的表达量降低.证实了MEF2D-AS的存在并预测其属于长链非编码RNA,且与MEF2D正反义RNA是反相关关系.此研究结果可为进一步探讨肝癌发生机制提供参考.     

基于磁分选技术和间接免疫荧光技术的肺癌A549细胞的分离检测

采用磁分选技术及间接免疫荧光技术分离检测肺癌循环肿瘤细胞(CTCs).将表皮生长因子受体(EGFR)抗体连接到四氧化三铁(Fe3O4)磁珠表面构建免疫磁珠(MNPs-Anti-EGFR),通过EGFR抗体和肺癌A549细胞的表面抗原的特异性结合,将免疫磁珠与肺癌细胞结合.通过磁场作用,使肺癌细胞在磁场的作用下从混合细胞中分离富集.分离出的细胞利用间接荧光技术在其细胞表面连接结合PE荧光团的特异性抗体,并用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对细胞核染色以定位细胞位置.通过倒置荧光显微镜的观察,从而实现对肿瘤细胞的定量计数检测.实验结果显示该方法对肺癌A549细胞具有较好的检测灵敏度和检测下限,检测下限可达3 cells/m L.     

LITAF基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定

目的：探讨构建人脂多糖诱导肿瘤坏死因子释放因子(LITAF)基因的过表达慢病毒载体的技术方法并检测其体外表达目的基因的水平。方法：设计LITAF基因引物,应用聚合酶链反应(PCR)的方法扩增LITAF基因片段,应用EcoRI、BamHI酶切LV8载体,通过连接酶将LITAF基因片段连接至线性化的LV8载体上,应用酶切及测序方法鉴定LITAF-LV8重组质粒。将其包装慢病毒后感染293T细胞(人胚肾细胞),观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,验证后感染肝癌细胞株HepG2。RT-PCR和Western-blot鉴定感染后HepG2中LITAF的表达。结果：LITAF基因在慢病毒感染的HepG2细胞中的表达显著高于对照组细胞。结论：成功构建了过表达LITAF的HepG2细胞株,为后期研究提供了实验基础。     

不同转移潜能人肝癌细胞系中GP73糖基化修饰水平比较

 利用抗体亲和层析纯化不同转移潜能人肝癌细胞系中的高尔基体蛋白73（GP73）,比较不同转移潜能人肝癌细胞系中GP73 糖基化修饰水平,为GP73 成为肝癌标志物提供依据。纯化的GP73 通过质谱鉴定后,分别进行蛋白印迹（western blot）和凝集素印迹（lectin blot）分析,比较其在不同转移潜能肝癌细胞系的糖基化修饰水平。实验发现,GP73 含有伴刀豆凝集素（ConA）、橙黄网胞盘菌凝集素（AAL）、小扁豆凝集素（LCA）和红腰果E 型凝集素（PHA-E）识别的糖型,且单位GP73 的LCA、PHA-E 识别的岩藻糖和平分型糖型含量在肝癌细胞Huh7、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3 中有升高趋势。研究表明,单位GP73 岩藻糖和平分型聚糖结构随肝癌细胞的转移潜能升高而增多。     

ING5在食管鳞癌中的表达及意义

为分析ING5的表达与食管鳞状细胞癌的发生之间的联系,在不同分期的食管鳞癌患者的癌组织中,通过RT-PCR的方法对ING5的表达水平进行检测.结果发现,RT-PCR检测到食管鳞癌组织ING5mRNA表达下调,ING5mRNA表达的下调可能与食管鳞癌的发生密切相关.     

p16与原发性肝细胞癌的研究进展

p16基因又称肿瘤抑制基因(MTS1),是近年来发现的一个重要的抑癌基因,在细胞周期中发挥重要的调节作用.现对p16基因的结构、p16蛋白的作用途径以及该基因突变与原发性肝细胞癌的关系进行综述.     

RT-PCR法检测外周血中AFPmRNA的研究

AFPmRNA是成人肝细胞癌变后AFP基因转录产物.RT-PCR法检测外周血中AFPmRNA对原发性肝癌的早期诊断、鉴别诊断及预测转移均有重要意义.探讨了AFPmRNA的基因特点、RT-PCR检测方法及AFPmRNA的临床检测意义.     

解毒酶GSTM1和GSTT1缺失与广西肝细胞癌相关性研究

为了研究谷胱甘肽硫转移酶 GSTM1和 GSTT1基因多态性与肝细胞癌风险的相关性 ,在广西黄曲霉毒素(AFB1)高污染区 ,用 PCR技术检测肝细胞癌患者和非肝细胞癌成人血样中 GSTM1和 GSTT1的存在或缺失。肝细胞癌组 (HCC) 181例 ,经病理确诊为肝细胞癌 ,对照组 36 0例 ,由非肝细胞癌成人组成。结果显示 ,GSTM1和 GSTT1零基因型的频率在对照组分别为 4 7.8%和 4 2 .7% ,在肝细胞癌组分别为 6 4 .6 %和 5 9.7% ,两组间的差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1)。GSTM1和 GSTT1联合零基因型在肝细胞癌组与对照组分别为 38.2 %和18.5 % ,两组间差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。说明 GSTM1和 GSTT1零基因型在当地与 AFB1诱发肝细胞癌的风险相互关联。     

鼻咽癌细胞凋亡与血管生成的关系

摘要：为了探讨鼻咽癌（NPC）细胞凋亡及瘤内血管生成与患者预后的关系,采用TdT酶介导的生物素化dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）和免疫组化S-P法,分别检测20例正常鼻咽粘膜组织及73例NPC组织的细胞凋亡率（Apoptosis Rate AR）、瘤内微血管密度（MVD）及血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达。其中,NPC复发转移组24例,未复发组49例。结果表明,正常鼻咽粘膜AR显著高于NPC（P〈0．01）,NPC复发转移组的MVD及VEGF显著高于未复发组（P〈0．05）,而AR则显著低于未复发组（P〈0．05）,MVD与VEGF、MVD与AR呈正相关（P〈0.05）。在NPC发展过程中,细胞凋亡明显受到抑制,VEGF是血管生成的重要因子,并通过促进血管生成影响患者的预后,说明细胞凋亡与NPC患者的预后有关系。