新型肠毒素蛋白SElK编码基因的克隆测序、生物信息学分析和表达载体构建

采用微波加热法提取金黄色葡萄球菌基因组DNA,根据NCBI上登录的肠毒素基因sek设计引物,PCR克隆selk基因,对selk基因测序并进行生物信息学分析,在此基础上构建重组表达质粒p ET-32a(+)-selk.测序结果表明本研究克隆得到具有正确编码序列的新型肠毒素selk基因;Protparam分析表明在一级结构水平上该蛋白具有较高的热稳定性;亲疏水性分析表明SEl K蛋白是一个亲水性较高的蛋白质;同源建模表明SEl K蛋白的domain B结构域缺乏传统肠毒素所具有的胱氨酸环,但SEl K蛋白domain B中β-折叠片数量比传统肠毒素更高.这些结果为进一步研究SEl K蛋白的结构与功能奠定基础.     

两种农药对绿萝根活力及可溶性糖、游离氨基酸含量的影响

研究两种农药对绿萝根系活力及可溶性糖、游离氨基酸含量的影响.结果表明:吡蚜酮各浓度可显著促进绿萝根活力上升,百菌清8、64mg/kg能显著提高绿萝根活力;吡蚜酮处理后绿萝可溶性糖含量呈上升趋势,而游离氨基酸含量则显著下降;百菌清8、16、32、64mg/kg处理后可溶性糖含量显著下降,游离氨基酸含量随百菌清浓度上升呈现出先上升后下降的变化趋势,表明低剂量百菌清诱导了绿萝游离氨基酸的Hormesis效应.     

金黄色葡萄球菌调控基因agr及sae对其耐热核酸酶分泌的影响

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)是一种重要的人畜共患病病原,它能产生一种由nuc基因编码的胞外耐热核酸酶。耐热核酸酶是金黄色葡萄球菌的毒力因子之一,agr及sae位点是编码金黄色葡萄球菌的主要毒力调节因子,研究发现sae调节位点在影响耐热核酸酶的表达上占主导地位。分析金黄色葡萄球菌各毒力因子和金黄色葡萄球菌现有疫苗,为解决金黄色葡萄球菌的耐药性,寻找更好的防治方法,有必要进行探索性实验寻找一种因素或药物,用来阻抑sae调控因子对耐热核酸酶的分泌过程进行调节,从而为金黄色葡萄球菌的防治研究提供一种新材料。     

金黄色葡萄球菌VBNC 状态的诱导条件和EMA-qPCR 检测

为建立金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus) 活的非可培养( VBNC) 状态的诱导条件模型,考察了温度、盐度和酸度3 个因素对金黄色葡萄球菌细菌可培养数的影响,通过正交试验优化得到了VBNC 状态的诱导条件,同时观察细菌可培养数的变化,建立了DNA 结合染料叠氮溴乙锭(EMA) 与qPCR 技术相结合检测VBNC 金黄色葡萄球菌的方法. 实验结果表明:细菌可培养数受酸度的影响最大,VBNC 状态的最佳诱导条件为菌液在含15%NaCl 和0. 3%乙酸的营养肉汤培养基中于4 ℃下培养12 d;通过正交试验诱导后的不可培养菌可由EMA-qPCR 方法有效检出,其与qPCR 法的Ct 值( 荧光信号达到设定的阈值所经历的循环数)之差在1. 29 ~8. 56 之间变化.     

大气压低温等离子体的活性氧成分分析及其杀菌效应研究

系统分析了以Ar+O₂ (2%)为气源, 以直流辉光放电方式激发的大气压低温等离子体中的活性氧(ROS)成分及其杀菌的生物学效应。采用电子自旋共振(ESR)等技术方法, 对等离子体的ROS成分进行了检测分析, 同时采用低温等离子体在水下作用的方式探究了其对金黄色葡萄球菌的杀灭作用。通过电子自旋共振分析, 直接检测出两种活性氧自由基, 分别是羟自由基(OH?)和单线态氧(¹O₂), 间接证明了超氧阴离子(O₂^-?)的存在。同时用臭氧检测仪等对O₃和H₂O₂等进行了定量分析。等离子体能有效杀灭金黄色葡萄球菌, 10分钟杀菌率能达到99.9%。 低温等离子体中含有大量的ROS成分, 并能有效杀灭金黄色葡萄球菌, 可能的杀菌机制是ROS成分诱导细菌细胞内脂质、蛋白质、DNA等过氧化。研究结果提示大气压低温等离子体在临床医学研究中具有潜在的巨大应用价值。     

双稠哌啶类生物碱对5个环境细菌菌株的抑制作用

测定了槐定碱、槐胺碱、苦参碱、野靛碱、氧化苦参碱和苦豆草总生物碱对大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、白色葡萄球菌 (即表皮葡萄球菌 )的最低抑菌浓度 (MIC)。结果表明 5种生物碱和苦豆草总生物碱对 5个环境细菌菌株的生长均产生了明显的抑制作用。5种生物碱对 5种环境细菌的最低抑菌浓度除了野靛碱对变形杆菌为 5× 1 0 - 3 mol/L ,其它均在 2× 1 0 - 2 ～ 5× 1 0 - 2 mol/L之间。然而苦豆草总生物碱对 5种环境细菌的最低抑菌浓度却明显较 5种生物碱的为低 ,其中对大肠杆菌和枯草杆菌的最低抑菌浓度达到 5× 1 0 - 3 mol/L。结合双稠哌啶类生物碱在植物中的含量和分布 ,讨论了双稠哌啶类生物碱在开发防治农林细菌病害及医药产品方面的应用价值和在植物化学生态学中的防御作用。     

江西井冈山发现金斑喙凤蝶

最近在江西井冈山调查发现并采集到一例金斑喙凤蝶的雄性标本.经核实,此物种确为井冈山蝶类新记录.对金斑喙凤蝶发现地的生境进行了初步调查,同时分析了金斑喙凤蝶的致危因素并提出保护建议.     

不同光照处理下的绿萝叶片及叶片解剖结构

采用徒手切片制作方法,对绿萝在不同光照条件处理的叶片解剖结构进行了系统研究,比较分析了叶片面积、叶片长宽、上表皮组织、栅栏组织、海绵组织、下表皮组织和叶片厚度这几项指标,得出了绿萝叶片面积的拟合公式.实验结果表明：不同光照对绿萝叶片的面积、上表皮厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度和下表皮组织厚度有较大的影响,但对绿萝叶片的厚度无显著影响.     

表皮葡萄球菌sigB基因调控生物膜合成的研究

sigB基因编码的S igm a factor B(σB)蛋白是一个普遍性的可通过与RNA聚合酶结合来调控多种基因表达的因子.为了验证表皮葡萄球菌sigB基因的调控作用,构建了含四环素抗性基因的打靶载体并采用双交换同源重组的方法对表皮葡萄球菌RP62A(ATCC35984)中sigB基因进行敲除.sigB基因敲除后的菌株,与出发菌株相比生物膜形成能力急剧下降,而在sigB基因座的回补菌株中,生物膜形成能力又恢复到接近出发菌株的水平.RT-PCR分析生物膜相关基因sarA(Staphylococcus Accessory Regu lator),icaA(icaADBC操纵子中的第一个基因)发现,sigB基因从转录水平上对二者进行正调控.lacZ报告系统的体外实验揭示了SigB可以通过作用于sarA的启动子区域正调控sarA表达.     

生姜内生细菌抗MRSA菌株筛选

生姜中含有多种具抗菌作用的内生细菌,其中也有对“超级细菌”耐甲氧西林金色葡萄球菌（Mcthicillin—resistant Staphylococ-otisaureus,MUSA）有拮抗作用的菌株。从生姜中分离纯化得到20株内生细菌,并采用牛津杯法进行抗MRSA菌株筛选。结果表明,通过初筛得到8株对MRSA有较强拮抗作用的菌株,复筛得到2株拮抗作用显著的菌株,其发酵产物对MRSA的相对抑菌率分别达到了79．17％和93．75％,有开发潜力。