全文获取类型
收费全文 | 366篇 |
免费 | 2篇 |
国内免费 | 27篇 |
专业分类
系统科学 | 1篇 |
丛书文集 | 14篇 |
教育与普及 | 19篇 |
理论与方法论 | 3篇 |
现状及发展 | 2篇 |
综合类 | 356篇 |
出版年
2023年 | 2篇 |
2021年 | 1篇 |
2020年 | 2篇 |
2019年 | 5篇 |
2018年 | 3篇 |
2017年 | 2篇 |
2016年 | 8篇 |
2015年 | 7篇 |
2014年 | 4篇 |
2013年 | 9篇 |
2012年 | 14篇 |
2011年 | 12篇 |
2010年 | 10篇 |
2009年 | 8篇 |
2008年 | 25篇 |
2007年 | 17篇 |
2006年 | 22篇 |
2005年 | 19篇 |
2004年 | 15篇 |
2003年 | 18篇 |
2002年 | 20篇 |
2001年 | 15篇 |
2000年 | 16篇 |
1999年 | 13篇 |
1998年 | 9篇 |
1997年 | 15篇 |
1996年 | 13篇 |
1995年 | 31篇 |
1994年 | 9篇 |
1993年 | 7篇 |
1992年 | 8篇 |
1991年 | 11篇 |
1990年 | 15篇 |
1989年 | 5篇 |
1988年 | 2篇 |
1987年 | 2篇 |
1986年 | 1篇 |
排序方式: 共有395条查询结果,搜索用时 125 毫秒
381.
目的:为制备重组小鼠Pem(以下简称mPem)-谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白,作为研究mPem蛋白功能的材料,方法:根据携带小鼠Pem基因编码序列的模板质粒pEGFP/mPem设计合成特异性引物,PCR扩增小鼠Pem基因编码序列,并插入融合蛋白原核表达载体pGEX-4T-3中,得到重组表达质粒pGEX-4T-3/mPem,用此重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,IPTG诱导重组菌表达mPem蛋白,SDS-PAGE及Western Blot鉴定表达产物。结果:重组菌株明显诱导表达出预期相对分子质量49000的融合蛋白。结论:成功构建了mPem-GST原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达出mPem-GST融合蛋白,为mPem蛋白功能的研究打下了基础。 相似文献
382.
将PCR扩增得到的apoAⅠ基因片段插入胞内表达质粒pPIC3.5K,重组的pPIC3.5K apoAⅠ用BglⅡ酶切后,转化PichiapastorisGS115菌株,筛选获得G418高抗性转化子,再通过PCR鉴定证实apoAⅠ基因已整合到染色体上.其转化子经摇瓶发酵和甲醇诱导,收集细胞裂解后,用SDS PAGE与Westernblotting检测,证明胞内有明显的rApoAⅠ表达,其分子质量与人血浆提取的ApoAⅠ相同. 相似文献
383.
通过对鸡白痢沙门氏菌毒力质粒pSPUV上入侵质粒抗原J蛋白和质粒共转移调控因子的编码基因ipaJ和traJ的序列分析,在特异区域设计PCR引物,经沙门氏菌属不同种及常见肠道致病菌的交叉验证,筛选出三对鸡白痢沙门氏菌特异检测引物ipaJ-417、traJ-387、traJ-476.并且调试出一种利用两种DNA聚合酶的直接三重PCR检测体系:invA-211/traJ-387/16S-495,可以对鸡白痢沙门氏菌进行快速准确的鉴定. 相似文献
384.
利用E .coli和酿酒酵母的穿梭质粒pYES2为载体 ,将地衣芽孢杆菌α 乙酰乳酸脱羧酶基因导入酿酒酵母中 ,构建了重组质粒pYEA ,实现了α 乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达 .α 乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达与菌体生长有关 .pYEA质粒在无选择压力的发酵条件下 ,仅能保持一定的稳定性 ,并具有降解α 乙酰乳酸的能力 ,但丢失率比较高 . 相似文献
385.
大肠杆菌菌毛抗原K88与热稳定肠毒素ST融合基因植物表达载体的构建及其在烟草中的初步表达 总被引:5,自引:1,他引:5
利用DNA重组技术,将编码大肠杆菌黏附素蛋白K88与热稳定肠毒素ST的融合基因的序列片段克隆到植物表达载体pCANBIAl3O2中,成功地构建了植物重组表达质粒pCANBIA—K88-ST,并将其转化农杆菌EHAl05.利用农杆菌介导法转化烟草,并初步获得转化体。为K88-ST基因的进一步研究奠定了基础。 相似文献
386.
387.
采用质粒DNA评价法评价哈尔滨市市区、郊区和清洁对照点的PM10和PM2.5样品的生物活性及颗粒物中金属元素对质粒DNA的氧化性损伤能力.研究结果表明,水溶样和全样样品都具有一定的活性,样品的TD40值为67.9~1 570 μg/mL,说明PM的生物活性主要与其来源和性质有关;颗粒物中具有生物活性的元素主要为过渡金属,其次为碱金属或其他主族元素,除过渡金属外,稀土元素对颗粒物的生物活性也具有显著影响.水溶样的TD40值与Y的浓度呈正相关,与La,Lu,Ho,Sm的浓度呈负相关,说明在对质粒DNA损伤过程中,Y拮抗La,Lu,Ho,Sm的损伤作用;全样的TD40值与元素Cs,La,Mn,Pb,Tm,Gd的浓度呈正相关,与Tb,Ni,Yb,Er,W,Cd,In的浓度呈负相关,在对质粒DNA损伤过程中,元素Cs,La,Mn,Pb,Tm,Gd协同拮抗Tb,Ni,Yb,Er,W,Cd,In的损伤作用. 相似文献
388.
核转录因子PPARγ与多种重大的疾病有密切关系 ,是近年来基础研究的热点及重要药物筛选靶点 .作者将一个表达PPARγ1全蛋白的重组质粒转染人Jarket细胞 ,通过RT PCR确定其表达后 ,与另一个含有PPRE元件和荧光素酶报告基因的质粒 pTK PPRE瞬时共转染细胞 ,检测到较高水平表达的荧光素酶 .将共转染的细胞以PPARγ的强激活物 15d PGJ2刺激后 ,荧光素酶的表达水平大幅度上升 .实验结果表明 ,已成功地建立了PPARγ转录激活系统 .这对于PPARγ激活剂的研究开发及相关基础研究具有重要作用 . 相似文献
389.
结合PCR扩增快速筛选鉴定重组质粒 总被引:2,自引:1,他引:2
针对如何方便快捷筛选鉴定阳性克隆(重组质粒),本在实验室研究的基础上,创建了一种结合聚合酶链式反应简便快筛选鉴定阳性克隆的方法,用和Triton裂解液裂解菌落,离心后上清作为模板,再用特异引物进行PCR扩增,2h就可以得出结果,本方法具有节约省时,重复性好,结果直观,准确等优点,这为从事分子生物学研究的实验室快速筛选阳性克隆提供了方便。 相似文献
390.
应用DNA重组技术构建了猪瘟病毒E2 基因与IL 2基因的双表达真核表达载体 ,观察其表达水平 ,并对其免疫增强效果进行了观察。结果是构建了猪瘟病毒E2 基因与白细胞介素 2的真核表达质粒pIRSTIL 2。将质粒转染BHK 2 1细胞 ,可在体外表达E2 和有生物活性IL 2。pIRSTIL 2质粒能诱导产生CSFV的特异性免疫反应。pIRSTIL 2所诱导的免疫应答反应比使用单表达质粒pIRST强。实验表明 :IL 2与猪瘟病毒E2 基因构建的双表达基因疫苗能有效提高基因疫苗的免疫效果 相似文献