h TNF-α cDNA的酶切鉴定

本文对Sepharose 2B层析分离后的重组质粒pGEM-1用E CORI及HindⅢ限制性内切酶进行切割,电泳分析结果表明用Sepharose 2B层析分离的质粒纯度可满足于克隆片段的酶切图谱分析。     

一种用于中药配方优化的DNA算法

提出了一种用于中药配方优化的DNA算法，该算法基于质粒DNA技术。首先将中药配方优化问题转化为求无向图的最大权团问题：选取6种具有抑制大肠杆菌生长功效的中药作为图的顶点，分别做抑菌试验，将它们的抑菌圈直径作为顶点的权。然后两两配对进行抑菌试验以确定它们在图中是否有边连接。这样构造了一个顶点赋权的无向图，这个图的最大权团具有最大的抑菌效力，也是这些中药的最佳配伍。求图的最大权团是一个典型的NP．完全问题，而DNA计算具有求解该问题的能力。该方法的提出探讨了DNA计算实用的可能性。     

人扁桃体淋巴细胞cDNA质粒重组体的构建

目的：通过构建人扁桃体淋巴细胞cDNA质粒重组体，为深入研究淋巴细胞的生物学功能奠定实验基础。方法：采用DNA重组技术，以人新鲜扁桃体淋巴细胞为实验材料从中提取mRNA，以mRNA为模板合成cDNA，然后与质粒pSPORTI进行定向连接并转入到E．coliJM109中进行分子克隆。结果：阳性克隆占90％，阴性克隆占10％；转化率为1．35×104克隆／微开连接体系；插入片段长度为0．5～2．3Kb，平均1．3Kb。结论：人扁桃体淋巴细胞cDNA质粒重组体构建成功。     

利用Ti质粒介导的二元载体法向小麦导入几丁质酶 …

以小ＮＰＦＤ、９４－１６７、鄂恩一号３个品种的幼胚，幼穗为受体材料，利用Ｔｉ质粒介导的二元载休不幸针含有几丁质酶基因的质粒ｐＢｃｈ导入小麦，经过抗性筛选，ＰＣＲ检测，获得一株基因小麦，证实了外源几丁质酶基因已整合到小麦基因组中。     

新型免疫佐剂——富含CpG寡核苷酸的重组质粒研究取得重大进展

CpG寡脱氧核苷酸（CpG oligodeoxynucleotide，CpG ODN）是一种广泛存在于细菌DNA中的、非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤及特定侧翼碱基所构成的DNA片段。     

磷酸钙法转染哺乳动物非贴壁细胞

对一种哺乳动物的非贴壁细胞———ＢＡＬＢ／Ｃ近交系小鼠肥大细胞瘤细胞株Ｐ８１５进行了Ｇ４１８敏感浓度以及甘油耐受性的测定；并通过磷酸钙法用含ＨＣＶＣ、Ｅ１、Ｅ２基因以及筛选标记基因———ｎｅｏｒ基因的质粒ｐＲｃ／ＣＥ２进行了转染。经Ｇ４１８筛选，获得了Ｇ４１８抗性细胞：Ｐ８１５－ＣＥ２。目前，Ｐ８１５－ＣＥ２细胞在Ｇ４１８选择压力下，已连续筛选８０余天，成功传代１２次，提示转染获得成功。实验表明：被转染细胞是否贴壁，不是决定磷酸钙法转染成功与否的决定因素；为了制备符合转染要求的合适的磷酸钙———ＤＮＡ混合物，所需各试剂的用量应该被优化。     

c-Jun氨基末端激酶3结构域突变质粒的构建、鉴定与转染

为构建c-Jun氨基末端激酶3 (c-Jun N-terminal kinase3,JNK3)的p VP16-eGFP-Myc-JNK3活化环(activation-loop,A-loop)结构域突变型重组质粒,通过A-loop突变型JNK3的c DNA序列以及p VP16-eGFP-Myc的酶切位点设计引物,PCR扩增目的基因,使用限制性内切酶Mlu I与Xba I将基因克隆到p VP16-eGFP-Myc真核表达载体中,构建p VP16-eGFP-Myc-JNK3(A-loop)结构域突变型重组质粒。转化后,通过双酶切鉴定与DNA测序判断是否成功构建重组质粒,使用Trans IntroTMEL Transfection Reagent转染人胚肾(human emborynic kidney,HEK) 293T细胞,通过荧光显微镜下观察融合蛋白表达情况。结果表明:构建p VP16-eGFP-Myc-JNK3 (A-loop)结构域突变型重组质粒,双酶切鉴定和测序结果显示构建成功; p VP16-eGFP-MycJNK3 (A-loop)成功转染HEK293T细胞且表达。鼠源JNK3结构域突变型质粒构建成功,对进一步研究JNK3结构域在相关疾病的作用和机制提供实验工具。     

水溶液中的环状DNA超螺旋空间构象

质粒DNA水溶液的喇曼光谱研究表明,854和1-083-cm-1特征峰反映了DNA主链骨架三级结构的振动状态;表征脱氧核糖中C-C伸缩振动的969-cm-1峰,其相对强度值介于线性DNA在水溶液和在纤维状态下所得数值之间(0.46＜0.83＜1.10);DNA中胸腺嘧啶的堆积反应活性增加,A-T间氢键能减弱.这些参数是辨认环状DNA分子三级结构的有效依据.     

一株吡啶降解菌的生理生化特性研究

从活性污泥中筛选了一株能以吡啶为唯一碳、氮源的细菌,经鉴定为脱氮副球菌（Paracoccus denitrificans W12）。W12菌具有壮观霉素和潮霉素抗性。降解实验结果表明,W12菌能够将505.4mg/L的高浓度吡啶在26小时内完全降解,但不具有降解苯酚和喹啉的能力。质粒提取实验结果显示,W12菌含有两个大质粒,消除质粒后菌株的吡啶降解能力明显低于野生菌,因此该菌株所携质粒可能与W12菌的吡啶降解能力有关。     

抗α毒素单链抗体基因表达载体的构建

将2种抗A型产气英膜梭菌α毒素单链抗体（ScFv）基因ScFv－2E3和ScFV-1A8分别克隆至表达质粒pUC119,pET-20b,pET-28a和pHOG21中,构建了重组质粒PUC2E3和pUC-1A8,pET20b-2E3和pET20b-1A9,pET28a-2E3和pET28a-1A8以及pHOG-2E3和pHOG-1A8,然后分别转化至大肠杆菌中,提取质粒,并进行酶切鉴定和核苷酸序列分析,结果表明构建的重组质粒中均含目的ScFv基因片段,说明已成功构建了8个含ScFv基因的表达质粒。